于岩飞 作品数:4 被引量:5 H指数:1 供职机构: 南京农业大学动物医学院 更多>> 发文基金: 教育部“新世纪优秀人才支持计划” 国家自然科学基金 江苏省农业科技自主创新基金 更多>> 相关领域: 农业科学 更多>>
猪链球菌2型新型毒力调控因子RfeA的研究 被引量:1 2015年 猪链球菌(Streptococcus suis,SS)是一种重要的人畜共患病原菌,在33个血清型中,2型(SS2)毒力最强、分布最广,但其具体的致病机理尚不完全清楚。前期的比较基因组学研究表明,RTX family exoprotein A gene(rfe A)只存在于强毒菌株中,基因生物信息学分析发现rfe A与epf-like位于同一操纵子上,且与传统毒力因子ef邻近,PCR方法检测表明rfe A在猪链球菌2型中分布广泛。为了研究rfe A的致病机制,利用同源重组构建了rfe A的基因缺失株Δrfe A和互补株CΔrfe A,并通过斑马鱼模型对缺失株、互补株和野生株的毒力进行评估,发现缺失株毒力增强,表明rfe A可能是SS2的一个新调控因子,或者可能影响其他调控因子。 吴光燕 于岩飞 叶琳璐 张炜关键词:猪链球菌 毒力 猪链球菌2型不同mrp基因型与毒力的关系 被引量:5 2016年 【目的】猪链球菌2型(Streptococcus suis serotype 2,SS2)是重要的人畜共患病病原,且有强弱毒株之分,但至今仍缺少合适的毒力标志基因来鉴定致病性SS2。本文旨在研究mrp基因型与SS2毒力的关系。【方法】通过PCR方法鉴定不同SS2菌株的mrp基因型。再通过"内标"化的斑马鱼感染模型和实时荧光定量PCR,分别测定不同mrp基因型菌株的毒力水平和mrp转录水平。【结果】根据PCR结果可将53株SS2分为mrp-A型(27株)和mrp-B型(26株)两种基因型;mrp-A型菌株比mrp-B菌株毒力偏强,且A型菌株中mrp转录水平更高。【结论】发现mrp基因在SS2中分布广泛,但不同菌株中mrp基因型不同,mrp-A型菌株的致病力更强。而且,以mrp非保守区域作为诊断靶点能有效鉴定SS2强毒株。 杜德超 于岩飞 马彩凤 姚火春 陆承平 张炜关键词:猪链球菌2型 毒力 猪鼻支原体热不稳定延伸因子黏附宿主细胞机制的研究 2022年 为研究热不稳定延伸因子(EF-Tu)在猪鼻支原体(Mhr)与宿主互作中的功能,本研究构建了重组质粒pET-EF-Tu并经PCR鉴定正确后,转化BL21(DE3)大肠杆菌后,通过IPTG诱导表达、镍柱亲和层析纯化获得纯化的重组蛋白rEF-Tu。将重组蛋白免疫家兔制备高免血清,采用ELISA方法检测其效价。利用该免疫血清通过western blot和菌落免疫杂交的方法分析EF-Tu在Mhr表面的表达情况,ELISA结果显示制备的多克隆抗体效价达1:200 000以上,且r EF-Tu可表达于Mhr表面;通过间接免疫荧光试验和微孔板黏附试验检测rEF-Tu对猪肾细胞(PK-15)的黏附能力,结果显示rEF-Tu具有黏附能力且该黏附作用具有剂量依赖性;进一步利用微孔板的方法检测r EF-Tu蛋白结合于纤溶酶原和细胞外基质成分的能力,结果表明rEF-Tu蛋白可结合于宿主纤溶酶原以及不同的细胞外基质成分(纤连蛋白、层粘连蛋白、Ⅳ型胶原蛋白和玻连蛋白)。本研究结果表明EF-Tu可于Mhr表面表达、可黏附宿主细胞,并可结合纤溶酶原和多种细胞外基质成分,在Mhr的感染及致病中可能具有重要功能。 李瑶 王佳 邵佳 于岩飞 于岩飞 刘蓓蓓 刘蓓蓓 冯志新 邵国青 熊祺琰关键词:纤溶酶原 细胞外基质 猪肺炎支原体乳酸脱氢酶在诱导猪支气管上皮细胞凋亡中的作用 2024年 猪肺炎支原体感染会引起宿主上皮细胞的损伤及凋亡。上皮屏障的破坏往往导致细菌和病毒的继发感染,给养猪业造成严重的经济损失,但具体的致病机制及毒力因子尚未完全阐明。前期研究发现猪肺炎支原体乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)不仅参与猪肺炎支原体的代谢还与猪肺炎支原体的毒力相关。因此,本研究通过原核表达及亲和层析获得猪肺炎支原体乳酸脱氢酶重组蛋白(recombinant LDH, rLDH),之后分别用不同浓度的rLDH与猪支气管上皮细胞(porcine bronchial epithelial cell, PBEC)孵育,经显微镜观察rLDH对细胞形态的影响,通过CCK-8法检测rLDH对细胞活力的影响。选取对细胞形态及活力影响不显著的50和100μg·mL^(-1) rLDH分别与PBEC孵育,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率,反转录荧光定量PCR(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)法和免疫印记检测凋亡相关基因caspase 3、caspase 8、caspase 9、Bax、BCL-2的转录水平和蛋白水平。结果显示:猪肺炎支原体rLDH呈剂量依赖性地诱导PBEC凋亡,其作用与猪肺炎支原体菌株一致。用rLDH及Mhp 168孵育后,PBEC的促凋亡因子Bax、caspase 3和caspase 9的mRNA水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的mRNA水平显著下调,caspase 8的mRNA水平未发生显著变化。促凋亡因子Bax、caspase 3的蛋白表达水平显著上调,凋亡抑制因子BCL-2的蛋白表达水平显著下调。结果表明,猪肺炎支原体可能通过LDH诱导PBEC内源性细胞凋亡,凋亡相关因子caspase 3、caspase 9、Bax和BCL-2在其中发挥重要作用。 王吉英 尹蕊如 谢星 王海燕 谢星 胡辉 王海燕 冯志新 胡辉 熊祺琰关键词:凋亡