杨珂
- 作品数：62 被引量：141H指数：7
- 供职机构：重庆医科大学附属儿童医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- microRNA 26b-5p靶向下调p300对人脐带间充质干细胞的增殖作用
- 2015年
- 目的探讨潜在microRNA靶向下调p300表达水平对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord derived mesenchymal stem cells,h UC-MSCs)增殖的影响。方法通过双荧光素酶报告基因(Firefly/Renilla Luciferase)系统筛选出作用于p300 3'UTR的目标microRNA,mimic转染UC-MSCs后RT-q PCR检测miRNA表达水平的变化,Western blot检测p300蛋白水平变化,RT-q PCR和Western blot检测多潜能转录因子表达水平的变化,MTT法检测UC-MSCs增殖能力的变化,并比较克隆形成能力的差异。结果证实mir 26b-5p通过不完全互补配对结合p300的3'UTR区,显著降低了荧光素酶的相对活性(P<0.05);mir 26b-5p mimic转染后抑制p300蛋白表达水平(P<0.05),并下调Nanog基因和蛋白表达水平(P<0.05);mir 26b-5p mimic转染后UC-MSCs的增殖受到抑制(P<0.05),克隆形成能力下降(P<0.05)。结论 UC-MSCs高表达mir 26b-5p能够显著抑制p300蛋白表达和干性相关基因Nanog的表达,并且抑制UC-MSCs的增殖能力和克隆形成能力。
- 李娅莎杨珂朱静毕杨谭彬田鹤锋易勤钟海英
- 关键词：人脐带间充质干细胞NANOG
- 机械敏感离子通道Trpm7在LIPUS促进牙髓间充质干细胞成骨分化中的作用机制的研究被引量：1
- 2018年
- 该文主要研究低强度脉冲超声(low-intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进牙髓间充质干细胞(dental pulp mesenchymal stem cells,DPSCs)成骨分化,以及瞬时受体电位M7(transient receptor potential melastatin 7,Trpm7)在其中发挥的作用。培养人DPSCs,流式细胞术检测其表面分子标志表达,阿利新蓝、茜素红及油红O染色检测其成软骨、成骨和成脂分化能力。ALP活性、ALP染色和茜素红染色观察LIPUS促成骨分化的能力。实时定量PCR检测LIPUS处理组与对照组成骨分化相关基因OPN、OCN、RUNX2表达的差异以及不同时间点两组Trpm7 m RNA表达水平的变化。ALP活性检测LIPUS及不同浓度Trpm7抑制剂2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-aminoethoxydiphenyl borate,2-APB)对成骨分化能力的影响。实验分为对照组、LIPUS组、LIPUS+二甲基亚砜(DMSO)组和LIPUS+2-APB组,ALP和茜素红染色观察各组成骨分化能力,Western blot检测各组OPN、OCN和RUNX2的蛋白表达。结果显示,成功培养DPSCs,LIPUS处理后ALP和茜素红阳性染色明显增多,ALP活性增强(P<0.01);OPN、OCN、RUNX2的m RNA表达水平显著增加(P<0.05),LIPUS处理第2天和第5天Trpm7的m RNA表达水平有明显升高(P<0.05)。2-APB作用后明显下调ALP活性(P<0.01)。LIPUS组、LIPUS+DMSO组与对照组相比,ALP和茜素红阳性染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达均显著增加,而LIPUS+2-APB组较于LIPUS+DMSO组,ALP和茜素红染色以及OPN、OCN与RUNX2的蛋白表达明显降低。该研究结果提示,LIPUS能够促进DPSCs的成骨分化,且Trpm7在这一过程中发挥着重要作用。
- 姚欢潘华锋郑妍章杰李娅莎吴梦云杨珂
- 关键词：低强度脉冲超声成骨分化
- 不同酶浓度对差速黏附法分选小鼠表皮干细胞的研究被引量：2
- 2005年
- 目的比较不同酶浓度作用后进行分选的表皮干细胞的生长增殖状况。方法用不同浓度的酶消化表皮,再用差速黏附法分离KSC,置于低钙无血清培养基中培养。比较KSC在两种酶浓度作用后生长增殖、克隆形成率、生长曲线和KSC相关标记物的表达等指标。结果在0.05%胰酶和0.02%EDTA(1∶1)混合的酶作用下,能分选出较高比例的呈高克隆形成率的KSC,在较长的体外培养时间内始终保持较高的增殖潜能。两种酶作用下KSC的克隆形成率有显著差异(P<0.01)。角蛋白K19和整粘蛋白β1有强阳性表达。结论体外培养KSC时,使用低浓度胰酶加EDTA消化表皮,更有利于KSC在Ⅳ型胶原上的筛选,也有利于KSC的体外扩增及其表型的维持。
