张东超
- 作品数：34 被引量：48H指数：4
- 供职机构：天津农学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金天津市自然科学基金国家级大学生创新创业训练计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>
- PEDV、TGEV与PDCoV S蛋白表位基因三联疫苗的构建及其鉴定
- 2024年
- [目的]构建一种同时预防猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)和猪德尔塔冠状病毒(PDCoV)的三联表位疫苗,以预防上述病原导致的猪的相关疾病。[方法]本研究运用免疫信息学在线软件对3种猪肠道冠状病毒(SeCoVs)的S蛋白B、T细胞表位进行预测分析,构建新的表位肽段,命名为PPT,通过ExPASy、VaxiJen、TMHMM、SOPMA、SOLpro和AlphaFlod2等在线软件对PPT进行生物信息学分析,并利用C-IMMSIM在线软件对其免疫反应进行模拟。通过T2A将PPT与PEDV的COE序列、TGEV的SAD序列及PDCoV的CTD序列连接并构建至真核表达载体pEGFP-N1,经PCR和双酶切鉴定正确后,将获得的重组质粒转染HEK293A细胞,经DAPI染色、CCK8、RT-PCR及Western blotting试验验证重组质粒在体外表达情况。[结果]构建的表位蛋白PPT由17条表位肽段组成,经生物信息学软件分析,该蛋白为非跨膜蛋白,结构稳定,具有抗原性和可溶性,亲水性高,无过敏性。C-IMMSIM结果显示,PPT能引起机体树突状细胞(DC)增加,B、T细胞免疫反应,刺激免疫球蛋白IgG、IgM和细胞因子γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-2(IL-2)水平升高。重组质粒经PCR和双酶切鉴定结果显示,分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp出现特异性目的条带,与预期相符;重组质粒转染HEK293A细胞后,可见绿色荧光;RT-PCR扩增分别在3359、2375、1064、944、764和467 bp处获得与目的基因大小相符的条带;CCK-8检测结果表明,重组质粒对细胞均无明显毒性作用;Western blotting检测结果显示,分别在31.7、16.1、37.9和27.5 ku处出现与目的蛋白分子质量大小一致的条带,重组质粒成功在HEK293A细胞中表达。[结论]本研究基于计算机软件分析设计的PPT表位蛋白成功构建三联疫苗,且在体外表达,为评价PEDV-TGEV-PDCoV三联表位疫苗的免疫效果提供依据。
- 刘青顾天越包利霞朱凡杰王鑫源刘婷婷朱晓琛鄢明华鄢明华王利丽董志民金天明
- 关键词：S蛋白表位疫苗
- 副猪嗜血杆菌的分离鉴定与药敏试验研究被引量：1
- 2014年
- 副猪嗜血杆菌病是一种猪的传染病,主要引起断奶仔猪和保育猪发病。试验对天津某规模化猪场疑似副猪嗜血杆菌病猪采集病变明显的组织进行细菌分离培养、显微镜镜检、生化试验等实验室诊断,结合病猪的临床症状和病理变化特点,判定该细菌分离株为副猪嗜血杆菌。药敏试验结果显示,该株副猪嗜血杆菌对头孢噻呋、阿米卡星等药物高度敏感。
- 谷禹张东超弓建芳徐继鹏金天明李留安高丰
- 关键词：副猪嗜血杆菌药敏试验
- 天津市养猪业细菌性传染病的监测及防控技术推广
- 2017年
- 1 项目的研究背景及其意义
目前，危害养猪业的细菌性传染病主要包括猪肺疫（巴氏杆菌病）、猪传染性胸膜肺炎、大肠杆菌病、副猪嗜血杆菌病、猪副伤寒（沙门氏菌病）、猪丹毒、葡萄球菌病、链球菌病等。本项目拟建立上述疾病的快速鉴别诊断程序，进而完善养猪业细菌性传染病的早期监测及防控技术体系。
- 林静李小慧张东超高珂珂弓建芳杨宁宁孟佳丽尚翠丽李昕金天明
- 关键词：细菌性传染病防控技术养猪业猪传染性胸膜肺炎副猪嗜血杆菌病
- 肉鸡禽呼肠孤病毒与巴氏杆菌混合感染的鉴别诊断被引量：6
- 2015年
- 2014年11月河北某规模化鸡场一批4周龄左右的肉鸡发病死亡,临床表现为精神沉郁、呼吸困难、关节肿大、跛行等症状,为对此疫病进行确诊,通过病理组织学观察、细菌分离、PCR检测、药敏试验、动物致病性试验等实验室诊断方法进行系统分析。病理组织学观察结果显示肺脏出血,心脏、肝脏水肿,并伴有异嗜性粒细胞浸润;镜检可见两极深染的短杆菌;用多杀性巴氏杆菌KMT-1基因和禽呼肠孤病毒(ARV)σB基因特异性引物的扩增结果均为阳性;该巴氏杆菌分离菌可致死小鼠,且对头孢曲松、头孢哌酮等药物高度敏感。根据上述实验室检测结果并结合临床症状进行综合分析,最终确诊该病为ARV和巴氏杆菌混合感染。
- 张东超杨宁宁龙雨清李萌李小慧弓建芳高珂珂金天明
- 关键词：禽呼肠孤病毒巴氏杆菌
- 一种重组质粒、弓形虫ROPs基因重组减毒沙门氏菌、疫苗及应用
- 本发明公开了一种重组质粒、弓形虫ROPs基因重组减毒沙门氏菌、疫苗及其应用，重组沙门氏菌分别携带重组质粒pVAX1‑CpG‑ROP9、pVAX1‑CpG‑ROP16、pVAX1‑CpG‑ROP17和pVAX1‑CpG‑R...
