张鹏飞
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 巨噬细胞系及PLEKHQ1基因敲除小鼠实验固定夹设计
- 2016年
- 目的:设计研制巨噬细胞系及PLEKHQ1基因敲除小鼠实验固定夹,为小鼠尾部采血和注射实验提供安全、简易、方便及省时的实验工具。方法:采用50 ml注射器按图纸开槽打孔,制作成巨噬细胞系及PLEKHQ1基因敲除小鼠实验固定夹;使用50 ml塑料试管及合适尺寸的塑料底托,制作成小鼠实验固定夹底座。结果:该小鼠固定夹与目前市场销售的小鼠固定夹相比较,具有制作简单、成本低廉、使用安全及操作简便省时等优点。结论:该小鼠实验固定夹为小鼠进行尾部静脉采血及注射等实验操作提供了安全、便利的实验工具,极大的提高了实验的工作效率。
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- 原核质粒pGEX-4T-2-PLEKHQ1及真核质粒pCMV-Myc-PLEKHQ1的构建与蛋白表达被引量：2
- 2015年
- 目的:构建基因PLEKHQ1的原核质粒及真核质粒。方法:全长编码基因PLEKHQ1的聚合酶链反应(PCR)产物经Eco RⅠ和Kpn1双酶切后,分别与双酶切后的载体pGEX-4T-2及载体pCMV-Myc相连,在pGEX-4T-2-PLEKHQ1转化E.coli DH5α提取质粒后,转化E.coli BL21中诱导GST-Q1融合蛋白表达,利用谷胱甘肽琼脂糖4B纯化诱导的融合蛋白;而pCMVMyc-PLEKHQ1则瞬转至293TX细胞;用蛋白质印迹法(Western blot)检测GST-Q1和Myc-Q1融合蛋白表达。结果:将获得的重组质粒进行双酶切鉴定,得到约1500 bp的目的片段,符合预计大小。质粒经测序分析正确后,Western blot检测到诱导及纯化后的GST-Q1和转染293TX后的Myc-Q1蛋白。结论:成功构建的pGEX-4T-2-PLEKHQ1和pCMV-Myc-PLEKHQ1重组质粒,为深入研究PLEKHQ1功能奠定良好的基础。
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- 关键词：重组质粒
- PLEKHQ1基因敲除小鼠基因型鉴定方法被引量：3
- 2015年
- 目的:探讨鉴定PLEKHQ1基因敲除(KO)小鼠基因型的方法。方法:对PLEKHQ1基因敲除杂合子小鼠进行单独饲养及配种繁殖,繁殖后其子代出现野生型、杂合子型及纯合子型3种基因型,提取每只小鼠的基因组DNA,采用聚合酶链反应(PCR)和变性方法进行基因类型鉴定。结果:采用PCR和变性法成功鉴定出PLEKHQ1基因敲除小鼠的基因型。结论:这种无需T7酶切的小鼠基因型鉴定方法可用于PLEKHQ1基因敲除小鼠的基因型鉴定。
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- 关键词：基因敲除小鼠纯合子杂合子
- 样本库配套的转化医学实验平台建设被引量：1
- 2016年
- 目的:探讨样本库转化实验平台建设及其在基础实验室和临床上所具有的功能与作用。方法:通过文献评阅,确立转化医学实验平台的功能、作用与双向转化路径;根据功能区进行硬软件功能配置,制订管理规范。结果:实现了样本库转化实验平台支撑基础与临床相互转化的运行机制。结论:样本库医学转化实验平台在基础实验室与临床之间建立起一个双向转化路径,有效启动样品收集、相关课题研究工作。
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- 关键词：样本库实验室
- 构建原核表达质粒pGEX-4T-2-GFP并鉴定其在大肠杆菌中的表达
- 2016年
- 目的:构建绿色荧光蛋白(GFP)的原核表达质粒,用以研究小鼠巨噬细胞吞噬细菌的能力。方法:编码GFP的聚合酶链反应(PCR)产物经Eco RⅠ和Bam HⅠ双酶切后,与双酶切后的载体p GEX-4T-2相连,将p GEX-4T-2-GFP转化E.coli DH5α提取质粒,经测序后转化E.coli BL21中诱导GST-GFP融合蛋白表达,将表达融合蛋白的大肠杆菌滴入培养巨噬细胞的皿中,于荧光显微镜下观察GFP的表达及大肠杆菌被吞噬情况。结果:获得的重组质粒测序正确。荧光显微镜下能清晰观察到培养基中及被巨噬细胞吞噬后发绿色荧光的大肠杆菌。结论:成功构建了pGEX-4T-2-GFP重组质粒,为研究小鼠巨噬细胞吞噬细菌的能力创造条件。
