李春阳
- 作品数：17 被引量：33H指数：3
- 供职机构：成都生物制品研究所有限责任公司更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目“重大新药创制”科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学理学更多>>
- 基于mRNA 5’端TIR区二级结构优化提高重组sTNFαRI在大肠杆菌中的表达水平
- 2018年
- 目的：通过优化PET11b-s TNFαRI 5＇mRNA翻译起始区（TIR）二级结构从而提高可溶性肿瘤坏死因子I型受体（sTNFαRI）在大肠杆菌[E.coli BL21（DE3）]中的表达水平。方法：通过对PET11b-s TNFαRI mRNA 5＇端TIR区二级结构的自由能及核苷酸位置熵分析,设计相应的引物对mRNA 5＇翻译起始区（TIR）相应密码子进行突变,从而使核糖体结合位点（RBS）及起始密码子（AUG）暴露于发夹结构之外,此外将p ET11b核糖体结合位点由GAAGGAGA突变为GAAGAA,以利于翻译复合体的组装以及翻译起始。通过基因克隆的方法将5＇端TIR区优化后的序列与s TNFαRI序列一起克隆到p ET11b载体中,并转化大肠杆菌BL21（DE3）,阳性转化子经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测。结果：通过对PET11b-s TNFαRI 5＇TIR mRNA二级结构优化,经SDS-PAGE和Western blot分析表明重组s TNFαRI的表达水平较优化前提高50%~60%。结论：通过对重组载体翻译起始区（TIR）mRNA序列的二级结构优化可以有效提高目的蛋白的表达水平,对进一步工业化生产具有重要的应用价值。
- 秦娇荣赵兆罗心梅李春阳
- 关键词：MRNA二级结构翻译起始区自由能
- VEGF抗体及其制备方法和用途
- 本发明公开了VEGF单域抗体及其融合抗体和多聚体抗体。本发明还公开了编码前述抗体的核苷酸序列，包含该核苷酸序列的表达载体、重组菌以及前述抗体的制备方法和用途。本发明VEGF抗体分子量小，可塑性高，具有广泛的应用前景。
- 何勇智丛聪代云见张勇侠李坤李春阳王保成秦娇荣赵兆王明蓉何明跃
- 文献传递
- 一种兔免疫球蛋白的生产工艺
- 本发明公开了一种免疫球蛋白的生产工艺，属于生物制品领域，尤其涉及免疫球蛋白的生产工艺领域。其是用SPF兔血清灭活补体后，经辛酸沉淀过滤得到澄清液；并将澄清液依次通过以下层析：亲和层析、阴离子交换层析、抗A/抗B层析，能最...
- 刘兰军武志强容新宗李春阳李佳林
- 文献传递
- 一种抗人T淋巴细胞免疫球蛋白淋巴细胞毒效价检测方法的建立被引量：1
- 2022年
- 目的建立基于人白血病T细胞株Jurkat的抗人T淋巴细胞免疫球蛋白(anti-human T lymphocyte immunoglobulin,ALG)淋巴细胞毒效价定量检测方法,并进行验证。方法采用人Jurkat细胞作为靶细胞,抗人T细胞兔免疫球蛋白(商品名:Grafalon)作为待检样品,建立其淋巴细胞毒效价定量检测方法。优化反应体系,考察细胞培养密度、细胞代次对待检样品效价的影响,并对方法的精密度进行验证。结果优化的反应体系组成为50μL待检样品+50μL补体(1∶5稀释)+50μL细胞(5×10^(6)个/mL);细胞传代密度为2×10^(5)个/mL传代培养72 h或3×10^(5)个/mL传代培养48 h用于效价测定最佳;当细胞生长状态较好且一致时,从P10到P25代次的细胞效价测定结果较一致。采用该方法板内重复测定待检样品效价,变异系数(CV)为6.32%,重复性良好;不同代次Jurkat细胞测定待检样品效价6次,CV为4.15%,中间精密度良好。结论建立了一种便捷、精确的测定ALG淋巴细胞毒效价的定量检测方法,为ALG效价测定提供了一种客观、准确的评价手段。
- 杜天飞容新宗杨盛理张勇侠武志强李春阳刘兰军
- 关键词：JURKAT细胞
- 一种兔免疫球蛋白的生产工艺
- 本发明公开了一种免疫球蛋白的生产工艺，属于生物制品领域，尤其涉及免疫球蛋白的生产工艺领域。其是用SPF兔血清灭活补体后，经辛酸沉淀过滤得到澄清液；并将澄清液依次通过以下层析：亲和层析、阴离子交换层析、抗A/抗B层析，能最...
