刘翠
- 作品数：9 被引量：41H指数：5
- 供职机构：南方医科大学珠江医院更多>>
- 发文基金：广东省科技计划工业攻关项目国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 酪氨酸激酶Src和酪氨酸磷酸酶SHP-2在脓毒症相关性脑病中的变化及其意义被引量：5
- 2015年
- 目的研究酪氨酸激酶Src和酪氨酸磷酸酶SHP．2在脓毒症相关性脑病中的变化及其意义。方法Wistar大鼠88只按照随机数字表法分为脓毒症组m=80）和对照组（n=8）。脓毒症组大鼠通过腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS）10mg／kg建立脓毒症相关性脑病模型（32只大鼠成功建模），并分别在建模后6h、12h、24h和48h处死大鼠并取脑组织。对照组大鼠给予腹腔注射10mg／kg0．9％生理盐水后即刻处死，取脑组织作为对照组标本。通过Westernblotting、实时定量PCR（RT．PCRl和免疫荧光染色法观察Src和SHP．2蛋白及mRNA的变化。比较给予活性Src和SHP-2蛋白与线粒体蛋白反应前后呼吸链复合物酶活性的变化情况。结果Westernblotting、RT-PCR结果显示脓毒症组大鼠Src在6h出现明显的下降，持续至48h；同时间段SHP-2则出现明显的上升，与对照组比较差异均具有统计学意义（P〈0．05）。免疫荧光染色结果也显示48h脓毒症组大鼠Src表达较对照组明显下降，而SHP-2表达则明显升高，差异均有统计学意义（P〈0．05）。与活性Src蛋白反应后．48h脓毒症组大鼠呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ酶活性明显升高，与活性SHP-2蛋白反应后呼吸链复合物Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ酶活性明显下降，差异均具有统计学意义（P〈0．05）。结论脓毒症相关性脑病模型中，酪氨酸激酶Src和酪氨酸磷酸酶SHP-2可能是通过下调线粒体蛋白磷酸化降低了线粒体呼吸锛复合物酶活性．从而导致线粒体功能障碍。
- 吕娟娟郑贵浪陈志江王斌陶少华项丹谢美燕刘翠黄锦达曾其毅
- 关键词：线粒体功能障碍酪氨酸激酶酪氨酸磷酸酶
- 解偶联蛋白2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用被引量：2
- 2018年
- 目的:探讨解偶联蛋白2(UCP2)过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体的保护作用,阐明其作用机制。方法:构建UCP2过表达的H9C2心肌细胞。H9C2心肌细胞随机分为正常对照组、脂多糖/聚糖肽(LPS/PepG)刺激组、空病毒组和过表达组,除正常对照组外其余各组予LPS/PepG刺激。采用RT-PCR和Western blotting法检测各组心肌细胞中UCP2mRNA和蛋白表达水平,采用分光光度计法和ELISA法检测脓毒症心肌细胞模型建立指标肌酸激酶(CK)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平,采用电镜观察各组心肌细胞线粒体形态表现,采用流式细胞术检测各组心肌细胞线粒体膜电位(MMP)水平,采用多功能酶标仪检测各组心肌细胞线粒体活性氧(ROS)和三磷酸腺苷(ATP)水平。