许黎明 作品数:17 被引量:33 H指数:4 供职机构: 广西科学院 更多>> 发文基金: 广西壮族自治区自然科学基金 广西科学院基本科研业务费资助项目 广西壮族自治区科技攻关计划 更多>> 相关领域: 生物学 化学工程 农业科学 轻工技术与工程 更多>>
鼠李糖乳杆菌D-乳酸脱氢酶基因ldhD的敲除 被引量:5 2016年 聚乳酸由可再生原料L-乳酸合成,是目前应用的最环保的生物塑料之一。鼠李糖乳杆菌JCM1553中的L-乳酸和D-乳酸,它们是由代谢途径中的L-乳酸脱氢酶和D-乳酸脱氢酶分别催化丙酮酸而生成。L-乳酸的光学纯度对于L-乳酸的应用至关重要。因此,为了获取光学纯的L-乳酸,需要敲除该鼠李糖乳杆菌编码D-乳酸脱氢酶的基因ldhD以阻断相关的D-乳酸代谢途径。本研究采用pK18mobsacB自杀质粒运用重叠延伸PCR和同源重组技术成功构建得到重组鼠李糖乳杆菌菌株JCM1553-△ldhD。构建的缺失突变体JCM1553-△ldhD菌株没有引入外源基因,完全符合食品、药品安全要求,发酵液中检测到的L-乳酸含量为99.92%,光学纯度达到99.84%,显著优于野生型菌株。 许黎明 成春燕 吕军关键词:鼠李糖乳杆菌 L-乳酸 同源重组 基因敲除 秀珍菇rDNA序列与农艺性状分析 被引量:1 2015年 利用真核生物在rDNA的ITS区段具有特异性序列的特性,对ITS区进行PCR扩增、测序及序列分析后再设计特异性引物来检测真核生物的方法进行分析,对12个秀珍菇菌株进行分子测试。结果表明,两组内的菌株具有高度的同源性,同时对其进行农艺性状分析。试验结果为避免重复引进、指导生产提供重要的依据和保证。 罗先群 许黎明关键词:RDNA 秀珍菇 农艺性状 人金属硫蛋白基因合成及其表达 金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量、富含半胱氨酸残基的金属结合蛋白。典型的金属硫蛋白由61个氨基酸残基组成,分子量约7000道尔顿;其中含有20个半胱氨酸,6—8个赖氨酸,7—10个丝氨酸和... 周兴 许黎明 杨枝勇 莫新春 王桂文 黄日波文献传递 大黄欧文氏菌蔗糖异构酶控制产物特异性基序的定点突变 被引量:2 2011年 大黄欧文氏菌(Erwinia rhapontici)蔗糖异构酶催化蔗糖异构为异麦芽酮糖和海藻酮糖,具有一个可能控制产物特异性的325RLDRD329基序。本研究以定点突变方法对该基序的带电荷氨基酸进行突变,共构建R325D、R328A、R328D、R328Q和D329N5个突变体。通过对突变体的酶学特性及突变体转化蔗糖的产物组成分析,结果显示所构建突变体的Km值上升约2~5倍,比活力下降至野生型SI比活力的11.8%~25.3%。HPLC分析显示Arg325和Arg328分别突变为Asp,导致产物中异麦芽酮糖/海藻酮糖的比例从6.93分别降至0.96和2.92,并伴随一个未知寡糖出现。Arg328突变为Ala和Gln同样导致反应产物中海藻酮糖比例上升,异麦芽酮糖比例下降。但是突变体D329N反应产物比例没有变化。以上结果表明325RLDRD329基序对大黄欧文氏菌蔗糖异构酶的酶活具有重要作用,并对酶的产物特异性产生影响。本研究结果将为该酶的作用机理研究奠定基础。 周兴 韦星明 杨祥开 郑元涛 庞浩 许黎明 黄日波关键词:定点突变 人金属硫蛋白基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达 周兴 黄日波 许黎明 杨枝勇 莫新春 王薇 王桂文 金属硫蛋白(metallothionein,MT)具有极强的清除自由基、重金属解毒及抗衰老功能;可用于化妆品、保健品和医药领域,具有广阔的市场前景。该项目通过人工合成得到了hmt基因,并成功构建了毕赤酵母分泌表达质粒pP...