- 刘兰军武志强容新宗李春阳李佳林
- 采用DoE设计方法优化可溶性肿瘤坏死因子I型受体蛋白的聚乙二醇修饰工艺被引量：1
- 2013年
- 目的 采用DoE设计方法对人可溶性肿瘤坏死因子I型受体（soluble tumour necrosis factorαreceptors I,sTNFα-R玉）的聚乙二醇（PEG）修饰工艺参数进行优化,以期获得稳定、可控的工艺参数。方法 采用UNICORN（DoE）软件中Central Composite Face Centered（CCF）模型对sTNFα-R玉的3个PEG修饰工艺参数,即溶液pH值（pH）、反应时间（Time）和PEG与蛋白质量比（PEGrate）进行优化,设置4个响应值（多PEG修饰蛋白峰面积、单PEG修饰蛋白峰面积、未修饰蛋白峰面积及单PEG修饰蛋白峰面积与多PEG修饰蛋白峰面积比值）揭示其化学反应过程,确定参数操作空间;应用蒙特-卡罗模拟法（Monte-Carlo Simulation）对优化参数进行风险评估。结果3因子17组试验结果的重复性较好,中心点重复组响应值介于最低值和最高值之间,且随机分布,符合DoE试验设计的要求;4个响应值所对应的回归系数（R2）均〉0.75,预测准确性（Q2）〉0.5,模型有效性（Model Validity）〉0.25,重复性（Reproducibility）〉0.5,模型预测与实验值之间偏差较小,具有可靠的预测准确性;17组试验结果标准残差在允许范围（-4～4）之间,线性较好,预测值与观测值之间相关性较好,建立的模型拟合度高,可较为准确地预测试验结果。溶液pH值对多PEG修饰产量影响较小,随着Time和PEGrate的升高,多PEG修饰产物增加,单PEG修饰产物经二次或多次修饰形成多PEG修饰产物,减少Time和PEG用量可减少多PEG修饰产物;单PEG修饰产物随着pH上升,产量有所增加,与Time呈二次项关系,在Time.PEGrate交互作用中,减少PEG用量可增加单PEG修饰产物量;减少Time和降低PEG用量可提高单PEG修饰产物与多PEG修饰产物的比值,有利于下游纯化。确定了工艺参数的操作空间,当pH为5.5时,反应时间控制在30 h以上,PEG与蛋白质量比控制在3.7以下,符合预设值;pH在6.5时,反应时间控制在22～35 h之间,PEG与蛋白质量
- 王保成蔡峰李坤李春阳张珂秦娇荣
- 关键词：肿瘤坏死因子Α受体PEG修饰DOE
- 动态显色法检测白喉毒素突变体CRM197的细菌内毒素含量被引量：10
- 2013年
- 目的 建立检测白喉毒素突变体CRM197细菌内毒素（bacterial endotoxin）含量的动态显色法（kinetic chromo-genic assay,KCA）。方法 按照《中国药典》三部（2010版）要求,用细菌内毒素检查用水（bacterial endotoxin,BET）稀释细菌内毒素工作标准品制备细菌内毒素标准曲线系列溶液,各浓度均设3个平行孔,分别与动态显色鲎试剂（kinetic chromogenic analysis tachypleus amebocyte lysate,KCA TAL）反应,绘制标准曲线,验证标准曲线的可靠性,确定最佳线性范围、测定范围及最低检测限（limit of quantitation,LOQ）,验证方法的精密性和准确性,并进行初步应用。