徐立璋 作品数:9 被引量:8 H指数:2 供职机构: 上海长征医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 国家高技术研究发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
水平振摇在骨髓间充质干细胞提纯中的作用 2015年 目的研究水平振摇对全骨髓贴壁分离大鼠骨髓间充质干细胞在细胞数量、纯度、凋亡及远期增殖及分化能力的影响,探索更为简单、高效的间充质干细胞提纯方法。方法在全骨髓贴壁法的基础上,使用水平摇床,以180 r/min、4 h为干预条件,水平振摇后计算贴壁细胞总数量;使用流式细胞仪测定贴壁细胞纯度及凋亡情况;使用MTT法测定振摇后贴壁细胞24 h的增殖情况;对分离纯化后细胞使用定向诱导培养基进行诱导分化。结果经振摇处理后,获得的细胞总量有所下降,细胞纯度显著提升,凋亡略有增加,增殖情况变化不大,具有向成骨细胞和脂肪细胞分化的能力。结论水平振摇法可显著提高全骨髓贴壁法的提纯效率,具有推广价值。 王伟恒 邓国英 徐立璋 程自申 杨向群 叶晓健关键词:骨髓 间质干细胞 不同年龄大鼠终板软骨细胞抗氧化能力研究 被引量:2 2016年 目的 :通过研究不同年龄大鼠的终板软骨细胞氧化应激的差异,探讨衰老对终板软骨细胞抗氧化能力的影响。方法:原代培养获取SD大鼠2个月、18个月来源的终板软骨细胞鉴定后,使用第三代细胞进行实验。实验分为两组,A组为2个月大鼠来源的终板软骨细胞,B组为18个月大鼠来源的终板软骨细胞。待A、B两组细胞贴壁后,通过β-半乳糖脱氢酶染色和RT-PCR对端粒酶长度进行检测,比较两组细胞衰老的差异;通过总抗氧化能力试剂盒检测两组细胞总抗氧化能力的不同。以浓度为200umol/L过氧化氢对细胞进行2.5h的处理,RT-PCR法检测处理前后两组细胞Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、caspase-3及B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,bcl-2)的m RNA表达情况,使用流式细胞仪检测两组细胞的凋亡情况。对Ⅱ型胶原、蛋白聚糖、caspase-3及bcl-2的相对表达量进行组间t检验,P<0.05为差异有统计学意义。结果 :未使用过氧化氢处理时,A、B两组终板软骨细胞的在β-半乳糖脱氢酶染色、Ⅱ型胶原、蛋白聚糖表达及凋亡率无明显差异(P>0.05),而B组在端粒酶的相对长度(T/S=10±2)及总抗氧化能力(0.72±0.18)较A组(T/S=135±5,1)显著降低(P<0.05)。在相同条件的过氧化氢刺激后,B组终板软骨细胞的Ⅱ型胶原(0.60±0.16)、蛋白聚糖(0.75±0.22)表达明显低于A组细胞(P<0.05),而凋亡率显著高于A组细胞(P<0.05)。结论 :不同年龄大鼠终板软骨细胞衰老及抗氧化能力存在差异,衰老越明显的终板软骨细胞,总抗氧化能力越低,抵抗过氧化损伤的能力越差。 黄晓东 叶晓健 王洋 王伟恒 徐立璋 马俊 邓国英关键词:总抗氧化能力 衰老 凋亡 不同锌钙摩尔比的锌修饰硅酸钙陶瓷涂层对骨髓间充质干细胞的生物学影响及机制研究 目的: 骨植入体植入失败是目前临床亟待解决的问题。前期研究显示锌钙摩尔比为0.5的锌修饰硅酸钙(Ca2ZnSi2O7)陶瓷涂层比硅酸钙(CaSiO3)陶瓷涂层具有更好的促前成骨细胞粘附、增殖及分化的作用,并能与宿主骨界... 徐立璋关键词:骨髓间充质干细胞 BMSCs旁分泌对软骨细胞IL-1β损伤后的保护作用 被引量:1 2015年 目的研究BMSCs对于软骨细胞IL-1β损伤后的保护作用,以及BMSCs存在情况下软骨细胞对于IL-1β抵抗能力的变化。方法取SD大鼠6只随机分为实验组(制备膝关节软骨缺损)和对照组,6 h后取软骨组织行实时定量PCR(quantitative real-time PCR,q RT-PCR)和ELISA检测IL-1β基因表达和相对含量。