结果:与正常对照组比较,LPS/PepG刺激组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显升高(P<0.05),且线粒体形态明显损害,MMP水平明显降低(P<0.05),线粒体ROS水平明显升高(P<0.05),ATP水平明显降低(P<0.05);与LPS/PepG刺激组比较,过表达组心肌细胞中CK和TNF-α水平明显降低(P<0.05),且线粒体形态结构明显好转,MMP水平明显升高(P<0.05),线粒体ROS水平明显降低(P<0.05),ATP水平明显升高(P<0.05);与LPS/PepG刺激组比较,空病毒组心肌细胞中CK、TNF-α、MMP、ROS和ATP水平差异均无统计学意义(P>0.05),线粒体肿胀度无明显改变。结论:UCP2过表达对脓毒症大鼠心肌细胞线粒体有保护作用,其机制可能与UCP2通过解偶联作用调控膜电位,进而影响ROS和ATP的合成有关。
- 郑贵浪郭予雄吕娟娟黄锦达刘翠曾其毅
- 关键词：解偶联蛋白2脓毒症心肌细胞线粒体
- 解偶联蛋白2与脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌线粒体损伤的关系被引量：6
- 2016年
- 目的探讨解偶联蛋白2(uncoupling protein 2,UCP2)与脂多糖诱导脓毒症大鼠心肌线粒体损伤的关系。方法通过腹腔注射脂多糖(LPS)建立脓毒症模型。将40只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠随机分为5组,每组8只:对照组(腹腔注射生理盐水)、脓毒症6 h组(LPS-6 h组)、脓毒症12 h组(LPS-12 h组)、脓毒症24 h组(LPS-24 h组)和脓毒症48 h组(LPS-48 h组)。在相应时间点留取大鼠血清和心脏组织,提取心肌线粒体,通过酶标仪检测肌酸激酶(CK)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)和活性氧(ROS)水平,流式细胞仪检测线粒体肿胀度和线粒体膜电位(MMP),采用蛋白质免疫印迹试验(Western blot)测定UCP2蛋白表达水平;电镜观察心肌组织线粒体形态学变化。结果与对照组比较,LPS各组血清CK、CK-MB水平、心肌组织ROS水平和线粒体肿胀度均明显升高(P<0.05),峰值在LPS-24 h组;而LPS各组线粒体膜电位明显下降(P<0.05),LPS-24 h组降至最低。Western blot检测发现LPS各组心肌组织UCP2的表达水平较对照组明显升高(P<0.05),峰值在LPS-24 h组。电镜观察结果发现LPS大鼠心肌线粒体肿胀,线粒体膜部分破碎,有空泡形成,LPS-24 h组病变最严重。LPS大鼠心肌线粒体ROS水平、线粒体肿胀度与UCP2表达量呈正相关(分别r=0.796、0.893,P<0.05);LPS大鼠心肌MMP与UCP2表达量呈负相关(r=-0.903,P<0.05)。结论在脓毒症大鼠模型中,心肌和心肌线粒体都明显损伤,心肌组织UCP2的表达与线粒体损伤密切相关,推测UCP2可能在脓毒症心肌线粒体损伤中起重要作用。
- 黄锦达陈胜利吕娟娟刘翠曾其毅
- 关键词：脓毒症心肌线粒体解偶联蛋白2
- 持续输注异丙肾上腺素对早期脓毒症大鼠心肌线粒体的保护作用及其机制被引量：2
- 2015年
- 目的探讨持续输注不同剂量异丙肾上腺素（ISO）对早期脓毒症大鼠心肌线粒体的保护作用及其机制。方法30只SD雄性大鼠按随机数字表法分为5组（每组各6只）：对照组，内毒素组和ISO低、中、高剂量组。内毒素组腹腔注射脂多糖（LPS）10mg／kg同时持续输注9g／L盐水1mL／h；ISO低、中、高剂量组腹腔注射LPS10mg／kg同时分别持续输注IS00．06、0．30和0．60μg／（kg·min）；对照组腹腔注射同时持续输注与其他组等体积的9g／L盐水。腹腔注射9g／L盐水或LPS后24h检测血清肌酸激酶（CK）和肌酸激酶同工酶（CK-MB）、心肌线粒体氧化氮化应激水平和线粒体肿胀度，并观察心肌组织病理改变（HE染色）和线粒体形态学改变。