庞晓辉
- 作品数：5 被引量：27H指数：3
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- p52在结肠癌细胞对奥沙利铂耐药中的作用
- 2017年
- 目的观察p52在结肠癌细胞对奥沙利铂耐药中的作用。方法复苏结肠癌SW480、LoVo细胞、奥沙利铂处理细胞24 h，Western blot法检测SW480细胞中p52蛋白表达以研究奥沙利铂对p52蛋白的作用。采用大剂量冲击法诱导结肠癌耐奥沙利铂细胞，细胞计数试剂盒（CCK-8）实验检测其耐药性。Western blot检测原代耐药细胞p52表达，染色质免疫共沉淀（CHIP）实验检测p52能否转录调控B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）。沉默耐药细胞中p52后，Western blot检测细胞内p52和bcl-2表达，膜联蛋白V/碘化丙锭（Annexin V/PI）染色、流式细胞术检测Annexin V（＋）/PI（＋）细胞的比例。SPSS 23.0统计软件进行统计分析。结果奥沙利铂上调结肠癌细胞中p52表达（t＝20.730，P＝0.002），p52蛋白在结肠癌耐奥沙利铂细胞中明显升高（t＝4.029，P＝0.006），差异均有统计学意义。CHIP实验结果显示p52蛋白结合到bcl-2基因启动子区域，转录调控bcl-2基因。沉默耐药细胞中p52后，bcl-2蛋白表达下调22.6%（t＝18.183，P＝0.003），流式细胞术提示实验组凋亡细胞比例为23.5%，比对照组升高了2.96倍（t＝6.783，P＝0.021）。
结论 p52通过通过上调bcl-2基因抑制细胞凋亡促使结肠癌细胞对奥沙利铂耐药。
- 庞晓辉王朝杰崔勇霞周云
- 关键词：结直肠癌奥沙利铂
- miRNA-223对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响被引量：3
- 2015年
- 目的探讨microRNA-223(miR-223)在非小细胞肺癌(NSCLC)A549/DDP细胞对顺铂(DDP)耐药性方面的影响及可能机制。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测DDP耐药肺腺癌细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-223的水平,将A549/DDP细胞分为3组:对照组、空转染组(转染无关序列)和抑制组(转染miR-223 inhibitor),于转染24、48、72及96 h后分别采用qRT-PCR和CCK-8法检测转染效果及细胞增殖情况,CCK-8法评价转染后A549/DDP细胞对DDP的药物敏感性变化,采用流式细胞术检测转染48 h后的细胞凋亡和细胞周期情况,Western blotting检测转染48 h后耐药基因蛋白P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白1(MRP1)及肺耐药相关蛋白(LRP)的表达。结果 A549/DDP细胞中的miR-223水平较高,为A549细胞的(7.14±0.26)倍(P<0.05);抑制组转染后的miR-223水平降低,转染96 h后的miR-223水平分别降至对照组的(67.15±2.84)%和空转染组的(65.80±3.47)%,差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,抑制组转染后的增殖抑制率、凋亡率及G0/G1期细胞比例均升高,而S和G2/M期细胞比例及3种耐药基因蛋白水平均降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05)。DDP对抑制组细胞的半数抑制浓度(IC50)值为(15.67±1.30)μg/ml,低于对照组的(33.71±2.61)μg/ml(P<0.05)。结论 miR-223可增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,可能与耐药基因蛋白表达上调有关;降低miR-223水平可抑制A549/DDP细胞增殖、诱导凋亡及细胞周期阻滞,并下调耐药蛋白的表达,从而增加A549/DDP细胞对DDP的敏感性。
- 胡敏魏晓霞邹杰崔发财庞晓辉
- 关键词：非小细胞肺癌顺铂耐药蛋白
- PH结构域且富含亮氨酸重复基序的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶1对乳腺癌恶性细胞行为的影响及其机制
- 2021年