BMSCs修复功能实验:取培养的18孔SD大鼠软骨细胞随机分为3组(n=6),空白组不作处理,损伤组和共同培养组细胞采用IL-1β干预后,共同培养组使用Transwell小室建立SD大鼠BMSCs与软骨细胞共同培养体系,采用q RT-PCR法测定软骨细胞含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase-3)和含凝血酶敏感素基序的去整合素金属蛋白4(a disintegrin and metalloprotease with Thrombospondin motifs 4,ADAMTS-4)、ADAMTS-5 m RNA相对表达量,ELISA法检测各组Caspase-3含量,以及流式细胞术检测各组细胞凋亡率。BMSCs保护功能实验:将12孔软骨细胞分为2组(n=6),共同培养组置入含BMSCs的Transwell小室后,两组均采用IL-1β干预,检测指标同修复功能实验。结果动物体内损伤现象研究结果示,实验组IL-1βm RNA相对表达量和IL-1β相对含量均高于对照组(P<0.05)。BMSCs修复功能实验结果示,损伤组和共同培养组Caspase-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5 m RNA相对表达量及Caspase-3含量、细胞凋亡率均显著高于空白组,损伤组显著高于共同培养组,差异均有统计学意义(P<0.05)。BMSCs保护功能实验结果示,共同培养组Caspase-3、ADAMTS-4、ADAMTS-5 m RNA相对表达量及Caspase-3含量、细胞凋亡率均显著低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论作为组织工程种子细胞的BMSCs同时具有抗炎、抗凋亡的应用潜质。 徐立璋 邓国英 王伟恒 黄晓东 杨向群 叶晓健关键词:BMSCS 旁分泌 抗炎症 抗凋亡 种子细胞 有限性选择性颈椎前路减压融合术治疗老年多节段颈椎病 被引量:2 2017年 颈椎病作为一种退变性疾病,随着人均寿命的延长,在老年病人中发病率逐渐增高。老年人颈椎病往往表现出起病隐匿,就医晚,症状重,多节段受累的特点,而且老年病人合并慢性内科疾病的比例非常高,故老年人颈椎病的手术治疗有其独特的规律[1]。现回顾分析本中心有限性选择性颈椎前路减压融合手术治疗老年人多节段颈椎病17例的治疗情况。1资料与方法1.1病例资料1.1.1一般情况: 唐峰 谢宁 席焱海 余将明 王洋 马俊 徐立璋 黄晓东关键词:退变性疾病 颈椎前路减压 椎间隙高度 相邻节段 颈椎后路 生长因子对椎间盘终板软骨细胞抗氧化能力的影响 2017年 背景:维生素E的抗氧化能力众所周知,但其他生长因子是否对终板软骨细胞具有抗氧化能力,国内外未见报道。目的:观察不同生长因子对椎间盘终板软骨细胞抗氧化能力的影响。方法:将原代培养获取的终板软骨细胞后分为4组,即空白对照组、血清剥夺组、过氧化氢刺激组、过氧化氢刺激后+不同生长因子干预组。第4组再细分为胰岛素生长因子1组、碱性成纤维细胞生长因子组、转化生长因子β组、Forskolin组、维生素E组,共5个亚组,通过RT-PCR检测各组半胱氨酸蛋白酶3、基质金属蛋白酶13、基质金属蛋白酶3、基质金属蛋白酶抑制剂1及凝血酶4、凝血酶5等基因表达情况;通过凋亡试剂盒及流式细胞仪分析不同组内细胞凋亡情况;Western blot检测细胞的合成与分泌;使用试剂盒检测总抗氧化能力和过氧化氢含量,并进行统计学分析。结果与结论:(1)不同生长因子对终板软骨细胞凋亡、分泌和抗氧化能力的影响存在差异;(2)总体来讲,转化生长因子β和Forskolin对过氧化氢刺激后的细胞具有进一步损伤作用,而胰岛素生长因子1和维生素E对损伤后的细胞存在保护作用。 黄晓东 邓国英 王伟恒 徐立璋 马俊 叶晓健关键词:软骨细胞 胰岛素生长因子1 转化生长因子 FORSKOLIN 总抗氧化能力 锌修饰硅酸钙陶瓷涂层与骨整合 2016年 背景:前期实验在钛基材表面制备了锌修饰硅酸钙陶瓷涂层,具有良好的化学稳定性及抗菌性能。目的:进一步观察锌修饰硅酸钙陶瓷涂层对骨整合的影响。