张占东
- 作品数：4 被引量：4H指数：2
- 供职机构：北京生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 昆虫细胞分类技术的应用与发展
- 2016年
- 昆虫细胞杆状病毒表达系统作为四大表达系统之一，已经被广泛应用于生物制药领域，作为该表达系统的支撑基础，昆虫细胞开始成为继哺乳动物细胞之后的另一种新型细胞基质，在疫苗及生物技术产品领域得到开发应用。然而，昆虫细胞与哺乳动物细胞在细胞特性等方面存在显著差异，建立适合昆虫细胞特性的质量控制方法已经成为生物制药领域必须要解决的问题。此文仅就昆虫细胞鉴定方法研究进展做一综述，为开发及建立昆虫细胞个性化鉴别方法提供参考。
- 孙立影张占东李媛媛孟淑芳
- 关键词：昆虫细胞基质
- HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白的原核表达、纯化及其免疫原性被引量：3
- 2013年
- 目的 原核表达、纯化HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白,并分析其免疫原性。方法 生物信息学方法预测鼠血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的B细胞抗原表位,采用重叠延伸PCR（splicing by overlap extension PCR,SOE-PCR）法将VEGF抗原表位基因插入到HBcAg基因的免疫优势区内,合成HBcAg-VEGF基因序列,克隆至原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-32a-HBcAg-VEGF,转化大肠埃希菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达。表达产物经羟基磷灰石CHT层析、Sephacryl S-400HR凝胶过滤层析纯化后,与Al（OH）3佐剂混合,分别于第0、7、14、21天经肌肉免疫BALB/c小鼠1次,第28天采血,ELISA法检测血清中抗VEGF抗原表位抗体,VEGF受体结合抑制试验筛选具有良好免疫原性的VEGF优势抗原表位。对筛选出的优势抗原表位融合蛋白进行表达及纯化条件的优化。结果 生物信息学软件预测了6个VEGF的B细胞抗原表位;6个重组表达质粒经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的HBcAg-VEGF抗原表位融合蛋白相对分子质量为14400～20100,纯度均在85%以上,除HBcAg-VEGF3以单体形式存在、不形成颗粒外,其他融合蛋白均能形成VLP;各组HBcAg-VEGF融合蛋白免疫小鼠后,均刺激机体产生了针对VEGF抗原表位肽的特异性抗体,其中HBcAg-VEGF1组抗体水平最高,且抑制VEGF与VEGFR结合的能力最强;采用优化的条件表达、纯化的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白纯度达95%以上。结论 筛选得到的HBcAg-VEGF1抗原表位融合蛋白显示出较好的免疫原性,为进一步研究其抗肿瘤效应奠定了基础。
- 张占东徐静李计来李树香周亚王欣怡刘敬张云涛
- 关键词：乙型肝炎核心抗原抗原表位融合蛋白原核细胞免疫原性
- 以血管内皮生长因子及其受体为靶点的肿瘤疫苗研究进展被引量：2
- 2012年
- 肿瘤的生长、侵袭和迁移依赖于血管新生。因此，以抑制肿瘤血管形成为目标的抗肿瘤治疗策略是当前研究的热点。血管内皮生长因子及其受体在肿瘤血管新生这一病理性血管形成过程中起关键作用，从而使它们成为研发肿瘤疫苗的靶点。此文就疫苗的研发基础、免疫机制及研究进展做一综述。
- 张占东张云涛徐静
- 关键词：血管内皮生长因子类受体血管内皮生长因子癌症疫苗免疫疗法
- HBcAg—VEGF1抗原表位融合蛋白抗肿瘤作用的实验研究
- 2014年
- 目的通过BALB／c小鼠肿瘤模型观察HBcAg．VEGFl（血管内皮生长因子）抗原表位融合蛋白的抗肿瘤作用。方法将接种了10。个CT-26结肠癌细胞的BALB／c肿瘤小鼠随机分为HBcAg—VEGFl组、HBcAg组和生理盐水（NS）组，每组10只。HBcAg—VEGFl组、HBcAg组分别肌肉注射含铝佐剂的HBcAg—VEGFl、HBcAg蛋白各20斗g／100ill每只；NS组注射生理盐水，每周1次共免疫4次。检测小鼠血清中抗VEGF抗体和VEGF浓度的变化趋势、肿瘤体积、生存率、肿瘤重量及微血管密度等指标，分析其抗肿瘤效果。结果在其抗肿瘤实验中，HBcAg．VEGFl组血清中产生了较高滴度的抗VEGF抗体，其VEGF浓度显著低于HBcAg组和Ns组；肿瘤体积、生存率等指标与HBcAg组和Ns组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）；HBcAg—VEGFl组、HBcAg组和Ns组的肿瘤组织微血管密度分别为（18．6±2．7）、（39．8±4．9）和（38．4±6．1），肿瘤重量分别为（3．937±0．370）g、（6．039±1．016）g和（6．363±0．941）g，HBcAg—VEGFl组与其他两组比较，差异均有统计学意义（p〈0．01）。结论HBcAg—VEGFl抗原表位融合蛋白能够刺激肿瘤小鼠机体产生免疫应答，产生特异性的抗VEGF抗体，并且能够通过减少血管新生来抑制CT-26肿瘤组织的生长。
- 张占东徐静李计来李树香周亚王欣怡刘敬张云涛
- 关键词：融合蛋白免疫应答抗血管生成