结果与对照组比较，内毒素组CK、CK-MB、一氧化氮（NO）含量、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活力和丙二醛（MDA）含量均升高（P均〈0．05），超氧化物歧化酶（SOD）活力降低[（11．543±1．080）U／mgprot比（9．892±0．815）U／mgprot，P〈0．05]；HE染色示心肌组织呈炎症改变；线粒体超微结构异常（线粒体肿胀等）。ISO干预使CK和CK—MB水平及心肌线粒体肿胀度降低（P均〈0．05），SOD活力升高（P均〈0．05）；低剂量组NO含量、iNOS活力和MDA含量降低[（10．823±2．240）μmol／gprot比（7．917±2．203）μmol／gprot，（0．045±0．008）U／mgprot比（0．033±0．003）U／ragprot，（1．663±0．618）mmol／mgprot比（0．768±0．312）mmol／mgprot，P均〈0．05]，中、高剂量组iNOS活力和MDA含量升高（P均〈0．05）；与中剂量组相比，高剂量组肿胀度升高（1．160±0．186比1．393±0．128，P〈0．05）。结论脓毒症早期大鼠心肌和心肌线粒体受损，持续低剂量ISO输注对心肌线粒体具有保护作用，其机制可能与氧化氮化应激水平降低有关。
- 谢美燕项丹吕娟娟郑贵浪黄锦达刘翠曾其毅
- 关键词：异丙肾上腺素脂多糖脓毒症
- 微小RNA-30e在脓毒症急性肺损伤大鼠中的表达及其与炎性因子水平的相关性被引量：7
- 2016年
- 目的从体内和体外实验2个方面探讨微小RNA-30e（miR-30e）在脓毒症诱导急性肺损伤（ALI）发生时的差异表达及其与炎性因子IL-1β、TNF—α表达的相关性。方法30只雄性SD大鼠随机等量分为5组：正常对照组，脓毒症3、6、12、24h组，腹腔注射脂多糖（LPS）10mg／kg构建脓毒症大鼠ALI模型。体外培养大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383，分为空白对照组和以终质量浓度1mg／LLPS刺激3、6、12及24h组，采用反转录聚合酶链反应检测IL-1β、TNF-α及miR-30e表达水平，并观察大鼠肺组织病理改变。结果脓毒症组大鼠肺组织中IL-1β、TNF-α水平均较正常对照组明显上调，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；HE染色示脓毒症组大鼠肺组织呈ALl改变；脓毒症组大鼠3、6、12、24h肺组织miR-30e表达水平分别为0．26±0．02、0．41±0．08、0．29±0．05和0．18±0．05，均明显低于正常对照组（1．23±0．24），差异均有统计学意义（P均〈0．01）；NR8383细胞中，与空白对照相比，LPS刺激不同时间点炎性因子IL-1β、TNF—α水平均明显上调，差异均有统计学意义（P均〈0．01）；LPS刺激3、6、12、24h时间点细胞中miR-30e表达水平分别为0．27±0．04、0．55±0．05、0．65±0．02、0．41±0．10，均明显低于空白对照组（1．17±0．21），差异均有统计学意义（P均〈0．01）；各实验组大鼠肺组织中miR-30e的表达与IL-1β、TNF-α水平均呈负相关（IL-1B：r=-0．417，P=0．022；TNF．Or．：r=-0．437，P=0．016）；LPS刺激NR8383细胞后不同时间点细胞中miR-30e的表达与IL-1β、TNF-α水平亦均呈负相关（IL-1β：r=-0．713，P=0．003；TNF-α：r=-0．712，P=0．002）。结论miR-30e在脓毒症大鼠诱导ALI发生时的表达量显著下调，并与炎性因子IL-1β、TNF-α表达水平呈负相关，有望成为脓毒症ALl早期诊断、治疗、预后评估新的生物学标志。
