吴颖
- 作品数：7 被引量：25H指数：4
- 供职机构：台州市中西医结合医院更多>>
- 发文基金：浙江省医药卫生科学研究基金浙江省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 甲型副伤寒杆菌nmpC基因原核表达及表达产物免疫保护作用被引量：5
- 2010年
- 目的 构建甲型副伤寒杆菌外膜蛋白基因nmpC的原核表达系统,确定其重组表达产物rNmpC免疫原性和保护作用,了解甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.方法 采用PCR和T-A克隆法从甲型副伤寒杆菌临床株JH01中获得nmpC基因克隆并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE和Bio-Rad凝胶图像分析系统检测rNmpC表达情况及其产量,采用免疫扩散法、Western blot和微量肥达试验鉴定其抗原性和免疫应答性.采用PCR和ELISA分别检测98株甲型副伤寒杆菌临床菌株nmpC基因携带及表达率.采用小鼠感染模型了解rNmpC对甲型副伤寒杆菌致死性感染的免疫保护作用.结果 与报道的相关序列比较,所克隆的nmpC基因核苷酸和氨基酸序列相似性均为100%.rNmpC表达量约为细菌总蛋白的30%.rNmpC免疫家兔可产生抗体并能与甲型副伤寒杆菌全菌抗血清产生阳性Western杂交信号.所有甲型副伤寒杆菌菌株均携带nmpC基因并表达NmpC蛋白,但伤寒杆菌、乙型及丙型副伤寒杆菌未检出nmpC基因.100μg和200μgrNmpC对感染小鼠的免疫保护率分别为41.7%（5/12）和66.7%（8/12）.rNmpC免疫小鼠或保护试验存活小鼠血清仅对甲型副伤寒杆菌H抗原产生1∶5～1∶40的凝集效价.结论 NmpC是甲型副伤寒杆菌独有的序列保守、分布广泛且自然表达的外膜蛋白抗原,该外膜蛋白具有良好的免疫原性和一定的免疫保护作用,可作为多价甲型副伤寒杆菌基因工程疫苗候选抗原.
- 吴颖王艳芳严杰阮萍
- 关键词：甲型副伤寒杆菌免疫原性免疫保护性
- 不同梅毒血清学诊断方法的临床检测与效果评价被引量：2
- 2011年
- 目的探讨rTpN15-17-47-ELISA、RPR和TPPA三种用于梅毒血清抗体检测方法的敏感性和特异性。方法三种方法分别检测50份无梅毒病史健康人血清、11例类风湿关节炎(RA)、5例肾病综合征(NS)及122例确诊梅毒患者血清标本中梅毒抗体,对各方法的检测结果进行比较。结果 rTpN15-17-47-ELISA对所有健康人血清、RA患者及NS患者血清检测结果均为阴性,对梅毒患者血清标本检测阳性率为97.5%,与TPPA(96.7%)相似(P>0.05),且均高于RPR(80.3%)。结论本研究中建立的以重组融合蛋白质rTpN15-17-47为抗原的ELISA有望成为高度敏感和特异的梅毒患者血清学筛查方法。
- 吴颖胡瑜洁孙爱华
- 关键词：梅毒螺旋体血清学诊断
- 解脲脲原体喹诺酮类药物耐药机制的研究被引量：4
- 2012年
- 目的研究解脲脲原体喹诺酮类药物耐药机制。方法用支原体培养、鉴定和药敏试剂盒分离获得77株解脲脲原体并检测对3种喹诺酮类药物的耐药性,同时PCR法扩增临床分离株的gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区并进行测序分析。结果对3种喹诺酮均敏感3株,74株至少对1种药物呈现不同程度耐药。gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区测序发现上述敏感株和2株耐药株不发生突变,其余72株耐药株gyrA和parC发生D112E和/或S83L突变。结论解脲脲原体gyrA和parC基因喹诺酮耐药决定区突变与耐药密切相关。
- 张一沙吴颖范兴丽蒋锦琴孙爱华
- 关键词：解脲脲原体GYRAPARC基因突变耐药性
- 研究456例慢性前列腺炎患者前列腺液病原体分布及其耐药性被引量：7
- 2011年
- 目的:探讨慢性前列腺炎患者感染病原体的分布及耐药率。方法:对456例慢性前列腺炎患者的前列腺液进行病原体检测和药敏试验。结果:456例慢性前列腺炎患者中,256例细菌培养阳性。革兰阳性菌212株,主要为葡萄球菌。革兰阴性杆菌51株,主要为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌,检测出产ESBLs株10株。支原体61例,沙眼衣原体25例。所有细菌未发现对万古霉素耐药菌株,对复方新诺明均较敏感。支原体对交沙霉素、美满霉素和强力霉素三种抗生素耐药率均较低。结论:慢性前列腺炎细菌感染为主,支原体和衣原体感染也有一定比例。不同病原体对不同抗生素耐药率差异较大,适时监测慢性前列腺炎患者感染病原体的分布及耐药率是临床诊断和合理用药的基础。
