付志诚
- 作品数：4 被引量：5H指数：1
- 供职机构：第四军医大学西京医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生化学工程更多>>
- 胰岛素通过Akt/FoxO/SVV信号通路抑制缺血再灌注损伤诱导心肌微血管内皮细胞凋亡的作用研究
- 2015年
- 目的探讨胰岛素(INS)在抑制缺血再灌注损伤(IRI)诱导的心肌微血管内皮细胞(CMECs)凋亡中的作用及其分子机制。方法分离和培养大鼠CMECs,建立模拟缺血再灌注(SI/R)模型,分别选用INS、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)特异性抑制剂渥曼青霉素(Wort)和Fox O1/3a干扰RNA处理细胞。采用随机数字表法对大鼠CMECs进行分组:SI/R组(5只大鼠的CMECs),SI/R+INS组(5只大鼠的CMECs),SI/R+INS+Wort组(5只大鼠的CMECs),SI/R+INS+Fox O1siRNA组(6只大鼠的CMECs),SI/R+INS+Fox O3asiRNA组(4只大鼠的CMECs)。采用末端转移酶标记技术(TUNEL)检测各组CMECs凋亡率,ELISA法检测各组Caspase-3活性,Western blotting法检测各组p-Akt(Ser473)、p-Fox O1(Ser256)、p-Fox O3a(Thr32)、生存素(SVV)蛋白表达水平。结果与SI/R组比较,SI/R+INS组、SI/R+INS+Fox O1siRNA组、SI/R+INS+Fox O3asiRNA组CMECs凋亡率及Caspase-3活性均降低(P<0.01);而SI/R+INS+Wort组CMECs凋亡率及Caspase-3活性与SI/R组比较,差异无统计学意义(P>0.05);与SI/R+INS组比较,SI/R+INS+Fox O1siRNA组、SI/R+INS+Fox O3asiRNA组CMECs凋亡率及Caspase-3活性升高(P<0.01);且SI/R+INS+Fox O1siRNA组CMECs凋亡率高于SI/R+INS+Fox O3asiRNA组(P<0.01)。Western blotting检测结果显示:SI/R+INS组p-Akt、p-Fox O1、p-Fox O3a、SVV蛋白表达水平均高于SI/R、SI/R+INS+Wort组、SI/R+INS+Fox O1siRNA组以及SI/R+INS+Fox O3asiRNA组(P<0.01);且SI/R+INS+Fox O3asiRNA组SVV蛋白表达水平低于SI/R+INS+Fox O1siRNA组(P<0.01)。结论 NIS可显著抑制IRI诱导的CMECs凋亡,其机制可能与激活Akt/Fox O/SVV信号通路相关,且主要通过Fox O3a的激活上调SVV蛋白表达水平,从而抑制CMECs凋亡。
- 叶瑾司瑞郝启萌付志诚张荣庆郭文怡
- 关键词：胰岛素信号传导内皮细胞细胞凋亡
- 内质网应激在去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ减轻心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤中的作用
- 目的:探讨内质网应激在去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ (DAAⅠ)抑制大鼠心肌微血管内皮细胞(CMEC)缺血/再灌注损伤中的作用及机制.方法:分离培养大鼠CMEC,建立模拟缺血/再灌注损伤模型,随机分组,分为对照组、模拟缺血/...
