仇秦威
- 作品数：9 被引量：18H指数：2
- 供职机构：广州医科大学附属肿瘤医院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：广东省中医药管理局基金国家自然科学基金广州市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2017年
- 目的建立一种人细胞周期蛋白依赖性激酶14(CDK14)基因表达荧光定量PCR检测方法。方法利用Trizol法提取不同人肺癌细胞株中总RNA,以β-Actin和CDK14分别为内参和目的基因,分别设计特异性扩增引物,建立人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统并评估其检测性能。同时将其应用于不同细胞系siRNA干扰前后的CDK14基因相对表达水平检测。结果经电泳分析、熔解曲线、产物测序确认人CDK14基因表达荧光定量PCR检测系统已建立,其特异性良好,重复性佳(CV=7.13%),线性范围较宽(CDK14与β-Actin分别在Ct值范围22.47~32.96与15.14~27,55间具有良好的相关性,r^2=0.9844。)。利用该体系检测发现:在HCC827 D5和H1650细胞中CDK14基因高表达;在1~3号干扰片段中,1号片段为有效片段。结论人CDK14基因表达荧光定量PCR检测方法已成功建立。
- 罗凯黎谢梦丹石兴源贾晓婷王倩邓敏仇秦威张志杰贺智敏
- 关键词：基因实时荧光定量PCR
- EGFR基因T790M突变COLD-PCR扩增体系的Tc值筛选被引量：1
- 2016年
- 目的筛选表皮生长因子受体(EGFR)基因T790M突变PCR扩增体系的Tc值并初步建立具T790M突变富集效果的低变性温度下的复合聚合酶链反应(COLD-PCR)体系,同时探讨Tc值的筛选策略以及注意事项。方法以肺癌MSTO-211H、NCI-H1975细胞为T790M突变野生型和突变型标准样品,通过目标片段关键变性温度筛选实验、COLD-PCR反应模式比较实验以及Tc值的验证实验,确定COLD-PCR体系的Tc值并初步验证其效果。结果本实验体系T790M突变的目的扩增片段关键变性温度低于野生型片段,据此体系反应模式选择为快速COLD-PCR反应模式,同时确定Tc值为89.6℃,验证实验显示本体系可检出1%的T790M突变,较常规PCR提高5倍。至此T790M突变富集COLD-PCR扩增体系已成功建立。结论成功完成体系Tc值的筛选并建立T790M突变富集COLD-PCR扩增体系。
- 罗凯王倩仇秦威贺智敏
- 关键词：表皮生长因子受体基因
- TCRP1基因启动子区CpG岛测序体系的建立
- 2015年
- 目的建立可用于舌癌耐药蛋白1(TCRP1)基因启动子区CpG岛测序检测的反应体系。方法采用人肺癌A549细胞作为待测样品,以TCRP1启动子区CpG岛为靶片段设计特异扩增、测序引物,建立TCRP1启动子区CpG岛测序检测反应体系,并检测H1299、H460、Huh-7细胞株和2例患者肿瘤组织标本。结果建立了以P2-1[二甲基亚砜(DMSO)终浓度0%,降落聚合酶链反应(PCR)条件]联合P1-2(DMSO终浓度1%,常规PCR反应条件)为优选方案的TCRP1启动子区CpG岛测序检测体系,并成功检测了A549、H1299、H460、Huh-7细胞株和2例患者肿瘤组织标本。结论成功建立可用于TCRP1启动子区CpG岛测序的反应体系。
- 罗凯仇秦威王倩容毓贺智敏
- 关键词：启动子CPG岛聚合酶链反应基因测序
- SRGN诱导乳腺癌细胞EMT改变促进肿瘤侵袭转移被引量：4
- 2017年
- 目的研究糖蛋白丝甘蛋白聚糖（SRGN）促进乳腺癌细胞侵袭转移的机制及SRGN表达调控的可能机制。方法运用实时定量PCR和信息检索检测SRGN在淋巴结转移与未转移乳腺癌临床标本中的表达差异；利用慢病毒shRNA干扰及过表达技术，建立稳定降低和过表达SRGN的乳腺癌细胞系MDA-MB-231shRNA及MCF-7-SRGN；体外Transwell实验检测SRGN对乳腺癌细胞侵袭转移能力的影响；Western blot实验检测上皮-间质转化（EMT）相关标志物的改变；最后通过West—ern blot实验检测SRGN可能的表达调控机制。结果SRGN在淋巴结转移的乳腺癌临床标本中表达明显增高，干扰SRGN可抑制肿瘤细胞的侵袭转移，并且SRGN可促进乳腺癌细胞发生EMT改变，TGFβ1可促进SRGN的转录表达。结论SRGN可诱导乳腺癌细胞发生EMT改变，进而促进乳腺癌细胞的侵袭转移。
- 张志杰仇秦威叶嘉慧邱霓贺智敏
- 关键词：蛋白聚糖类生物转化肿瘤侵润
- 人非小细胞肺癌NCI—H1975细胞的异质性研究
- 2016年
- 目的探讨人非小细胞肺癌NCI-H1975细胞的异质性及其与药物反应性的关系。方法利用有限稀释法获得NCI-H1975细胞单克隆化子细胞，并对母细胞和部分单克隆化子细胞行表型、药物反应性和表皮生长因子受体（EGFR）基因突变检测，分析NCI-H1975细胞的克隆异质性特征及其与药物反应性的关系。结果获得13个单克隆化的NCI-H1975子细胞，与母细胞相比，各子细胞在细胞增殖能力、吉非替尼敏感性和顺铂敏感性方面差异有统计学意义（P〈0．05），在EGFR基因突变状态方面未见差异。结论NCI-H1975细胞存在细胞增殖能力等表型指标和药物反应性指标的异质性，并与药物治疗的反应性和耐药相关。
- 罗凯王倩仇秦威彭聪邓应根黎谢梦丹贾小婷张志杰郑国培谷依学贺智敏
- 关键词：遗传异质性生物学标记药理学
- 微阵列芯片Meta分析序列相似家族72成员A mRNA水平与乳腺癌预后关系被引量：2
- 2017年
