崔璨
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：遵义医学院第一附属医院心内科更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金贵州省国际科技合作计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 降钙素相关肽对骨髓间充质干细胞生物学特征影响的实验研究
- 2015年
- 目的 观察携带降钙素基因相关肽（CGRP）的慢病毒对细胞生存和分化的影响. 方法 培养大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）,携带CGRP的慢病毒载体转染MSCs（MSCsCGRP＋＋组）,空病毒载体转染MSCs作为对照组;应用流式细胞仪检测病毒转染率,酶联免疫吸附（ELISA）法测定CGRP蛋白表达,应用流式细胞仪及细胞免疫组化检测细胞表面标记物,胎盘蓝染色观察细胞存活能力,噻唑蓝（MTT）法检测细胞活力,β-半乳糖苷酶染色检测细胞衰老情况. 结果 携带CGRP的慢病毒转染MSCs后1d,荧光显微镜未观察到细胞有荧光,但ELISA测定MSCsCGRP＋ ＋组有少量CGRP表达,随着转染时间延长,细胞逐渐出现荧光,慢病毒转染MSCs后3d和4d,镜下可见强荧光表达,细胞转染率分别为（77.87％和79.58％）,ELISA检测MSCsCGRP＋＋组CGRP表达量较对照组[（19.53±0.50） pg/ml和（3.12±0.001） pg/ml]增加（t=48.964,P＜0.01）.慢病毒转染MSCs后3d,流式细胞仪检测MSCs仍高表达CD29和CD90,CD31的表达为24.75％,细胞转染后7d,CD31的表达为20.72％,与对照组6.63％比较CD31表达增加,vWF表达也随着转染时间延长表达逐渐增加;细胞转染后3d,MSCsCGRP＋/＋组及对照组均未见α-SMA表达,细胞转染14 d,在MSCsCGRP＋＋组α SMA染色仍阴性,对照组胞浆见α-SMA阳性表达;细胞转染后3d和7d,MTT及台盼蓝染色结果显示两组间细胞活力及存活情况均无差异性（3d细胞活力t=-0.253,3d细胞存活率t=-0.307,7d细胞活力t=0.290,7d细胞存活率t=-0.690,均P＞0.05）,β半乳糖苷酶检测细胞衰老程度在两组间差异也无统计学意义（3 d t=0.167,7 dt=0.141,均P＞0.05）,随着转染时间延长,细胞转染14d,MSCsCGRP＋＋组衰老程度较对照组降低（t=2.446,P＜0.05）. 结论 转染慢病毒后细胞生物活性无明显影响,细胞仍具有增殖分化能力,细胞转染分泌的CGRP能促进细胞向内皮分化,抑制细胞向平滑肌细胞分化,这为基因工
- 龙仙萍陈攀科崔璨汪松石蓓姚小剑
- 关键词：间质干细胞降钙素基因相关肽转染细胞学技术
- 降钙素基因相关肽和受体活性修饰蛋白1对血管平滑肌细胞迁移的影响及机制被引量：4
- 2015年
- 目的 探讨转染降钙素基因相关肽（CGRP）的骨髓间充质干细胞（MSC）对血管平滑肌细胞（VSMC）迁移的影响,及活性修饰蛋白1（RAMP1）在其中的作用和机制.方法 分离、培养大鼠MSC和VSMC,分别应用携带CGRP和RAMP1的慢病毒载体转染MSC和VSMC,然后将MSC与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的VSMC共培养.实验分为5组：（1） AngⅡ对照组（MSC＋ VSMC＋ AngⅡ）;（2） MSCCGRP＋组（MSCCGRP＋＋ VSMC＋ AngⅡ）;（3）MSCCGRP＋ RAMP1 组（MSCCGRP＋＋ VSMCRAMP1-＋AngⅡ）;（4） MSCCGRP＋ RAMP1＋组：（MSCCGRP＋＋ VSMCRAMP1＋＋ AngⅡ）;（5） RAMP1＋ （MSC＋VSMCRAMP1＋＋ AngⅡ）.应用Transwell实验评价VSMC的迁移能力,Western blot检测蛋白的表达水平.结果 Transwell实验结果显示,MSCCGRP＋组VSMC迁移数量[（50.8±2.6）个]少于AngⅡ对照组[（71.4±2.3）个],而多于MSCCGRP＋ RAMP1＋组[（30.4±3.0）个]（P均＜0.05）;MSCCGRP＋ RAMP1-组VSMC迁移数量[（69.0±5.6）个]多于MSCCGRP＋ RAMP1＋组（P＜0.05）,而与AngⅡ对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RAMP1＋组VSMC迁移数量[（71.6±3.4）个]与AngⅡ对照组差异也无统计学意义（P＞0.05）.Western blot结果显示,MSCCGRP＋组磷酸化核因子-κB P65（P-P65）蛋白表达水平低于AngⅡ对照组（0.475±0.022比0.642±0.035,P＜0.05）;MSCCGRP＋ RAMP1-组P-P65蛋白表达水平高于MSCCGRP＋ RAMP1＋组（0.670±0.030比0.373 ±0.041,P＜0.05）,而与AngⅡ对照组差异无统计学意义（P＞0.05）;RAMP1＋组P-P65蛋白表达量（0.643 ±0.039）与AngⅡ对照组比较差异也无统计学意义（P＞0.05）.结论 RAMP1对CGRP抑制VSMC迁移起促进作用,RAMP1-CGRP通过核因子-κB信号通路抑制VSMC迁移.
- 龙仙萍崔璨陈攀科汪松王冬梅许官学姚小剑石蓓
- 关键词：降钙素基因相关肽肌细胞平滑肌干细胞
