夏斌
- 作品数：8 被引量：4H指数：1
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- 相关领域：医药卫生环境科学与工程更多>>
- FB1经由PXR介导肝细胞中PP2A-B56γ抑和诱导细胞毒性
- 夏斌廖昆张玉静庄群瑛邱杨骆冰何承勇林育纯林忠宁
- 关键词：肝细胞毒性
- DEHP对人肝L02细胞毒性作用及其核因子-κB机制研究
- 1.引言邻苯二甲酸酯类(PAEs)化合物是一类包含有多种成分的持久性环境污染物;其中邻苯二甲酸二-(2-乙基)乙酯(DEHP)是使用最广泛的PAEs增塑剂。研究表明DEHP可导致多种有害效应,包括肝、肾毒性,睾丸毒性,但...
- 胡耀明陈宇曦李晓杰陈慧峰麦剑荣夏斌张玉静廖昆林育纯林忠宁
- FB1经由PXR介导肝细胞中PP2A-B56γ抑制和诱导细胞毒性
- 目的:黄曲霉毒素B1（AFB1）作为常见于食物中的环境污染物,其靶向肝脏发挥毒性作用:除了慢性致癌作用,AFB1急性暴露引起的肝细胞毒性损伤受到关注。本研究拟探讨AFB1诱导肝细胞毒性作用中孕烷X受体（PXR）介导的蛋白...
- 夏斌廖昆张玉静庄群瑛邱杨骆冰何承勇林育纯林忠宁
- 关键词：肝细胞毒性
- 文献传递
- 核因子I-B高表达对肝L02细胞中蛋白磷酸酶2A-B55δ靶向调控研究
- 2013年
- 目的构建核因子I-B基因(NFIB)真核表达重组质粒,应用于其高表达调控肝细胞中蛋白磷酸酶2A(PP2A)的B亚基基因转录的功能学验证。方法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得人NFIB mRNA片段,克隆入真核绿色荧光蛋白表达载体(pEGFP-N1),构建pEGFP-NFIB重组质粒后,分别给予250、500、1 000 ng转染永生化人正常肝L02细胞建立NFIB高表达细胞模型(相应设为250、500和1 000 ng剂量组),对照组为250 ng pEGFP-N1转染的L02细胞,荧光定量聚合酶链反应检测NFIB mRNA,激光共聚焦和免疫印迹法(WB)检测核因子-1(NF-1)蛋白水平。电泳迁移率实验分析与NF-1相结合的DNA序列的特异性,荧光素酶报告基因检测PP2A-B55δ亚基基因(PPP2R2D)启动子区的转录活力,RT-PCR和WB检测细胞内PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平。结果双向测序证实pEGFP-NFIB重组表达质粒构建成功。与对照组比较,各剂量组L02细胞中NFIB mRNA相对水平增高(P<0.01),增强型绿色荧光蛋白、NFI-B蛋白表达水平均升高(P<0.05)。NF-1可与PPP2R2D基因启动子区(2R2Dp)-462G>A不同多态性序列结合,NFIB高表达使L02细胞中2R2Dp-462G启动子活力下降(P<0.05),PPP2R2D mRNA和PP2A-B55δ蛋白水平均升高(P<0.05)。结论成功构建人NFIB真核表达重组质粒,应用于人肝细胞中证实NF-1靶向PPP2R2D的功能学调控作用。
- 麦剑荣林育纯陈慧峰陈宇曦夏斌廖昆张玉静高艳芳林忠宁
- 关键词：蛋白磷酸酶2A
- 镉对肝细胞中PPP2R1A启动子区甲基化及其转录水平的影响被引量：1
- 2014年
- 目的：分析镉染毒处理肝细胞中蛋白磷酸酶2A（ PP2A）-Aα支架亚基基因PPP2R1A启动子区甲基化状态及其转录水平的改变。方法采用永生化人正常肝L02细胞及肝细胞癌HepG2细胞为研究对象，对其进行以下分组和处理：①低、中和高剂量氯化镉（ CdCl2）处理组，分别予浓度为20.0、40.0和60.0 μmol/L CdCl2处理24 h；②低、中和高剂量5-氮杂-2’-脱氧胞苷（5-Aza-dC）处理组，分别予浓度为2.5、5.0和10.0 μmol/L 5-Aza-dC处理48 h；③5-Aza-dC组予浓度为5.0 μmol/L的5-Aza-dC处理48 h，CdCl2组予浓度为40.0 μmol/L 的 CdCl2处理24 h，（5-Aza-dC＋CdCl2）组予浓度为5.0 μmol/L的5-Aza-dC预处理48 h后再予浓度为40.0 μmol/L CdCl2处理24 h；④ CdCl2处理组予浓度为40.0 μmol/L CdCl2处理24 h。上述4种分组均设对照组，予等体积生理氯化钠溶液或二甲基亚砜处理。经①~③处理后的细胞采用实时荧光定量聚合酶链反应（ PCR）检测PPP2R1A、金属硫蛋白1B（MT1B）和DNA甲基转移酶3A（DNMT3A）的mRNA转录水平（以对照组水平为1.00）。经④处理后的细胞采用亚硫酸氢盐修饰后PCR扩增PPP2R1A启动子区克隆测序检测CpG岛的甲基化情况。结果 L02细胞和HepG2细胞中，不同剂量CdCl2处理组PPP2R1A mRNA转录水平随镉处理剂量增高呈剂量依赖性下降（ P〈0.05）；不同剂量5-Aza-dC处理组PPP2R1A mRNA转录水平随5-Aza-dC处理剂量增加呈剂量依赖性升高（P〈0.05）。2种细胞中，分别与对照组和5-Aza-dC处理组比较，CdCl2处理组和（5-Aza-dC＋CdCl2）处理组PPP2R1A mRNA转录水平均下降（P〈0.05），MT1B和DNMT3A的mRNA转录水平均升高（P〈0.05）；与CdCl2处理组比较，（5-Aza-dC＋CdCl2）处理组PPP2R1A mRNA转录水平均升高（P〈0.05），MT1B和DNMT3A的mRNA转录水平均下降（P〈0.05）。甲基化测序结果显示，L02细胞 CdCl2处理组 PPP2R1A 启动子区甲基化率高于对照组（6.35％ vs 2.31�
- 张玉静陈慧峰廖昆夏斌殷花何承勇林育纯林忠宁
- 关键词：镉L02细胞HEPG2细胞启动子区甲基化
- 黄曲霉毒素B1通过介导内质网应激诱导肝细胞自噬发生
- 目的：内质网介导的自噬被报道参与调控多种外源化学物诱导的毒性反应.常见的环境污染物黄曲霉毒素B1(AFB1)是已确认的肝致癌物；早期研究发现其暴露能一定程度地引起内质网结构和功能紊乱,但其是否能引起内质网应激反应尚未见报...