- 目的探讨序列相似家族72成员A(FAM72A)mRNA表达水平与乳腺癌患者预后的关系。方法在NCBI的GEO数据库中检索乳腺癌基因表达谱的数据集,对数据进行预处理后,对数据集进行标准化合并。采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,采用单因素Cox模型分析乳腺癌患者以及不同分型乳腺癌患者的总体无事件生存期与FAM72A mRNA表达的相关性。结果总共纳入10个微阵列数据集,包含1 720例乳腺癌患者癌组织样本。在所有乳腺癌患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05);在雌激素受体阳性乳腺癌患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05);在乳腺管腔B型患者中,FAM72A mRNA高表达者无事件生存期低于FAM72A mRNA低表达者(P<0.05)。结论 FAM72可以作为预测乳腺管腔B型乳腺癌患者预后的潜在标志物。
- 仇秦威余丽华罗凯张志杰黎谢梦丹贺智敏
- 关键词：乳腺癌微阵列
- 顺铂对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响被引量：1
- 2014年
- 目的观察顺铂(cDDP)对小分子干扰RNA(siRNA)抑制切除修复交叉互补基因1(ERCC1)基因表达的A549细胞增殖、凋亡影响,并探讨cDDP对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞化疗敏感性。方法根据ERCC1基因序列,设计合成3对特异性的siRNA(分别命名为S1、S2、S3),同时合成阴性对照siRNA(命名NC)。取对数生长期的A549细胞,采用Lipofectamine2000脂质体转染法进行S1、S2、S3、S1+S2+S3及NC转染,real-time RT-PCR和Western blotting技术检测ERCC1 mRNA和蛋白表达。结果与NC相比,S1、S2、S3及S1+S2+S3均能下调ERCC1表达,但S1+S2+S3下降最显著。用NC及S1+S2+S3转染A549细胞,24 h后加入0、0.5、1、2、4、8μg/mL的cDDP,采用MTS法计算细胞生存率及cDDP对细胞的半数抑制浓度(IC50)。A549细胞转染后48 h加4μg/mL的cDDP,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果加入0、0.5、1、2、4、8μg/mL的cDDP,NC转染的A549细胞存活率分别为100.00%±3.21%、94.86%±7.14%、89.79%±3.29%、66.67%±5.40%、33.31%±1.79%、19.12%±0.41%,S1+S2+S3转染的A549细胞存活率分别为100.00%±6.53%、71.63%±8.23%、59.33%±0.94%、37.42%±1.57%、19.41%±1.41%、12.75%±0.27%,相同cDDP浓度下A549细胞存活率比较,P均<0.05;S1+S2+S3、NC转染细胞的IC50分别为(1.25±0.11)、(3.09±0.36)μg/mL,二者比较,P<0.01。未加cDDP时,NC与S1+S2+S3转染A549细胞凋亡率分别为8.06%±1.79%、14.96%±0.47%,加入cDDP后,细胞凋亡率分别为24.61%±1.98%、43.90%±3.01%,二者比较,P均<0.05。结论 cDDP能降低siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞增殖能力,并诱导细胞凋亡;cDDP对siRNA抑制ERCC1基因表达的A549细胞化疗敏感性升高。
- 宋莹仇秦威贺智敏谷依学
- 关键词：切除修复交叉互补基因1RNA干扰顺铂
- 人ERCC1基因启动子荧光素酶报告基因质粒的构建
- 2014年
- 目的:构建人切除修复交叉互补基因1(excision repair cross complementation 1,ERCC1)启动子荧光素酶报告基因质粒。方法:以人基因组DNA为模板,扩增ERCC1启动子,将其重组到荧光素酶报告基因载体pGL4 Basic中,测序验证构建的质粒中包含ERCC1启动子序列。结果:测序结果正确,质粒pGL4-ERCC1-P1构建成功。结论:人ERCC1启动子荧光素酶报告基因质粒构建成功,可以用于后续基因表达调控的研究。
- 宋莹谷依学仇秦威贺智敏
- 关键词：报告基因ERCC1启动子
- 华南地区172例非小细胞肺癌表皮生长因子受体和KRAS突变分析被引量：8
- 2015年
- 目的:完善华南地区非小细胞肺癌(NSCLC)患者表皮生长因子受体(EGFR)和KRAS基因突变谱,探讨其与临床表型的关系。方法:直接测序法对172例NSCLC患者肿瘤组织DNA的EGFR 18-21外显子和KRAS 2号外显子进行突变鉴定并分析。结果:EGFR和KRAS在本群体中突变率分别为32%(55/172)和8.1%(14/172),其中热点突变为EGFR 19号外显子缺失,21号外显子L858R和KRAS 12位密码子点突变。女性、无吸烟史患者与男性、吸烟者相比,EGFR突变率显著增高,而KRAS突变率显著降低。腺癌患者EGFR突变率显著高于非腺癌患者,KRAS突变则无显著差别。结论:华南地区人群EGFR具有丰富的突变谱。完善该地区的突变数据库,确证各种突变对TKI的治疗敏感性的影响,对靶向治疗在NSCLC患者中更深入、广泛开展具有重要的指导作用。
- 仇秦威罗凯贺智敏
- 关键词：突变基因测序