- 刘翠刘舒黄锦达陈亦婷吕娟娟郑贵浪曾其毅
- 关键词：脓毒症肺损伤炎性因子
- 胰岛素对脂多糖诱导的H9e2心肌细胞损伤的保护作用及其机制被引量：4
- 2016年
- 目的观察胰岛素（IN）对脂多糖（LPS）诱导的H9e2心肌细胞损伤的保护作用，并探讨解偶联蛋白2（UCP2）在其过程中的可能作用。方法采用随机对照分组的方法，把H9e2心肌细胞培养24h后随机分为对照组、LPS刺激组（LPS组）、LPS＋70IU／L胰岛素组（IN70IU／L组）、LPS＋350IU／L胰岛素组（IN350IU／L组）和LPS＋700IU／L胰岛素组（IN700IU／L组）5组，胰岛素处理组于LPS刺激前15min加入相应剂量胰岛素，对照组加入与LPS等量的9g／L盐水。然后LPS组和胰岛素处理组都接受LPS处理24h。处理结束后检测乳酸脱氢酶（LDH）水平、丙二醛（MDA）水平、总超氧化物歧化酶（SOD）活力以及比色法检测细胞内活性氧（ROS）水平；细胞活力检测试剂盒检测细胞活力；实时反转录聚合酶链反应及蛋白印迹法分别检测UCP2基因转录及蛋白表达。结果与对照组比较，LPS组LDH水平、细胞内MDA及ROS水平均显著升高[LDH：（829．3±75．3）U／L比（223．5±23．6）U／L，MDA：（60．90±5．73）nmol／mgprot比（19．70±1．99）nmol／mgprot，ROS：（410．2±81．6）U／well比（94．3±18．5）U／well，P均〈0．05]，细胞活力和SOD活力均降低[细胞活力：0．822±0．058比1．012±0．023，SOD：（49．20±5．81）U／mgprot比（89．80±2．57）U／mgprot，P均〈0．05]，UCP2mRNA和UCP2蛋白表达均升高（1．867±0．130比1．028±0．097，0．288±0．018比0．180±0．008，P均〈0．05）；与LPS组比较，350IU／L和700IU／L胰岛素预处理可降低细胞上清LDH水平、细胞内MDA和ROS水平[LDH：（568．2±35．7）U／L、（622．8±27．6）U／L比（829．3±75．3）U／L，MDA：（29．20±4．20）nmol／mgprot、（42．10±2．32）nmol／mgprot比（60．90±5．73）nmol／mgprot，ROS：（270．3±46．8）U／well、（301．5±16．9）U／well比（410．2±81．6）U／well，P均〈0．05]，使细胞活力和SOD活力上高[细胞�
- 黄锦达刘翠郑贵浪吕娟娟曾其毅
- 关键词：胰岛素脂多糖H9C2心肌细胞UCP2
- 脓毒症相关性脑病远期脑线粒体损伤与氧化应激的关系被引量：10
- 2015年
- 目的探讨脓毒症相关性脑病（SAE）远期脑线粒体损伤与氧化应激的关系。方法通过腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS）建立脓毒症模型。出现SAE症状的大鼠（SAE组）及对照组大鼠分别在相应时间点进行神经反射评估后处死，取脑组织提取线粒体。通过流式细胞仪检测线粒体膜电位（MMP）及活性氧（ROS），通过酶标仪检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、诱导型一氧化氮合成酶（iNOS）和一氧化氮（NO）水平。结果神经反射评估在12h已经开始下降，并缓慢恢复。MMP在腹腔注射LPS后明显下降，48h降至最低，差异有统计学意义（F=75．785，P〈0．05），72h部分恢复；ROS48h明显升高伴随SOD的明显下降，差异均有统计学意义（F=111．274，21．808，P均〈0．