- 付志诚司瑞郝启萌张荣庆邵虹郭文怡
- 冠状动脉微血管内皮细胞释放的神经调节蛋白-1对缺血/再灌注心肌的作用及其机制探讨被引量：4
- 2015年
- 目的探讨大鼠缺血/再灌注损伤(I/RI)时,神经调节蛋白-1(NRG-1)在冠状动脉微血管内皮细胞(CMECs)-心肌细胞共培养中的作用及其机制。方法分离培养大鼠CMECs和心肌细胞,建立CMECs-心肌细胞共培养(Coculture)模型和体外模拟缺血/再灌注(SI/R)模型,收集CMECs培养上清。MTT法检测心肌细胞活性,TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数,Western blot法检测CMECs培养上清中NRG-1表达、心肌细胞p Erb B2、p ERK基因和环氧化酶-2(COX-2)水平,含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶-3(caspase-3)酶活性反应心肌细胞凋亡。结果在心肌细胞中,与对照组相比,SI/R(4 h/4 h)组细胞活性明显降低(P<0.01),SI/R+Coculture组细胞活性升高(P=0.02)。CMECs在SI/R 4 h/4 h时,NRG-1的分泌较对照组增加最明显(P<0.01)。心肌细胞SI/R组凋亡指数和Caspase-3酶活性比对照组明显升高(27.97±0.90比3.58±0.23,P<0.01;375.93±11.76比100.00±0.00,P<0.01)。共培养或NRG-1处理细胞后,凋亡指数和Caspase-3酶活性较SI/R组降低(16.82±1.03比27.97±0.90,P<0.01;166.16±15.15比375.93±11.76,P<0.01),且Erb B2和ERK磷酸化水平以及COX-2表达明显增加(均为P<0.01)。用Erb B2或ERK1/2抑制剂预处理心肌细胞后,共培养和NRG-1的作用消失(均为P<0.01)。结论在I/RI过程中,CMECs释放NRG-1,抑制I/RI诱导的心肌细胞凋亡,其保护作用与增加Erb B2、ERK磷酸化和COX-2表达可能有关。
- 郝启萌司瑞叶瑾付志诚王琛邵虹张荣庆郭文怡
- 内质网应激在去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ减轻心肌微血管内皮细胞缺血再灌注损伤中的作用被引量：1
- 2015年
- 目的探讨内质网应激在去天门冬氨酸血管紧张素Ⅰ(des-aspartate-angiotensin I,DAA-I)抑制大鼠心肌微血管内皮细胞(cardiac microvascular endothelial cells,CMECs)缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤中的作用及机制。方法分离培养大鼠CMECs,建立模拟(simulation,S)I/R损伤模型,按电脑随机数字表法随机分组,分为对照组、SI/R损伤组、SI/R损伤+4-苯基丁酸钠(4-phenylbutyric acid,4-PBA;内质网应激抑制剂)组、SI/R损伤+DAA-I组、SI/R损伤+DAA-I+Compound C[腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphateactivated protein kinase,AMPK)特异性抑制剂]组。噻唑蓝法(MTT法)检测细胞增殖能力,缺口末端标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡,Western blot法检测葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CCAAT/enhancer-binding protein-homologous protein,CHOP)、AMPK蛋白表达和磷酸化水平。结果与对照组比较,SI/R损伤组CMECs细胞增殖能力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(4.02%±0.85%vs.26.21%±2.97%,P<0.05)。与SI/R组比较,SI/R+4-PBA组CMECs细胞增殖能力明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);SI/R+DAA-I组CMECs凋亡率明显降低,差异有统计学意义(26.21%±2.97%vs.16.18%±2.93%,P<0.05);SI/R+DAA-I+Compound C组CMECs凋亡率稍微降低,差异无统计学意义(26.21%±2.97%vs.21.68%±3.37%,P>0.05)。与对照组比较,SI/R组GRP78、CHOP蛋白表达明显升高(P<0.05),p-AMPK稍升高。与SI/R组比较,SI/R+4-PBA组GRP78、CHOP蛋白表达明显降低(P<0.05);SI/R+DAA-I组GRP78、CHOP蛋白表达明显降低(P<0.05),p-AMPK明显升高(P<0.05);SI/R+DAA-I+Compound C组GRP78、CHOP蛋白表达轻度降低(P<0.05),p-AMPK明显升高(P<0.05),但低于SI/R+DAA-I组(P<0.05),差异均有统计学意义。结论内质网应激参与大鼠CMECs的I/R损伤,DAA-I可显著抑制CMECs在I/R损伤过程中的内质网应激,其分子机制可能与激活AMPK途径相关�
- 付志诚司瑞郝启萌张荣庆邵虹郭文怡
- 关键词：内质网应激心肌微血管内皮细胞