- 目的探讨PH结构域且富含亮氨酸重复基序的丝/苏氨酸蛋白磷酸酶1(PHLPP1)对乳腺癌恶性细胞行为的影响及其机制。方法采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测河南省人民医院2017年6月到2019年6月手术切除的59对乳腺癌组织和配对癌旁组织的PHLPP1蛋白表达水平。采用慢病毒在MDA-MB-231乳腺癌细胞系构建对照和PHLPP1过表达稳定细胞系,分别命名为对照组和实验组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)测定两组细胞增殖能力;采用凋亡试剂盒检测两组细胞凋亡水平;采用Transwell分析两组细胞侵袭能力;采用异体移植瘤实验分析细胞在体内生长和转移能力;采用Western blot分析两组基质金属蛋白酶3(MMP-3)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-3蛋白表达水平。两组间比较行独立样本的t检验。结果癌旁组织中PHLPP1蛋白相对表达水平(1.54±0.23)明显高于乳腺癌组织 (0.74±0.15),差异有统计学意义(t=3.749,P<0.05)。对照组细胞吸光度(A)值(1.98±0.22)明显高于观察组细胞A值(1.06±0.16),差异有统计学意义(t=4.082,P<0.05)。对照组细胞体内生长30 d后肿瘤体积[(1 209.43±289.69) mm3]明显高于观察组细胞[(920.43±100.54) mm3],差异有统计学意义(t=6.943,P<0.05)。对照组细胞凋亡比例[(4.19±4.90)%]明显低于观察组细胞凋亡比例[(27.33±4.98)%],差异有统计学意义(t=3.431,P<0.05)。对照组细胞迁移数量[(91.49±7.23)个]明显高于观察组细胞迁移数量[(57.18±6.20)个],差异有统计学意义(t=5.298,P<0.05)。对照组细胞体内生长30 d后淋巴结转移数量[(19.48±3.99)个]明显高于观察组细胞[(7.19±1.54)个],差异有统计学意义(t=6.943,P<0.05)。对照组细胞Caspase-3蛋白相对表达水平(0.86±0.18)明显低于观察组细胞(1.59±0.25),差异有统计学意义(t=3.002,P<0.05)。对照组细胞MMP-3蛋白相对表达水平(1.32±0.20)明显高于观察组细胞(0.73±0.17),差异有统计学意义(t=3.691,P<0.05)。结论 PHL
- 罗执芬崔勇霞仓顺东庞晓辉寇振朱庆尧
- 关键词：乳腺癌凋亡
- 四种重楼皂苷对结肠癌细胞的体外毒性作用比较被引量：11
- 2016年
- 目的探讨重楼皂苷Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、H对结肠癌细胞的体外毒性,为寻求有效的结肠癌化疗药物提供依据。方法选取复苏结肠癌细胞系SW620、SW480、Colo320、Lovo,将其与重楼皂苷Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、H、奥沙利铂等药物共培养48 h,加CCK-8孵育2 h,酶标仪检测450 nm处吸光度值。采用SPSS23.0统计软件分析重楼皂苷对结肠癌细胞的毒性。Annexin V/PI染色,流式细胞仪检测凋亡细胞。Western blotting法检测Bax、Caspase-3蛋白表达。结果重楼皂苷Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、H对结肠癌细胞系SW620、SW480、Colo320、Lovo抗肿瘤活性均良好。四种重楼皂苷单体对结肠癌细胞IC50值波动于0.4～8 mg/L。重楼皂苷I和重楼皂苷V对结肠癌细胞的毒性强于另外两种重楼皂苷单体（P〈0.05）。重楼皂苷I（IC50值波动在0.4～0.6 mg/L）与奥沙利铂（IC50值0.1～2.1 mg/L）体外抗肿瘤作用相当。流式细胞仪显示重楼皂苷I处理的细胞Annexin V/PI阳性细胞比例升高52.3%,Western blotting结果显示重楼皂苷I处理的细胞Bax和Caspase-3蛋白表达分别是对照组的3倍和1.13倍。结论重楼皂苷Ⅰ、Ⅴ、Ⅵ、H对结肠癌细胞均有良好的抗肿瘤活性,其中以重楼皂苷I作用最强,其能介导结肠癌细胞凋亡。
- 庞晓辉王朝杰史祖宣崔瑶崔永霞高天慧
- 关键词：结肠癌重楼皂苷细胞凋亡
- 重楼皂苷Ⅰ对结肠癌耐奥沙利铂细胞株的毒性研究被引量：14
- 2017年
- 目的探讨重楼皂苷Ⅰ对结肠癌耐奥沙利铂细胞的体外毒性及其机制。方法复苏结肠癌SW480、LoVo细胞,采用大剂量冲击法诱导结肠癌耐奥沙利铂细胞,CCK-8实验检测其耐药性,Transwell细胞侵袭实验检测其侵袭性以鉴定其恶性生物学行为。CCK-8实验检测重楼皂苷Ⅰ对耐药细胞及其亲代细胞的毒性作用,Annexin V/PI染色流式细胞术检测重楼皂苷Ⅰ处理细胞后Annexin V/PI阳性细胞比例以检测其对细胞凋亡的作用。提取细胞总蛋白,Western blotting检测重楼皂苷I处理细胞后细胞中凋亡相关蛋白Bax和Caspass-3等蛋白的表达。结果大剂量奥沙利铂冲击法成功诱导奥沙利铂耐药细胞LoVo/L-OHP、SW480/LOHP。CCK-8细胞毒性实验显示,LoVo/L-OHP、SW480/L-OHP的IC_(50)值比其亲代细胞提高5~25倍,Transwell细胞侵袭实验证实,耐药细胞比亲代细胞具有更强的侵袭性(P<0.019)。CCK-8实验显示,重楼皂苷I对SW480、LoVo及其耐奥沙利铂细胞的IC_(50)值相似。Annexin V/PI染色、流式细胞仪检测凋亡细胞比例显示,重楼皂苷I处理细胞后,Annexin V/PI阳性细胞率明显升高,Western blotting结果显示,重楼皂苷Ⅰ处理细胞后细胞中Bax和Caspass-3蛋白表达水平升高。这两个实验证实,重楼皂苷Ⅰ能够促进结肠癌细胞及其耐药细胞凋亡。结论重楼皂苷I对结肠癌细胞及耐奥沙利铂细胞均有良好的抗肿瘤活性,其抗肿瘤作用是通过介导结肠癌细胞凋亡实现的。
- 庞晓辉王朝杰崔勇霞高天慧
- 关键词：结肠癌奥沙利铂