- 夏斌廖昆张玉静何承勇骆冰邱杨庄群瑛林忠宁林育纯
- 关键词：内质网应激
- 自噬参与促进AFB1致肝细胞DNA损伤的修复进程被引量：2
- 2014年
- 目的探讨黄曲霉毒素B1(AFB1)肝毒性修复进程中细胞自噬的作用。方法以经50μmol/L AFB1预处理24 h的永生化人正常肝L02细胞建立模型,检测AFB1处理撤除不同时间点的细胞DNA双链损伤指标γH2AX蛋白和自噬标志物LC3-Ⅱ蛋白的表达水平;采用免疫荧光法检测AFB1撤除后细胞中γH2AX蛋白荧光焦点和自噬体形成情况;在AFB1撤除后联合应用自噬抑制剂3-MA进行干预实验,检测细胞内γH2AX蛋白的表达水平。结果L02细胞中γH2AX蛋白的动态表达在AFB1处理撤除12 h后达到最高,并在24 h后逐渐降低;自噬蛋白LC3-Ⅱ和自噬体的形成在AFB1处理撤除后逐渐增强;3-MA可明显减缓AFB1撤处理后细胞内γH2AX蛋白的降低进程。结论细胞自噬参与了AFB1诱导肝细胞毒性损伤的修复进程,与促进DNA损伤的修复有关。
- 夏斌廖昆张玉静邱杨骆冰庄群瑛殷花何承勇林育纯林忠宁
- 关键词：黄曲霉毒素B1自噬肝细胞DNA损伤修复
- 孕烷X受体参与AFB1诱导的人肝L02细胞坏死性凋亡被引量：1
- 2014年
- 目的初步探讨孕烷X受体（PXR）对黄曲霉毒素B1（AFB1）诱导肝细胞DNA损伤和坏死性凋亡的影响。方法采用已构建的PXR高表达L02-PXR和空白载体对照L02-p B细胞;实时荧光定量PCR（q RT-PCR）检测细胞NR1I2和CYP3A4 m RNA水平改变;蛋白免疫印迹（Western blotting）检测细胞内PXR和坏死性凋亡下游效应自噬分子LC3-Ⅰ和LC3-Ⅱ蛋白相对表达含量;双核微核试验（CBMN）检测细胞遗传损伤情况;采用噻唑蓝（MTT）法测定AFB1对细胞活性抑制影响;利用坏死性凋亡抑制剂Nec-1构建坏死性凋亡抑制的细胞模型,验证AFB1诱导的坏死性凋亡的效应。结果与L02-p B细胞相比,L02-PXR细胞NR1I2 m RNA和PXR蛋白显著上调（均P〈0.001）。AFB1显著地诱导L02-p B和L02-PXR细胞中CYP3A4 m RNA上调（均P〈0.05）,在L02-PXR细胞中的效应更为明显。与对照组相比,AFB1在5-30μmol/L呈剂量反应关系诱导L02-p B和L02-PXR细胞的微核率增高（均P〈0.05）,L02-PXR细胞更为明显;同时,AFB1明显地诱导两株细胞的核芽率和核桥率,但随AFB1剂量增高都有下降趋势。细胞活性随AFB1浓度（1.875-120μmol/L）增加呈剂量反应关系抑制（均P〈0.05）;且相对于L02-p B细胞,L02-PXR细胞对AFB1处理48 h诱导的细胞活性抑制作用更为敏感（P〈0.05）。Nec-1可显著性抑制AFB1诱导的L02-PXR细胞活性抑制率（P〈0.05）,然而却不能降低AFB1诱导L02-p B细胞活性抑制率。此外,AFB1显著性诱导L02-p B和L02-PXR坏死性凋亡下游LC3-Ⅱ的上调（均P〈0.05）;且与L02-p B细胞相比,Nec-1对AFB1诱导的L02-PXR细胞活性抑制和LC3-Ⅱ上调的抑制效果更为明显（P〈0.05）。结论 PXR参与AFB1诱导人肝细胞DNA损伤介导的坏死性凋亡,与PXR促进AFB1诱导CYP3A4基因上调有关。
- 廖昆夏斌张玉静殷花何承勇林育纯林忠宁
- 关键词：孕烷X受体黄曲霉毒素B1肝细胞毒性