- 杨珂余瑾杨恬
- 关键词：表皮干细胞分选胰酶
- Wnt3a减轻黑素细胞iMC65氧化应激损伤被引量：1
- 2017年
- 目的探讨Wnt3a对氧化应激损伤的i MC65黑素细胞的保护作用及机制。方法将黑素细胞分成对照组,Wnt3a组,H2O2处理组,Wnt3a干预组,750μmol/L的H2O2作用模拟黑素细胞的氧化应激损伤。MTT实验检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞产生活性氧(ROS),荧光素酶报告基因检测Nrf2/ARE通路的激活,Western blot检测Nrf2/ARE通路的相关蛋白表达。结果与对照组相比,H2O2处理组的细胞活性明显下降(P<0.01),凋亡比率明显上升(P<0.01),ROS的产生明显增加(P<0.01)。而Wnt3a干预组能显著缓解H2O2处理组细胞活性的降低(P<0.05)、降低凋亡比率(P<0.05),减少ROS的产生(P<0.05)。Wnt3a也能上调Nrf2和HO-1蛋白水平的表达。结论 Wnt3a可以保护氧化应激状态下的黑素细胞,其机制可能与激活Nrf2/ARE有关。
- 郑妍杨珂李娅莎董世访周丽娜
- 关键词：WNT3A黑素细胞NRF2氧化应激
- Sfrp5抑制wnt经典通路对黑素细胞作用的初步研究
- 皮肤中黑素细胞的主要功能是合成黑素,通过树突将黑素颗粒输送给其相联系的角质形成细胞,使皮肤维持正常肤色,免受紫外线及光致癌因子的损害。目前研究发现毛囊bulge区存在黑素干细胞是维持毛发和皮肤黑素形成的根源,研究黑素干细...
- 汤寅虹郭海英叶吉星杨恬杨珂
- 关键词：WNT信号通路黑素细胞
- 文献传递
- 人表皮发生的机制研究:C/EBP在调控体内外角质形成细胞分化中的作用被引量：1
- 2004年
- 目的:探讨CCAAT/增强子结合蛋白(CCAAT/enhancerbindingprotein,C/EBP)参与表皮角质形成细胞分化调控的作用。方法:①应用免疫组化的方法检测胚胎表皮中C/EBP的表达情况;②通过调节培养的鼠表皮角质形成细胞培养基中钙离子浓度,在不同时间段应用免疫细胞化学检测C/EBPα和C/EBPβ的表达情况。结果:C/EBPα和C/EBPβ主要表达在胚胎期表皮棘层、颗粒层和角质层细胞的胞核内。在培养的角质形成细胞胞核中随分化进行表达增强。结论:说明C/EBP参与表皮角质形成细胞分化调控。
- 郑业华杨恬杨珂余瑾
- 关键词：表皮角质形成细胞EBP增强子
- 过表达CXCR4/CXCR7影响人脐带间充质干细胞迁移和增殖
- 2016年
- 目的探讨SDF-1/CXCR4及SDF-1/CXCR7对人脐带间充质干细胞(h UC-MSCs)迁移和增殖活性的影响。方法用Ad-EASY腺病毒质粒系统分别构建表达CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染h UC-MSCs后用FCM分别检测细胞膜的CXCR4和CXCR7受体的表达,Transwell法检测细胞迁移,MTT检测h UC-MSCs增殖活性,以及在H2O2诱导细胞毒性作用对细胞存活的影响。结果成功构建表达人源的CXCR4和CXCR7的重组腺病毒,感染后h UC-MSCs细胞膜上的CXCR4/CXCR7受体阳性表达率分别达到93.7%和78.5%(P<0.01),高表达CXCR4和CXCR7均显著增强SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移,其中CXCR7效应稍弱;高表达CXCR7而不是CXCR4显著提高SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖活性和氧化应激状态下的细胞存活率(P<0.05)。结论 CXCR4/CXCR7均参与介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs细胞迁移作用,同时CXCR7还介导了SDF-1诱导的h UC-MSCs增殖和H2O2处理损伤的保护。
- 李娅莎杨珂赵丽谭彬龚梦嘉董世访毕杨
- 关键词：人脐带间充质干细胞细胞迁移细胞增殖
- 载黑色素/阿霉素脂质纳泡的制备及治疗研究
- 目的制备一种载黑色素/阿霉素于一体的多模态多功能脂质纳泡诊疗剂,初步评价其超声、光声显像及治疗效果。方法制备载黑色素/阿霉素脂质纳米微粒,检测其一般特性及药物包封率。采用真空冷冻干燥法充入惰性气体—全氟丙烷形成脂质纳泡,...
