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一种乙脑/黄热嵌合病毒及其制备方法和应用: 本发明公开了一种乙脑/黄热嵌合病毒的cDNA克隆，其核苷酸序列如SEQ？ID？NO.1所示。本发明还公开了乙脑/黄热嵌合病毒及其应用，以及一种预防黄热病的疫苗。本发明嵌合病毒Chimeri-JYF的毒性小，免疫保护作用好...; 杨会强汪伟何婷刘莉娜赵宇刘俐曾献武

乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的纯化: 2015年; 目的建立纯化乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)的方法。方法应用超滤浓缩和分子筛凝胶柱层析纯化乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)SA14-14-2病毒液,检测其病毒滴度、原代地鼠肾细胞残留蛋白含量、牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量,并进行小鼠脑内致病力试验、乳鼠传代返祖试验、异常毒性试验,制备纯化冻干疫苗,进行热稳定性试验。结果纯化后的JEV病毒滴度高于7.0 lg PFU/ml,平均回收率为23%;牛血清白蛋白残留量、庆大霉素残留量及安全性试验均符合《中国药典》三部(2010版)相关规定,去除了约95%的原代地鼠肾细胞残留蛋白;制备的冻干疫苗及热稳定性试验中的病毒滴度均高于5.7 lg PFU/ml,且热稳定性试验中病毒滴度下降未超过1.0 lg,符合《中国药典》三部(2010版)规定。结论建立了乙型脑炎减毒活疫苗(SA14-14-2株)纯化工艺,但病毒回收率较低,不适宜规模化生产,对乙型脑炎病毒减毒活疫苗质量控制具有指导意义。; 刘杰孙艳刘辉康庄毛川成刘莉娜陈智牟建超赵宇刘俐杨会强李玉华; 关键词：乙型脑炎减毒活疫苗 SA14-14-2 纯化

一种疫苗保护剂、狂犬病疫苗及其制备方法: 本发明提供了一种疫苗保护剂，它包含以下百分含量的成分：二糖50-80份、人血白蛋白20-30份、明胶10份、氨基酸1.5-1.65份。本发明还提供了一种狂犬病疫苗及其制备方法。本发明疫苗保护剂可有效增强狂犬病疫苗冻干剂的...; 李玉华吴永林毛川成刘杰赵宇吴曼萍牟建超刘蓉杨会强孙艳; 文献传递

登革病毒1型E蛋白的原核细胞表达及多克隆抗体的制备被引量：1: 2013年; 目的构建登革病毒1型(DENV-1)E蛋白的原核细胞表达载体并进行原核细胞表达,并制备其多克隆抗体。方法利用聚合酶链反应(PCR)扩增DENV-1E蛋白序列,经酶切后将其插入原核细胞表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-32-D1-E。重组质粒转化E.Coli Rosetta(DE3)感受态细胞,目的蛋白经异丙基-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,纯化后采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)初步分析蛋白表达情况,并用纯化后的表达蛋白免疫家兔,制备该蛋白的多克隆抗血清,用间接酶联免疫吸附测定(ELISA)检测抗体的效价,Western blot检测抗体的特异性。结果成功构建了pET-32-D1-E原核细胞表达重组质粒,DENV-1E蛋白获得高效表达;纯化后的重组蛋白免疫家兔获得的特异性抗血清效价为1∶25 600,Western blot证实其特异性良好。结论成功构建了DENV-1E蛋白的原核细胞表达载体,并制备了可用于DENV快速检测的高效多克隆抗体。; 汪伟丁显平杨会强李竹石谭帅赵宇刘莉娜谭昌耀曾献武; 关键词：登革病毒原核细胞

一种疫苗保护剂、狂犬病疫苗及其制备方法: 本发明提供了一种疫苗保护剂，它包含以下百分含量的成分：二糖50-80份、人血白蛋白20-30份、明胶10份、氨基酸1.5-1.65份。本发明还提供了一种狂犬病疫苗及其制备方法。本发明疫苗保护剂可有效增强狂犬病疫苗冻干剂的...; 李玉华吴永林毛川成刘杰赵宇吴曼萍牟建超刘蓉杨会强孙艳