- 张一沙吴颖孙爱华
- 关键词：慢性前列腺炎病原体耐药性凝固酶阴性葡萄球菌沙眼衣原体
- 667例非淋菌性尿道炎患者支原体感染率检测与耐药性分析被引量：6
- 2012年
- 目的检测非淋菌性尿道炎患者的支原体感染率及对9种抗生素的耐药性为临床用药提供指导。方法对667例疑似支原体感染非淋菌性尿道炎患者进行了支原体培养及药敏试验,并对结果进行统计分析。结果支原体总检出率为47.2%(315/667),女性检出率56.3%(213/378)明显高于男性35.3%(102/289)(P<0.05)。解脲支原体(Uu)阳性率37.6%(251/667)明显高于人型支原体(Mh)1.9%(13/667)及Uu+Mh混合感染阳性率7.6%(51/667)(P<0.05)。药敏试验结果:支原体对交沙霉素、原始霉素和强力霉素均较为敏感(敏感率≥96.2%)。对环丙沙星耐药率最高(91.1%),对氧氟沙星、红霉素以及四环素耐药率均≥65.7%。克拉霉素和阿奇霉素对Uu较敏感(敏感率分别为71.7%和64.9%),对Mh和Uu+Mh混合感染则耐药性较高(耐药率≥69.2%),Mh是否参与感染与克拉霉素及阿奇霉素耐药程度相关。结论非淋菌性尿道炎患者支原体感染Uu比较常见,且女性检出率显著高于男性。临床分离支原体大多具有多重耐药性和高耐药性,临床治疗需根据药敏结果加以选择。
- 张一沙吴颖张怡孙爱华
- 关键词：非淋菌性尿道炎解脲支原体人型支原体耐药
- 梅毒螺旋体重组蛋白rTpN37为抗原的ELISA的建立与RPR和TPPA血清学检测效果的比较被引量：1
- 2010年
- 目的:克隆并构建梅毒螺旋体tpN37基因原核表达系统,建立基于rTpN37的ELISA并对其用于梅毒血清学诊断的敏感性和特异性进行评价。方法:采用PCR扩增tpN37基因,构建tpN37基因原核表达系统。采用SDS-PAGE检测目的重组蛋白rTpN37表达情况,Ni-NTA亲和层析法提纯rTpN37,Western blot鉴定rTpN37的免疫反应性。以rT-pN37为包被抗原,建立rTpN37-ELISA并用于检测122例梅毒病人血清,其检测结果与RPR和TPPA进行比较。结果:克隆的tpN37基因与GenBank中相关序列相似性为100%。rTpN37表达量为细菌总蛋白的20.4%。提纯的rTpN37在SDS-PAGE后显示为单一的蛋白条带。TPPA阳性的梅毒病人血清能有效识别rTpN37并与之结合。rTpN37-ELISA对梅毒病人血清标本检测阳性率为95.9%(117/122),与TPPA检测阳性率(96.7%,118/122)相近(P>0.05),rTpN37-ELISA和TPPA检测阳性率均显著高于RPR(81.1%,99/122)(P<0.01)。结论:本研究中成功地克隆并构建了梅毒螺旋体tpN37基因及其原核表达系统。以rTpN37为包被抗原的rTpN37-ELISA可作为快速、敏感和特异的梅毒血清学筛查方法。
- 吴颖曹景宏唐玉霞金慧英孙爱华
- 关键词：梅毒螺旋体酶联免疫吸附试验血清学检测
- 淋病奈瑟菌的耐药性与喹诺酮耐药基因突变的相关性分析
- 2011年
- 目的分析本地区淋病奈瑟菌临床菌株gyrA基因突变与喹诺酮类药物耐药的相关性。方法采用琼脂稀释法检测37株淋病奈瑟菌临床菌株对6种抗生素的最小抑菌浓度(MIC),PCR法扩增淋病奈瑟菌临床菌株gyrA基因片段并测序。结果 37株淋病奈瑟菌临床菌株对大观霉素、头孢曲松、四环素、青霉素、氧氟沙星和环丙沙星的耐药率分别为0、0、70.3%、75.7%、91.9%和97.3%。有1株淋病奈瑟菌临床菌株对环丙沙星敏感,其MIC为0.03μg.mL-1。检测36株对环丙沙星耐药淋病奈瑟菌临床菌株的gyrA基因,发现7种编码氨基酸的核苷酸序列突变,其中最常见的突变是gyrA基因编码的91位丝氨酸突变为苯丙氨酸(32/26)和95位天冬氨酸突变为甘氨酸(14/36)。所有耐药淋病奈瑟菌临床菌株S91都发生突变,包括S91F、S91Y和S91C三种突变。31株gyrA基因编码95位天冬氨酸也可发生三种突变,D95A、D95G和D95N突变分别有7、14和10株。92位丙氨酸的核苷酸突变发生概率低为11.1%(4/36),其中2株伴有D95A或D95N。结论青霉素、四环素、氧氟沙星和环丙沙星已不能作为治疗淋病的常规用药,大观霉素和头孢曲松仍可作为本地区治疗淋病的一线药物。gyrA基因突变在淋病奈瑟菌对喹诺酮类药物耐药中起重要作用。
- 张怡吴颖孙爱华
- 关键词：淋病奈瑟菌GYRA基因突变耐药性
