刘博
- 作品数：5 被引量：13H指数：3
- 供职机构：四川大学生命科学学院微生物与代谢工程四川省重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划四川省自然科学基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学轻工技术与工程化学工程石油与天然气工程更多>>
- 常温氢氧化钠预处理芦苇酶解发酵产油被引量：1
- 2016年
- 在室温(28℃)下对氢氧化钠预处理芦苇(Phragmites australis)条件进行单因素和响应面设计优化,对酶解的条件进行单因素优化,对酶解液成分进行HPLC分析,利用未经任何脱毒处理的酶解液发酵产油并与配制培养基对比,通过GC-MS对油脂脂肪酸组成进行分析.结果表明:最佳预处理条件为氢氧化钠质量分数3.4%,预处理时间16h,液固比20:1 m L/g,在初始酶解条件下酶解得到酶解液还原糖浓度为26.32 g/L;最佳酶解的条件为p H=4.5,温度45℃,液固比10:1 m L/g,酶解时间48 h,纤维素酶和纤维二糖酶酶液添加量均为30μL/g,得到酶解液还原糖浓度为40.01g/L;经HPLC分析,酶解液中葡萄糖、木糖、阿拉伯糖和半乳糖比例分别为70.27%、19.83%、5.08%和4.82%;通过隐球酵母(Cryptococcus podzolicus)ZWY-2-3发酵产油,其生物量、油脂产量和油脂含量在4 d时达到最大,分别为8.63 g/L、2.56 g/L和29.68%,其与同等糖浓度的对照组配制作培养基相当.本研究表明,芦苇是生产微生物油脂的潜在生物质原料,具有广阔的应用前景.
- 秦汉秦家亮黄国印刘海霞刘博史红霞李宪玲乔代蓉曹毅
- 关键词：芦苇氢氧化钠常温响应面微生物油脂
- 紫外诱变选育高产丁二酮乳酸菌株及其低成本发酵优化被引量：1
- 2017年
- 2,3-丁二酮是一种常用的安全食品添加剂,为了提高微生物发酵中菌株的丁二酮产量,从泡菜水样品中分离筛选出一株野生型高产丁二酮菌株,并进行紫外诱变选育以及发酵条件优化.筛选获得高产丁二酮野生型乳酸菌株(1)-2,产量为67.02 mg/L,经16S r DNA分子鉴定为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum).紫外诱变获得高产丁二酮突变株U13,产量为127.88 mg/L.对突变前后菌株几种丁二酮代谢相关酶酶活变化的比较结果显示,突变株丁二酮产量的提高是因为乳酸脱氢酶减少及乙酰乳酸合成酶增加.正交实验优化突变株U13的最佳丁二酮发酵条件为接种量3%,初始pH 6.6,葡萄糖30 g/L,组合氮源(蛋白胨:酵母粉:牛肉膏=2:1:2)20 g/L,柠檬酸氢二铵3 g/L,乙酸钠2 g/L,吐温-80 1 m L/L,K_2HPO_4 2 g/L,Mg^(2+)2 mmol/L,Mn^(2+)0.7 mmol/L,Cu^(2+)2 mmol/L,温度为37℃.利用廉价碳氮源淀粉及小麦麸皮替代原有碳氮源,淀粉替代率不超过20%、小麦麸皮替代率不超过40%时,丁二酮产量降幅比较低.本研究通过诱变选育和发酵条件优化,提高了菌株丁二酮产量,并通过廉价碳氮源替换降低了成本,可为丁二酮的微生物工业发酵提供参考.
- 张白梅徐辉曹瑜刘博胡超李宪玲史红霞曹毅乔代蓉
- 关键词：植物乳杆菌紫外诱变发酵优化小麦麸皮
- 罗伊氏乳杆菌制剂的制备及性能评价被引量：3
- 2017年
- 罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)常栖息于人和动物的肠道系统中,能产生一种特殊的抑菌物质——罗伊氏素,是调节肠道功能的益生菌.乳酸菌活菌制剂广泛应用于食品、医疗、饲料等相关行业.喷雾干燥的能耗较低,在同样生产出优质产品的前提下,冷冻干燥消耗的能量是喷雾干燥的6～10倍.本文通过吸附材料的筛选、保护剂的选择,并对喷雾干燥相关条件进行优化,利用优化的条件进行罗伊氏乳杆菌制剂的制备,并对制备的乳酸菌制剂进行热稳定性实验以及相关质量测定(电镜观察、水分含量、粒径、得率等).结果表明,利用改性硅藻土作为吸附材料的乳酸菌制剂活菌存活率优于改性沸石,选定脱脂牛奶和果聚糖作为保护剂,最佳喷雾干燥条件为:进口温度120?C,出口温度60?C,脱脂牛奶10 g,果聚糖5 g,硅藻土5 g,通过此优化条件制备的乳酸菌制剂其活菌存活率达到88%,活菌数达到5.14×109CFU/g.该乳酸菌制剂在70?C条件下水浴1h,乳酸菌活菌数为3.49×106CFU/g.研究表明,通过优化的喷雾干燥条件制备的乳酸菌制剂存活率高,热稳定性较好.
