倪佳佳
- 作品数：2 被引量：4H指数：1
- 供职机构：南京医科大学第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- miR-30e*在顺铂诱导的肾近端小管上皮细胞凋亡和线粒体损伤中的作用被引量：3
- 2015年
- 目的:观察顺铂诱导肾近端小管细胞损伤过程中mi R-30e*的表达变化,并探讨其在顺铂诱导的小管细胞凋亡和线粒体损伤中的作用。方法:实时定量PCR(q RT-PCR)检测顺铂处理后的小管细胞mi R-30e*的表达水平;使用重组慢病毒载体感染细胞,稳定高表达或低表达mi R-30e*;使用流式细胞仪检测细胞凋亡,观察mi R-30e*在顺铂诱导的小管细胞凋亡中的作用;q RT-PCR检测线粒体DNA(mt DNA)拷贝数,JC-1检测线粒体膜电位变化,探究mi R-30e*在顺铂引起的线粒体损伤中的作用。结果:1顺铂处理肾小管上皮细胞后,mi R-30e*的表达呈时间依赖性和剂量依赖性下调;2使用q RT-PCR检测重组慢病毒载体制备的稳定高表达或低表达mi R-30e*的小管细胞株中mi R-30e*的表达,过表达组增高了7倍,敲低表达组降低了近50%;3加入顺铂后,与对照组相比小管细胞凋亡增加,过表达mi R-30e*对凋亡起保护作用,敲低mi R-30e*则加重凋亡;4通过检测mt DNA的拷贝数发现顺铂诱导的线粒体损伤在48 h时有意义,迟于mi R-30e*表达的下调,线粒体膜电位检测JC-1提示过表达mi R-30e*对线粒体有保护作用。结论:顺铂处理小管细胞可降低其mi R-30e*的表达;体外过表达mi R-30e*对顺铂引起的小管细胞的凋亡和线粒体损伤具有保护作用,敲低mi R-30e*会加重顺铂诱导的肾近端小管细胞凋亡和线粒体损伤。
- 杨玲云郭燕倪佳佳王荣林加娟丁桂霞黄松明张爱华
- 关键词：顺铂肾近端小管上皮细胞线粒体损伤
- microRNA-709负性调控线粒体功能参与肾小管上皮细胞损伤被引量：1
- 2015年
- 目的探讨microRNA-709（miR-709）在顺铂引起肾小管上皮细胞损伤模型中的作用及机制。方法体外培养小鼠肾小管上皮细胞，予不同浓度（0、1、5、10、20μmol／L）顺铂刺激24h，以10μmol／L顺铂刺激不同时间（0、2、6、12、24h）。采用实时荧光定量PCR（RT—PCR）技术检测细胞miR-709的表达变化。实验组分为上调对照组、miR-709过表达组、下调对照组、miR-709下调组，其中miR-709下调组和下调对照组加顺铂刺激。应用AnnexinV—FITC／PI双染法检测细胞凋亡，分光光度法检测含半胱氨酸的天冬氨酸水解酶（Caspase-3）活性，Westernblot法和RT—PCR检测上皮细胞标志蛋白E-cadherin及其mRNA的变化。JC-1（线粒体膜电位）荧光探针检测线粒体膜电位，流式细胞术检测线粒体超氧化物（mltoSOX）生成，PCR检测线粒体基因（mtDNA）拷贝数。结果miR-709在5μmol／L顺铂刺激小管上皮细胞后开始明显升高（F=22．17，P〈0．05），10μmol／L顺铂刺激12h开始明显升高（F=33．462，P〈0．05）；过表达miR-709后细胞凋亡数目、Caspase-3活性较上调对照组增加，E-cadhenn表达较上调对照组下降，差异均有统计学意义（凋亡：1．54±0．20比1．00±0．23；Caspase-3活性：1．27±0．08比0．97±0．08；E-cadherin：0．47±0．15比1．00±0．10；t=-3．086、-5．882、5．671，P均〈0．05）；线粒体功能指标线粒体膜电位、mtDNA拷贝数较对照组降低，mitoSOX生成较对照组增加，差异均有统计学意义（JC-1：0．80±0．04比1．05±0．08；mtDNA：0．58±0．15比1．00±0．75；mitoSOX：1．31±0．16比1．00±0．05；t=4．687、4．943、-3．694，P均〈0．05）。而顺铂刺激后，miR-709下调组细胞凋亡数目、Caspase-3活性较下调对照组降低，E—cadhefin表达较下调对照组增高，差异均有统计学意义（凋亡：1．35±0．10比1．86±0．44；Caspase-3活性：1．04±0．12比1．30±0．
- 倪佳佳郭燕杨玲云王荣林加娟丁桂霞张爱华黄松明
- 关键词：顺铂线粒体功能肾小管上皮细胞损伤
