王乐 作品数:3 被引量:6 H指数:2 供职机构: 福建省立医院 更多>> 发文基金: 福建省农科院青年科技人才创新基金 福建省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
Six1蛋白对在结肠癌细胞株HT-29增殖能力影响的实验研究 被引量:2 2016年 目的研究高表达Six1对人结肠癌细胞株HT-29增殖能力的影响。方法运用慢病毒构建高表达Six1的HT-29稳定细胞株,应用Western blot方法、MTT比色法、BrdU法检测Six1的蛋白表达。结果成功构建Six1表达的HT-29Six1+细胞,实验组HT-29Six1+细胞Six1蛋白表达量为对照组HT-29con的4.3倍;采用MTT法,以第1天的吸光度A值作为参照标准,HT-29Six1+组高于HT-29con组(第2天为2.35±0.68 vs 1.03±0.67,第3天为6.33±0.60 vs 2.44±1.01,第4天为14.70±1.40 vs 4.60±1.30,第5天为20.60±2.40 vs 9.25±1.60),从第3天开始,差异有统计学意义(P<0.05)。采用BrdU法HT-29Six1+组的比例高于HT-29con组[(45.97±1.21)%vs(29.56±1.05)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 HT-29Six1+细胞株稳定高表达Six1,高表达Six1可以增强HT-29细胞的增殖能力。 蔡少鑫 陈炆颖 王乐 杨常顺 李伟华关键词:HT-29 结肠癌 三联组氨酸核苷酸结合蛋白2对结肠癌细胞SW620侵袭迁移的影响 2016年 目的 观察上调三联组氨酸核苷酸结合蛋白2(Hint2)表达对结肠癌细胞SW620侵袭迁移能力的影响,探讨Hint2表达调控SW620侵袭迁移的可能机制.方法 用慢病毒pLVX-IRES-ZsGreen1-Hint2载体转染293T后构建Hint2过表达SW620^Hint2+细胞株;Western blot检测细胞Hint2的表达水平,Transwell侵袭迁移实验以及划痕实验检测结肠癌细胞侵袭数目和迁移距离,分析其与Hint2表达的关系.结果 成功构建Hint2过表达的SW620^Hint2+细胞;SW620^Hint2+组细胞Hint2蛋白表达量为SW620组的3.1倍;SW620^Hint2+组穿透基质胶的细胞数显著少于SW620组[(52.33±5.05)%比(112.83±10.11)%,P<0.05].SW620^Hint2+组迁移的细胞数显著少于SW620组[(51.17±11.64)%比(111.17 ±11.64)%,P<0.05].划痕实验24 h后SW620^Hint2+组细胞迁移的平均距离显著短于SW620组[(0.37 ±0.03) mm比(0.71±0.04)mm,P<0.05].细胞Hint2的表达水平与其侵袭及迁移能力呈负相关(r=-1.000,P<0.01).结论 成功构建后的SW620^Hint2+细胞株稳定过表达Hint2,其侵袭及迁移的能力明显下降,由此提示Hint2的上调可能参与结肠癌细胞转移和迁移能力的负性调控。 周飙寰 王欢 蔡少鑫 杨常顺 王乐 李伟华关键词:结肠癌 迁移 K-ras、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1基因在结直肠癌组织中突变特征及其临床意义 被引量:4 2015年 目的 探讨K-ras、鼠类肉瘤滤过性毒菌致癌同源体B1 (BRAF)基因在结直肠癌中突变特征及其临床意义.方法 采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)法检测412例结直肠癌组织K-ras、BRAF基因常见密码子突变特征,分析K-ras、BRAF突变与结直肠癌临床病理特征的关系.结果 412例结直肠癌K-ras基因突变率为37.9%,直肠癌K-ras基因突变率为45.2%,高于结肠癌(28.8%,P <0.05).K-ras基因突变中单个位点突变率为35.4%,2个位点的突变率为2.2%,3个位点突变率为0.2%.K-ras突变常见于12和13位密码子,12位密码子占32.0%,分别为G12D(15.0%)、G12V(9.5%)、G12C(3.9%)、G12S (2.9%)、G12A(2.4%)和G12R (0.7%),13位密码子占6.1%,均为G13D.K-ras基因突变方式以G→A为主.Ⅰ+Ⅱ期结直肠癌K-ras基因突变率(30.4%)低于Ⅲ+Ⅳ期(45.2%,P<0.05),基因位点突变分析只发现G12V突变率在TNM分期Ⅰ+Ⅱ期的突变率(5.9%)低于Ⅲ+Ⅳ期(13.0%,P<0.05).K-ras基因突变与性别、年龄、肿瘤大小、肿瘤大体类型、组织学分型以及淋巴结转移等临床病理参数无关(P>0.05).结直肠癌中BRAFV600E基因突变率为2.4%,其中结肠癌中的BRAF基因的突变率(4.9%)高于直肠癌(0.4%,P<0.05).结论 在结直肠癌中,K-ras基因突变以单个位点突变为主,其中又以G12D最为常见,其中G12V突变可能与结直肠癌进展相关.直肠癌K-ras突变率高于结肠癌,而结肠癌BRAF突变率高于直肠癌.K-ras、BRAF基因突变在结肠癌和直肠癌中的作用机制可能不同. 杨常顺 李伟华 蔡少鑫 王欢 王乐 周飙寰