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- 关键词：绿色荧光蛋白重组质粒荧光显微镜
- 稳定敲低MYH10基因细胞株的建立被引量：2
- 2015年
- 目的构建稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株。方法在293TX细胞中进行病毒的包装,用获得的高效价慢病毒感染COS-7细胞,通过免疫印迹和荧光显微镜,检测病毒感染后COS-7细胞MYH10蛋白表达的变化。结果在构建的两种重组质粒中,MYH10-lentiviral shRNA-2在转染后表现出明显的干扰作用,感染后能明显下调COS-7细胞的MYH10蛋白表达。结论病毒感染的COS-7细胞可明显抑制COS-7细胞内源MYH10的表达,说明了稳定敲低MYH10基因的COS-7细胞株的建立,为进一步研究MYH10在相关疾病中的功能奠定了基础。
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- 关键词：慢病毒感染
- PLEKHQ1基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞永生化细胞系的建立被引量：1
- 2017年
- 目的:建立PLEKHQ1基因敲除小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)永生化细胞系,为全面研究PLEKHQ1基因功能提供细胞实验材料。方法:采用慢病毒感染的方法将猿猴病毒40(SV40)大T抗原基因导入已鉴定出基因型的MEF中,建立永生化细胞系;利用聚合酶链反应(PCR)检测SV40大T抗原基因在MEF中的整合情况,利用反转录PCR及凝胶成像的方法观察SV40大T抗原基因在MEF中的表达。结果:SV40大T抗原基因已整合至MEF中,且此类MEF已扩大培养及稳定传代半年之久。结论:成功建立的PLEKHQ1基因敲除MEF永生化细胞系,可为进一步研究PLEKHQ1基因功能提供细胞实验材料。
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- 关键词：慢病毒感染胚胎成纤维细胞永生化
- PLEKHQ1基因敲除小鼠的永生化骨髓来源巨噬细胞系的建立
- 2017年
- 目的:建立PLEKHQ1基因敲除小鼠的永生化骨髓来源巨噬细胞系,为PLEKHQ1基因功能的研究奠定基础。方法:用慢病毒感染的方法将包装质粒pCDH-SV40/GFP导入野生型和PLEKHQ1基因敲除小鼠的骨髓来源巨噬细胞,建立永生化细胞系;观察永生化细胞的生物学性状,用聚合酶链反应(PCR)检测目的基因的整合,用RT-PCR鉴定目的基因的表达,并对永生化和非永生化骨髓来源巨噬细胞的生长状况进行比较。结果:构建的骨髓来源巨噬细胞系已扩大培养并稳定传代,经鉴定,SV40LT抗原已整合入细胞并稳定表达。结论:通过慢病毒感染细胞的方法成功构建了PLEKHQ1基因敲除小鼠的永生化骨髓来源巨噬细胞系。
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- 关键词：永生化
- 医疗设备报废评定标准及残值利用被引量：11
- 2016年
- 目的:探讨医疗设备报废评定标准及残值利用,以提高资产使用效益,防止和杜绝资产浪费与流失。方法:针对医疗设备报废程序与技术鉴定不规范、残值评估不到位以及报废处置粗疏等问题,完善医疗设备报废评定标准,充分利用报废设备残值。结果:医疗设备的报废处理报批程序的规范、合理,最大限度地利用了设备残值。结论:完善的医疗设备报废处置流程可确保医院固定资产安全、完整,充分利用报废设备残值可提高医院资产的使用效率,进而杜绝医院资产浪费。
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