方法:将锌修饰硅酸钙陶瓷涂层钛片(实验组)、硅酸钙陶瓷涂层钛片(对照组)及纯钛片(空白对照组)分别与前成骨细胞MC3T3-E1共同培养,检测细胞的黏附、增殖、钙化及Ⅰ型胶原和骨钙素表达。将上述3组材料分别置入新西兰大白兔股骨内,置入后1.5个月观察骨质增生及植入体与宿主骨整合情况。结果与结论:(1)体外实验:培养12 h,实验组黏附细胞数量多于对照组、空白对照组(P<0.05);培养14 d,实验组细胞增殖活性、钙结节形成能力强于对照组、空白对照组(P<0.05);培养21 d,3组细胞Ⅰ型胶原表达无差异,但实验组骨钙素表达高于对照组、空白对照组(P<0.05)。(2)体内实验:实验组骨质增生明显,涂层材料与骨界面直接接触,界面间可见新骨生成,纤维组织分隔较少;对照组可见少量骨质增生,空白对照组几乎不见骨质增生,且两组植入体表面小部分区域与宿主骨接触,大部分区域与周围的骨小梁之间有纤维组织分隔。(3)结果表明,锌修饰硅酸钙陶瓷涂层可促进钛种植体与宿主骨整合。 徐立璋 叶晓健 李恺 郑学斌 唐峰 许鹏 席焱海 许国华 侯春林 余将明关键词:骨整合 锌 生物材料 MC3T3-E1细胞 锌修饰硅酸钙生物陶瓷涂层的体外生物相容性研究 2015年 目的研究锌修饰硅酸钙生物陶瓷涂层的体外生物相容性,为该涂层临床应用的可行性提供实验依据。方法检测该涂层的物理表征;检测该涂层浸提液的离子浓度;用不同稀释比例的浸提液培养MC3T3-E1细胞,观察细胞形态,MTT法检测细胞相对增殖率,并检测细胞凋亡水平;测定溶血率。结果该涂层浸泡72 h后,浸提液中钙、硅、锌离子浓度均明显升高;用不同稀释比例的浸提液培养的MC3T3-E1细胞都表现出正常的细胞形态,其中3.125%、6.25%组细胞量较多,相对增殖率高于阳性对照组,且细胞凋亡率低于阳性对照组(完全培养基);随浸提液浓度增加,可对细胞增殖产生轻度抑制作用,凋亡率逐渐升高;溶血试验结果显示,该涂层浸提液的溶血率为0.5%。结论锌修饰硅酸钙生物陶瓷涂层没有细胞毒性、生物相容性好,具有作为骨植入体及其他生物材料表面改性的生物学基础。 徐立璋 余将明 李恺 郑学斌 邓国英 王伟恒 黄晓东 叶晓健关键词:生物相容性 高浓度骨桥蛋白诱导双足直立雌性小鼠脊柱侧凸模型 被引量:3 2016年 背景:近年来相关研究证实骨桥蛋白水平增高可能导致特发性脊柱侧凸发生发展。建立合适的青少年特发性脊柱侧凸动物模型对于此类疾病的研究与治疗具有重大意义。目的:观察高浓度骨桥蛋白诱导双足直立雌性小鼠脊柱侧凸的发生情况,为建立理想的青少年特发性脊柱侧凸药物模型提供依据。方法:选取同周龄C3H/HeJ小鼠,随机分为高浓度骨桥蛋白雌性小鼠及雄性小鼠各20只,并设立对照雄性小鼠组及对照雌性小鼠组各20只。4组小鼠均于3周龄施行上肢截肢合并鼠尾切除术建立双足直立小鼠模型,术后放置特殊鼠笼诱导直立状态。高浓度骨桥蛋白雌性小鼠组及高浓度骨桥蛋白雄性小鼠组每日腹腔注射高浓度(40μg/kg)骨桥蛋白,对照组腹腔注射生理盐水,诱导3个月后,行小动物脊柱X射线检查,测量Cobb角大于10°定为侧凸诱导成功,评估侧凸发生率及严重程度。结果与结论:(1)高浓度骨桥蛋白雌性小鼠组18只发生脊柱侧凸,Cobb角16°-38°,平均(25.8±6.7)°,高浓度骨桥蛋白雄性小鼠组16只发生脊柱侧凸,Cobb角11°-34°,平均(20.9±6.8)°;对照雄性小鼠组8只发生脊柱侧凸,Cobb角12°-21°,平均(15.6±3.1)°;对照雌性小鼠组9只发生脊柱侧凸,Cobb角11°-24°,平均(17.1±4.5)°;(2)高浓度骨桥蛋白雌性、雄性小鼠组脊柱侧凸发生率均明显高于对照雌性、雄性小鼠组(P<0.05),而脊柱侧凸发生率在高浓度骨桥蛋白雌性组与雄性组间差异无显著性意义(P>0.05),但其侧凸角度高浓度骨桥蛋白雌性组较高浓度骨桥蛋白雄性组明显加重(P<0.05);(3)结果表明,高浓度骨桥蛋白水平诱导的雌性双足直立小鼠其侧凸发生率更高,侧凸严重程度更重,其更贴近于人类特发性脊柱侧凸女性高发的实际情况。 唐峰 谢宁 吴涛 刘军 王彬彬 王洋 徐立璋关键词:骨桥蛋白质 骨桥蛋白 雌性