关键词:关键词:金属硫蛋白 基因克隆 基因表达 毕赤酵母 以蔗糖为原料发酵生产赤藓糖醇研究 蒋永强 吕军 卢汉浪 陈业良 周兴 许黎明 欧娜 莫祺晖 任务来源:该项目是南科发[2011]72号文件下达的南宁市科学研究与技术开发计划项目“以蔗糖为原料发酵生产赤藓糖醇研究”,合同编号:201106003A。应用领域和技术原理:应用领域:以蔗糖为原料发酵生产赤藓糖醇产品。技...关键词:关键词:赤藓糖醇 蔗糖 发酵工艺 大黄欧文氏菌蔗糖异构酶基因克隆表达及其酶学特性研究 被引量:1 2011年 通过PCR克隆得到了不包括信号肽序列的109~1803bp大黄欧文氏菌蔗糖异构酶基因,以pQE30为表达载体可以在大肠杆菌中高效表达SI基因,但容易形成包涵体。通过降低诱导剂IPTG至10μmol/L,28℃低温诱导表达可以改进表达产物的可溶性。重组SI的最适pH为6.0,最适反应温度为30℃。测定的Km为46.8mmol/L,Vmax为152.2U/mg。重组SI对麦芽糖、海藻糖、棉子糖、三氯蔗糖及α-甲基葡萄糖苷等均不起作用,只利用蔗糖为底物转糖苷,也可以水解对硝基苯酚-α-葡萄糖苷。同时发现重组SI具有转化异麦芽酮糖生成海藻酮糖的活性。 周兴 韦星明 杨祥开 郑元涛 许黎明 黄日波关键词:酶学特性 异麦芽酮糖 异麦芽酮糖关键技术研究与示范 蒋永强 卢汉浪 全嘉兴 卢国荣 吕军 廖正官 周兴 陆启良 欧娜 许黎明 莫祺晖 课题来源与背景:该项目是广西科技厅2011年桂财教[2011]107号文件下达的广西科学研究与技术开发计划项目,合同编号:桂科攻11107004-5。技术原理及性能指标:应用领域:以蔗糖为原料生产异麦芽酮糖及其衍生产品。...关键词:关键词:异麦芽酮糖 蔗糖 生产工艺 人金属硫蛋白基因(MT1E)在毕赤酵母中的表达及其铬抗性 被引量:4 2014年 金属硫蛋白(Metallothionein,MT)是一类富含半胱氨酸的蛋白质,巯基含量丰富,其半胱氨酸上的巯基对重金属离子有极强的结合力,能够结合重金属形成无毒或低毒的络合物,具有重金属解毒的功能.本文根据已公布的人金属硫蛋白基因MT1E序列,用Vector NTI 7.0软件设计合成12条寡聚核苷酸片段,并拼接得到MT1E完整基因.将测序正确的MT1E基因克隆至酵母表达载体pPIC9K,酶切验证后的阳性克隆命名为pPIC9K-MT1E,含有该重组基因的毕赤酵母工程菌命名为GS115/pPIC9K-MT1E.通过酶联免疫(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay,ELISA)方法检测到GS115/pPIC9K-MT1E工程菌发酵液有金属硫蛋白酶活性,表明人金属硫蛋白MT1E基因能在毕赤酵母GS115菌株中正确分泌表达.铜(Cu)、锌(Zn)、锰(Mn)、铬(Cr)、钴(Co)重金属抗性分析表明,工程菌GS115/pPIC9K-MT1E对Cr(Ⅵ)的抗性较强,有解毒重金属Cr(Ⅵ)的能力. 许黎明 蒋国凤 周兴关键词:毕赤酵母 ELISA 重金属抗性 大豆β-淀粉酶基因在毕赤酵母中的高密度发酵表达 被引量:3 2017年 大豆β-淀粉酶在麦芽糖浆生产上具有应用优势。该研究应用毕赤酵母表达系统异源表达大豆β-淀粉酶,并对重组酶的酶学性质进行了分析,结果显示,其酶学性质没有改变。为了增强重组β-淀粉酶的表达,采用甲醇/山梨醇混合碳源诱导的毕赤酵母表达策略,10 L发酵罐发酵表达的重组β-淀粉酶酶活力为310 U/mL,比单一甲醇诱导提高了36%。研究结果表明,发酵条件优化对提高异源β-淀粉酶在毕赤酵母中的表达有重要参考价值。 许黎明 成春燕 韦星明 莫祺晖 卢汉浪 杨祥开关键词:Β-淀粉酶 毕赤酵母 异源表达 酶学性质 山梨醇