05），72h部分恢复；MDA、iNOS和NO48h增加达到峰值，差异均有统计学意义（F=21．955、61．076、21．184，P均〈0．05），72h部分恢复。脓毒症大鼠脑组织线粒体SOD活性与MMP呈强正相关关系（r=0．856，P〈0．05）；脓毒症大鼠脑组织线粒体ROS水平、MDA水平、iNOS活性和NO水平与MMP呈强负相关关系（r=-0．852、-0．890、-0．940、-0．794，P均〈0．05）。结论在SAE模型中，脑线粒体损伤的高峰可能发生在48h左右，氧化应激的明显增强可能是导致远期线粒体功能障碍的原因之一。
- 吕娟娟陈志江郑贵浪王斌陶少华项丹谢美燕刘翠黄锦达曾其毅
- 关键词：线粒体功能障碍氧化应激
- Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症4例临床和基因突变分析被引量：3
- 2015年
- 目的探讨Citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿的临床表现和实验室检查的特点。方法质谱筛查11 172例儿童,对其中4例诊断为肝内胆汁淤积和病理性黄疸患儿进行常规实验室检查,结合血串联质谱分析、基因分析,确诊为NICCD。对确诊NICCD患儿的临床表现、常规实验室检查、血氨基酸谱和酰基肉碱谱、基因检测结果等进行总结分析。结果 NICCD患儿出生体重偏低。实验室改变包括高胆红素血症、γ-谷氨酰转移酶、碱性磷酸酶、甲胎蛋白升高、低血糖、轻度高氨血症及低蛋白血症。串联质谱分析发现4例患儿有特异性瓜氨酸、甲硫氨酸和酪氨酸轻到中度升高,以及短链脂酰肉碱C3、C5OH、C6和长链酰基肉碱C18:1、C18:2等升高。4例患儿基因突变检出率100%,共发现SLC25A13基因突变4种:c.851_854del GTAT(M285Pfs*2),c.1638_1660 dup23(A554Gfs*17),c.852_855del TATG(M285Pfs*2),c.1196T>A(L399*)。其中c.851_854del GTAT(M285Pfs*2)、c.1638_1660 dup23(A554Gfs*17)为中国人群热点突变,c.1196T>A(L399*)为新突变。结论不明原因黄疸患儿鉴别诊断应考虑到NICCD,早期进行串联质谱和基因分析对明确NICCD的诊断具有重要意义。
- 刘翠黄锦达曾其毅
- 关键词：CITRIN新生儿肝内胆汁淤积SLC25A13基因
- 脂多糖诱导脓毒症大鼠远期脑线粒体损伤的初步研究被引量：5
- 2015年
- 目的初步探讨脓毒症大鼠远期脑线粒体结构和功能损伤。方法将Wistar大鼠随机分为对照组和脓毒症组,通过腹腔注射革兰阴性菌脂多糖（LPS,10 mg/kg）建立脓毒症大鼠模型并进行生存率实验。脓毒症组大鼠分别在腹腔注射革兰阴性菌LPS后12、24、48和72 h各处死8只,对照组大鼠（n=8）在给予等量生理盐水腹腔注射后处死,取脑组织提取线粒体。通过流式细胞仪检测线粒体膜电位（MMP）及线粒体肿胀度,使用试剂盒检测呼吸链复合物酶（Ⅰ~Ⅴ）活性。通过苏木精-伊红（HE）染色及电镜观察脑组织和线粒体形态学变化。结果脓毒症组较对照组生存率明显下降（P〈0.01）。脓毒症组MMP和呼吸链复合物酶（Ⅰ~Ⅴ）活性较对照组明显下降（P〈0.05）,48 h降至最低,72 h部分恢复;脓毒症组线粒体肿胀度较对照组明显升高（P〈0.05）,48 h达到峰值,72 h部分恢复;HE染色可见脑组织结构明显破坏,同时电镜结果观察到线粒体肿胀,少量线粒体出现＂空泡样变＂。结论在LPS诱导脓毒症大鼠模型中,脑线粒体结构和功能均受损,损伤高峰可能发生在48 h左右。
- 吕娟娟陈志江项丹郑贵浪王斌陶少华谢美燕刘翠黄锦达曾其毅
- 关键词：脓毒症线粒体功能障碍线粒体膜电位