登革病毒3型E蛋白的原核表达及抗体的制备被引量：2: 2013年; 目的原核表达并纯化登革病毒3型（DENV-3）E蛋白，并用于制备其抗体。方法采用PCR技术克隆DENV-3E蛋白基因，插入原核表达质粒载体pET-32a（＋），转化大肠杆菌RoseRa（DE3），IPTG诱导表达。表达产物经纯化后，免疫家兔，制备DENV-3E蛋白抗血清，并用于Westernblot鉴定。同时，采用ELISA测定其抗体效价，并初步应用于DENV-3的检测。结果重组表达载体经双酶切及测序证实构建正确；表达的重组蛋白相对分子质量约为65×103，主要以包涵体形式表达；用纯化的包涵体蛋白免疫家兔后，获得的特异性抗血清效价为1：20480，该血清可与DENV-3发生特异性反应。结论本研究原核表达并纯化了DENV-3E蛋白，制备了高滴度的特异性兔抗血清。制备获得的DENV-3E蛋白抗体可用于登革病毒的鉴定，为登革病毒相关研究奠定了基础。; 林华杨会强李竹石杨健赵宇刘俐葛永红曾献武曹毅乔代蓉李玉华; 关键词：登革病毒 E蛋白原核表达多克隆抗体

一种乙脑/黄热嵌合病毒及其制备方法和应用: 本发明公开了一种乙脑/黄热嵌合病毒的cDNA克隆，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明还公开了乙脑/黄热嵌合病毒及其应用，以及一种预防黄热病的疫苗。本发明嵌合病毒Chimeri‑JYF的毒性小，免疫保护作用好...; 杨会强汪伟何婷刘莉娜赵宇刘俐曾献武; 文献传递

登革病毒1型E蛋白第三结构域的原核表达及其免疫原性: 2014年; 目的在大肠埃希菌中表达登革病毒(Dengue virus,DENV)1型(DENV-1)E蛋白第三结构域(EⅢ),并分析重组蛋白的免疫原性。方法利用PCR技术从质粒p MD-D1pr M/E中扩增DENV-1的EⅢ序列,插入原核表达载体p ET-32a(+),构建重组表达质粒p ET-D1EⅢ,转化至E.coli Rosetta2(DE3)中,IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经亲和层析和阴离子交换层析纯化后,免疫家兔,制备多克隆抗体,采用Western blot法检测抗体的特异性,间接ELISA法检测抗体滴度,蚀斑减少中和试验(plaque reduction neutralization test,PRNT)检测中和抗体效价。用纯化的重组蛋白免疫经腹部皮下多点注射BALB/c小鼠3次,末次免疫2周后,用DENV-1(Hawaii株)经脑内攻击,分析重组蛋白对小鼠的免疫保护力。结果重组原核表达质粒p ET-D1EⅢ经双酶切和测序证实构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为33 000,主要以可溶性形式表达,占重组菌裂解上清蛋白量的52.37%;纯化的纯度可达90%以上,浓度达2 mg/ml;制备的多克隆抗体特异性强,效价高;重组蛋白能保护57.1%的小鼠免受致死剂量DENV的攻击。结论成功在E.coli Rossetta2(DE3)中高效表达了DENV-1 EⅢ蛋白,纯化的重组蛋白免疫家兔获得的多克隆抗体具有较强的特异性和较高的效价,且在小鼠免疫保护试验中显示出较好的保护力。本实验为进一步研究E蛋白的功能和登革新型疫苗的开发奠定了基础。; 汪伟李竹石谭帅赵宇刘莉娜刘俐蔡峰曾献武杨会强; 关键词：登革病毒 E蛋白原核细胞免疫原性免疫保护力

登革病毒4型E蛋白的表达与多克隆抗体的制备被引量：1: 2012年; 目的在原核细胞中表达登革病毒4型E蛋白及E蛋白III区,分别以两种蛋白免疫家兔,获得可检测登革病毒的多克隆抗体。方法将登革病毒4型E蛋白与E蛋白III区编码序列克隆到pET-32a(+)质粒中,分别构建两种蛋白的表达载体,以IPTG诱导其在Rosetta细胞中的大量表达,并进行SDS-PAGE检测。分别以两种蛋白免疫家兔,制备出针对E蛋白与E蛋白III区的多克隆抗体,并对其进行Western blot鉴定。结果登革病毒4型E蛋白与E蛋白III区在Rosetta细胞中以包涵体的形式大量表达;利用所制备的多克隆抗体对登革病毒进行检测,出现了预期的条带。结论本研究制备获得的多克隆抗体可用于登革病毒的检测,为登革病毒相关研究奠定了基础。; 李竹石林华杨健杨会强曾献武赵宇刘俐刘莉娜康庄俞永新李玉华; 关键词：E蛋白多克隆抗体

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赵宇

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