- 刘博许毅秦世尚唐滋一徐辉乔代蓉曹毅
- 关键词：罗伊氏乳杆菌喷雾干燥硅藻土热稳定性
- 黑曲霉木聚糖酶XynB耐热性的定向改造及表达、纯化被引量：5
- 2014年
- 酶活性高的木聚糖酶在工业中具有巨大应用潜力,但大部分野生木聚糖酶不能耐受工业生产过程中的极端环境比如高温,因此很有必要通过分子生物学的方法改造木聚糖酶.本文通过分子动力学模拟和定点突变的方法以提高黑曲霉(SCTCC400264)来源的木聚糖酶Xyn B的耐热性.利用定点突变技术获得突变载体p ET32a-Xyn B-T79V并转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导成功表达木聚糖酶Xyn B-T79V.在镍亲和层析纯化蛋白后测定了突变酶的耐热性.突变体Xyn B-T79V在30、40、50℃处理120 min后酶活几乎没有损失,当处理温度升高到60-80℃时,酶活开始下降.温度升到80℃时,残余酶活仍有37%,而此时野生型Xyn B的活性几乎完全丧失.突变体Xyn B-T79V半衰期t1/2提高了8.7 min.本研究获得的突变酶Xyn B-T79V耐热性显著提高,为工业应用提供了新的酶资源.
- 余英鹏姜腾飞李茜马晓瑞宋济君刘博乔代蓉曹毅徐辉
- 关键词：木聚糖酶耐热性分子动力学模拟定点突变
- 播娘蒿转录因子DsCBF1突变体的构建及其蛋白质的EMSA试验分析被引量：3
- 2016年
- CBF(C-repeat binding factor)是调控植物冷驯化相关基因表达的调控转录激活因子,可与下游冷应答基因启动子的核心序列CBT/DRE元件(CCGAC)特异性地结合,启动耐寒基因的表达,提高植物的抗寒能力.为揭示播娘蒿(Descurainia sophia)的抗寒机制,研究播娘蒿转录因子Ds CBF1蛋白AP2区域编码氨基酸对启动下游抗寒基因表达的作用.首先分析Ds CBF1蛋白AP2区域编码氨基酸的疏水性,设计重叠延伸PCR引物,定点突变Ds CBF1基因;然后构建p ET32a-Ds CBF1突变体原核表达载体,通过冻融法转化入宿主大肠杆菌BL21(DE3)中,进行原核表达,并通过镍离子亲和层析纯化Ds CBF1突变体蛋白;最后利用化学发光法EMSA试验(Electrophoretic mobility shift assay)方法分析Ds CBF1蛋白与含有CRT/DRE元件的DNA探针之间的相互作用.EMSA试验分析显示,播娘蒿Ds CBF1的AP2区域的57位苯丙氨酸F(TTT)和68位缬氨酸V(GTT)分别突变为精氨酸R(CGT)和谷氨酸E(GAA),导致播娘蒿顺式调控因子Ds CBF1蛋白与下游冷响应基因的CRT/DRE元件结合效率出现明显下降趋势,说明播娘蒿Ds CBF1蛋白AP2区域编码氨基酸位点的突变影响了播娘蒿的抗寒能力.本研究表明播娘蒿Ds CBF1的AP2区域的57位苯丙氨酸F(TTT)和68位缬氨酸V(GTT)位点对于播娘蒿的冷驯化具有十分重要的作用.
- 陈麒名常菲菲李茜刘博田磊陈天盈徐辉乔代蓉
- 关键词：播娘蒿重叠延伸PCREMSA
