刘志成
- 作品数：3 被引量：5H指数：2
- 供职机构：惠州市中心人民医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金南京市医学科技发展项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定被引量：3
- 2015年
- 目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。
- 夏迪钱倩刘志成谭鸣鸣丁媛苏欣孙文逵施毅
- 关键词：腺病毒载体模式识别受体
- 腺病毒介导的Dectin-1基因小鼠呼吸道表达模型的构建和评价
- 2017年
- 目的:研究采用气管内注射给予Dectin-1重组腺病毒的方法建立气道Dectin-1上调表达小鼠模型,并进行模型验证和安全性评价.方法:BALB/c小鼠分为PBS组、Ad-EGFP(recombinant adenovirus encoding EGFR)组、Ad-m Dectin-1(recombinant adenovirus encoding murine Dectin-1)组,经气管给予PBS、Ad-EGFP、Ad-m Dectin-1.通过real-time PCR、免疫组化等方法动态评估肺组织Dectin-1表达变化.通过ELISA检测肺组织匀浆及血液中IL-6水平,激光共聚焦检测腺病毒载体在肺组织及肝脏的分布.结果:气管内给药后,在第3天可以观察到Ad-mDectin-1组小鼠肺组织Dectin-1 mRNA水平约为PBS组、Ad-EGFP组的18倍.Ad-m Dectin-1组与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.05).给药后第3、5、7、14天,Ad-m Dectin-1组免疫组化见Dectin-1主要定位于细支气管.随时间推移,Dectin-1水平逐渐增高,第5天达高峰,第14天气道上皮细胞仍有Dectin-1表达.给药后第3天,激光共聚焦显微镜观察Ad-mDectin-1显示在肺组织中Ad-mDectin-1组及Ad-EGFP组可见绿色荧光,而PBS组未见绿色荧光.在肝脏组织中,各组均无绿色荧光蛋白表达.肺组织及血清中IL-6水平检测示各组差异无统计学意义(P>0.05).结论:通过气管内给予Ad-mDectin-1成功上调小鼠肺组织Dectin-1水平,Dectin-1主要表达于细支气管上皮细胞,表达高峰在第5天,可持续2周以上.另外,经气管给予Ad-mDectin-1对小鼠生存和活动无明显影响,无明显炎症反应及远隔器官肝脏的播散.
- 钱倩刘志成孙文逵施毅
- 关键词：DECTIN-1腺病毒载体基因治疗侵袭性肺曲霉病天然免疫
- 利伐沙班对比华法林治疗肺血栓栓塞症的疗效与安全性研究被引量：2
- 2021年
- 目的探讨利伐沙班对比华法林治疗肺血栓栓塞症(PTE)的疗效与安全性。方法选择2018年1月至2020年12月期间在我院收治PTE患者83例,随机分为华法林和利伐沙班抗凝治疗组。对比两组患者临床疗效、实验室检查、影像学改变、出血率和血栓栓塞的复发率。结果治疗后两组均临床症状改善,实验室检查、影像学,对比无显著差异;总出血率差异无统计学意义,华法林组比利伐沙班组大出血率稍高,但无显著差异,PTE复发率差异有统计学意义。结论利伐沙班和华法林对PTE的抗凝治疗均有显著临床疗效,利伐沙班能减少大出血发生的风险,降低PTE的复发率。
- 周毓叶凯刘志成周仲志苏惠清
- 关键词：肺血栓栓塞症利伐沙班华法林