- 张东超何金灵杜荣起杨琳燕李丹若赵瑞利赵伟金天明
- 共表达Apoptin与MEL基因的重组腺病毒及构建方法和应用
- 本发明属于构建重组腺病毒领域，具体涉及一种共表达Apoptin与MEL基因的重组腺病毒及构建方法和应用。构建方法包括下述步骤：1)TAT‑Apoptin、RGD‑MEL、TAT‑Apoptin+UBI‑RG‑MEL基因片...
- 金天明武静桥张东超姚景丽范真玮陈婷何敬文赵微
- 文献传递
- 猪传染性胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及药敏试验被引量：24
- 2016年
- 为了给天津某规模猪场提供猪传染性胸膜肺炎(PCP)的科学防控和合理的用药方案,本试验对该猪场疑似患PCP的病猪进行临床综合诊断和病理组织学观察,无菌采集病料,通过细菌的分离与培养、镜检、生化试验、卫星试验、PCR检测、动物致病性试验及药敏试验等实验室方法对分离菌进行系统分析。结果发现,病猪呼吸困难,病理剖检和病理组织学观察可见有典型的纤维素性肺炎变化;显微镜下分离菌呈多形性的革兰氏阴性杆菌,且其生化试验、卫星试验结果与传染性胸膜肺炎放线杆菌(APP)特性一致;用APP APXⅣA毒素基因特异性引物扩增结果为阳性;该APP分离菌对小鼠具有致病性,且对头孢噻肟、氟苯尼考等药物高度敏感。根据实验室检测结果并结合临床综合诊断,最终判定该细菌分离株为猪传染性APP。
- 张东超杨宁宁林静弓建芳高珂珂李小慧金天明
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎胸膜肺炎放线杆菌PCR检测药敏试验
- App菌影装载盐酸阿霉素的体外缓释研究
- 李小慧高珂珂张东超弓建芳林静孟佳丽李昕尚翠玲金天明
- 鸡传染性支气管炎继发感染大肠杆菌病的鉴别诊断被引量：6
- 2016年
- 2015年6月河北某规模肉鸡场发生疫情,病死鸡为2周龄雏鸡,临床表现为呼吸困难、咳嗽、喷嚏,排黄绿色稀便等症状。通过病理剖检、细菌分离鉴定、动物致病性试验、血清型鉴定、RT-PCR检测等实验室诊断方法对病原进行鉴别诊断。剖检濒死鸡可见"花斑肾",腺胃肿大,心包膜混浊,肝脏表面有大量纤维素性渗出物等;病理组织学观察结果显示肾脏、肝脏、心脏及肺脏等有大量炎性细胞浸润和红细胞渗出;镜检组织抹片和分离细菌可见革兰氏阴性短杆菌,生化试验结果与大肠杆菌特性一致,且血清型鉴定为O_(78);该分离株对雏鸡有致病性,且对呋喃唑酮、头孢曲松等药物高度敏感;用鸡传染性支气管炎病毒S1基因特异性引物的扩增结果为阳性。根据上述实验室检测结果并结合临床症状进行综合分析,最终确诊该发病鸡群为鸡传染性支气管炎继发大肠杆菌感染。
- 张东超林静杨宁宁弓建芳高珂珂李小慧金天明
- 关键词：鸡传染性支气管炎继发大肠杆菌
- 共表达内溶素和人溶菌酶基因的重组腺病毒构建
- 2015年
- 为研究内溶素SAL-2和人溶菌酶h LYZ的联合抑菌作用,本研究通过PCR方法分别从携带SAL-2和h LYZ基因的质粒中扩增目的片段,连接至腺病毒穿梭载体的多克隆位点上,构建重组穿梭载体p Shuttle-SAL和p Shuttle-LYZ。成功构建的重组穿梭质粒与Ad-easy骨架质粒在BJ5183中发生同源重组,重组得到的阳性重组腺病毒载体在脂质体介导下转染HEK293细胞,包装产生重组腺病毒Ad-SAL、Ad-LYZ、Ad-SALLYZ和对照重组腺病毒Ad-GFP,通过RT-PCR和Western blot方法检测mR NA和蛋白表达后,将构建的重组腺病毒进行扩增纯化并测定病毒滴度。结果表明,成功构建的重组腺病毒感染细胞后,SAL-2和h LYZ基因的mR NA均有表达,Western blot分别检测到28.6 ku和14.7 ku目的蛋白条带。扩增纯化后经TCID50方法检测病毒滴度分别为108.17TCID50/mL、108.50TCID50/mL、108.63TCID50/mL和107.60TCID50/mL。表明成功构建包装的重组腺病毒对HEK293细胞具有较强的感染能力,可稳定介导SAL-2基因和h LYZ基因在HEK293细胞中的表达。
- 李萌龙雨清张东超弓建芳李小慧高珂珂金天明
- 关键词：人溶菌酶共表达重组腺病毒