- 姚元志王冬杨珂曹阳张亮
- 微丝解聚在低强度脉冲超声促进骨髓间充质干细胞成骨分化中的作用
- 2022年
- 目的研究微丝解聚在低强度脉冲超声(low intensity pulsed ultrasound,LIPUS)促进骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)成骨分化时的作用。方法培养小鼠BMSCs,随机分为4组:空白对照组;LIPUS组;LIPUS+DMSO组;LIPUS+CytoD(细胞松弛素D,Cytochalasin D)组。碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测ALP活性。免疫荧光染色观察RUNX2的表达和细胞定位。Western blot检测成骨分化相关基因Ⅰ型胶原(Collagen1)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、Runt相关转录因子2(runt-related transcription factor 2,RUNX2)的蛋白表达变化以及细胞中丝状肌动蛋白(filamentous actin,F-actin)与球状/单体肌动蛋白(globular/monomeric actin,G-actin)的含量。通过激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化及微丝骨架结构变化。结果与空白对照组相比,LIPUS辐照能显著增加ALP活性,促成骨相关基因Collagen1(P<0.01)、OPN(P<0.05)、RUNX2(P<0.01)的蛋白表达量升高,其中RUNX2表达量升高约1.5倍(P<0.01)。荧光染色显示LIPUS处理后RUNX2在细胞核内表达明显增加,细胞略缩小,同时可见细胞质内点状G-actin分布,Western blot实验分析F-actin/G-actin的比值发现LIPUS组明显小于对照组(P<0.05)。此外,与LIPUS+DMSO组相比,LIPUS+CytoD组能促进胞内微丝的解聚,F-actin/G-actin的比值明显下降(P<0.05),ALP活性明显增加(P<0.05),RUNX2的细胞核内表达明显增加(P<0.05),成骨相关基因的蛋白表达水平明显增高(P<0.05)。结论LIPUS可以促进BMSCs成骨分化,其机制可能与LIPUS促进微丝的解聚有关。
- 杨丽姚欢朱慧何依蔓杨珂王冬
- 关键词：低强度脉冲超声骨髓间充质干细胞成骨分化
- 对比观察脂质纳泡与微泡在高强度聚焦超声消融兔肝中的增效作用被引量：6
- 2015年
- 目的观察正常兔肝中脂质纳泡与微泡对高强度聚焦超声(HIFU)消融效果的影响,探讨纳泡的应用价值。方法采用机械振荡法联合低速离心制备纳泡,观察和分析纳泡及微泡的形态、大小及分布。18只健康新西兰兔随机分为3组:HIFU+生理盐水组、HIFU+微泡组及HIFU+纳泡组,耳缘静脉注入各溶液15s后开始HIFU辐照,辐照功率为180 W,辐照时间5s,观察HIFU辐照前后回声变化,检测靶区组织的凝固性坏死体积以及微细结构变化,并作统计学分析。结果制备的脂质纳泡粒径均一,纳泡、微泡的平均粒径分别为(588.00±53.02)nm、(3058.00±545.20)nm;HIFU+微泡组与HIFU+纳泡组,靶区凝固性坏死体积[(124.26±16.72)mm3,(121.35±11.25)mm3]差异无统计学意义(P>0.05),但均显著大于HIFU+生理盐水组(62.49±4.54)mm3(P均<0.05);各组坏死组织微细结构均严重破坏。结论脂质纳泡具有与微泡相同的HIFU增效作用,为纳泡在HIFU技术中的深入研究提供实验依据。
- 姚元志王志刚杨珂李攀周璇徐芬芬王琦王冬
- 关键词：高强度聚焦超声微泡