结果 标准曲线的回归方程为：y=-0.263x＋2.741,R2=0.997,相关系数的绝对值∣r∣逸0.980,阴性对照的反应时间大于标准曲线最低点的反应时间,各复孔的变异系数（CV）约10%;内毒素浓度在0.02～2.50 EU/ml时,线性关系良好,LOQ为0.02 EU/ml;3个浓度（2.50、0.50、0.02 EU/ml）标准内毒素检测结果的CV均〈5%,加入高、中、低3个浓度（2.50、0.50、0.02 EU/ml）标准内毒素的3批供试品检测结果的CV均〈10%,回收率在95%～143%之间;采用建立的方法检测10批次CRM197样品的细菌内毒素含量,回收率在77%～118%之间,其中8批样品的内毒素含量合格。结论 动态显色法检测CRM197中内毒素的含量精密性和准确性良好,能快速、定量检测样品中的内毒素含量,抗干扰能力强,可用于CRM197研制过程中的质量控制。
- 邓杰张珂袁涛李春阳
- 关键词：细菌内毒素
- 一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺
- 本发明提供了一种以麻疹病毒为载体的重组新型冠状病毒疫苗的大规模生产工艺，属于病毒载体疫苗制备领域。所述方法包括以下步骤：(1)细胞培养：在装载有细胞微载体的生物反应器内加入无血清细胞生长液，培养Vero细胞至密度为2～5...
- 刘兰军容新宗武志强张勇侠李春阳陈宗香高雅丽牟建超杜天飞杨硕杨盛理李佳林
- 3种抗人T淋巴细胞免疫球蛋白淋巴细胞毒效价检测方法比较
- 2024年
- 目的通过比较3种淋巴细胞毒效价检测方法测定抗人T淋巴细胞免疫球蛋白免疫血清及原液样品的效价结果, 阐明3种检测方法的相关性。方法采用中国药典2020年版三部淋巴细胞毒效价检测方法、基于人外周血单个核细胞的淋巴细胞毒流式检测方法及基于人白血病T细胞株(Jurkat细胞)的淋巴细胞毒流式检测方法测定3批次免疫血清及3批次原液的效价。免疫血清稀释128、256及512倍进行效价检测, 判定效价;原液稀释8~2 048倍进行检测, 计算半数效应浓度。结果中国药典方法与基于人外周血单个核细胞流式法检测3批次免疫血清的效价均为1∶512;基于Jurkat细胞流式法检测001批次免疫血清的效价为1∶512, 002与003批次免疫血清的效价为1∶256。3种方法测定3批次原液的效价结果与阳性对照Grafalon的活性水平相当, 不同方法检测的效价趋势基本一致。结论虽然3种方法测定免疫血清与原液的效价结果趋势基本一致, 但淋巴细胞毒流式检测方法操作更便捷, 且可定量测定半数效应浓度值。
- 杜天飞于晓萍李春阳刘兰军
- 关键词：流式细胞术淋巴细胞毒效价
- 减毒活疫苗的应用及其研究进展被引量：12
- 2018年
- 减毒活疫苗可引发机体免疫反应,刺激机体产生特异性的记忆B和T细胞,获得长期或终生保护作用,与灭活疫苗比较,减毒活疫苗具有免疫力强及作用时间长的优点。减毒活疫苗在疫苗史的初期就发挥了关键作用,如通过接种牛痘预防天花;后续开发的麻风腮减毒活疫苗、乙脑减毒活疫苗、水痘减毒活疫苗、轮状病毒减毒活疫苗、登革热减毒活疫苗及卡介苗等均具有良好的免疫效果;新开发减毒活疫苗还可用于预防和治疗肿瘤、糖尿病、肺炎及新结核病等疾病,具有广泛的应用前景。本文就减毒活疫苗在传染性疾病、肿瘤及其他疾病中的应用及研究进展作一综述。
- 李征刘晔李春阳
- 关键词：减毒活疫苗病毒细菌
