丁丽
- 作品数：7 被引量：6H指数：2
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- 利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子被引量：3
- 2014年
- [目的]利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,利用生物信息学方法分析其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[方法]首先构建ACLSV CP的酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold中,测定转化菌在SD/-Trp、SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上的生长情况,从而判断其在酵母双杂交过程中对报告基因的自激活活性。将p GBKT7-CP及p GBKT7分别转化至酵母菌株Y2H gold,培养不同时间后,用紫外分光光度计测定OD600值,分析p GBKT7-CP对酵母菌生长的影响;然后通过顺序转化的方法自前期已构建好的苏俄苹果(Malus sylvestris cv.R12740-7A)c DNA文库中钓取与ACLSV CP互作的因子,最终在SD/-Ade/-His/-Leu/-Trp/X-α-Gal平板上筛选生长良好的蓝色阳性菌落,测定序列,并在Gen Bank中对其进行BLAST分析,根据基因注释推断其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。[结果]成功构建了酵母双杂交诱饵载体p GBKT7-CP,转化至酵母菌株Y2H gold后,转化菌只能在SD/-Trp平板上正常生长,不能在SD/-Trp/-His和SD/-Trp/-Ade-X-α-Gal平板上生长,表明重组质粒自身不能激活报告基因His及Ade的表达,没有自激活活性。酵母双杂诱饵载体p GBKT7-CP与对照空质粒转化菌生长情况相似,证明诱饵载体对酵母菌没有毒性;筛选到了69个互作寄主基因,包括转录因子活性、碳固定活性、细胞内铁离子平衡、防御反应、水解酶活性、氧化酶活性、氧化还原酶活性、光系统II组件、绑定蛋白等10类蛋白,经生物信息学分析,其中8个寄主基因(Malus3-1、Malus4-2、Malus4q1、Malus31-3、Malus49q2、Malus15-1、Malus6-2、Malus91-4)可能在病毒与寄主互作过程中起重要作用。[结论]分析筛选到的重要寄主蛋白功能,推测ACLSV CP与BZIP类、MYB类转录因子、病程相关蛋白(PR-5、PR-8、PR-10)互作,可�
- 何乙坤钟敏胡同乐王树桐段豪丁丽王亚南曹克强
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交
- 利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子
- 利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,了解其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用....
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- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交
- 苹果褪绿叶斑病毒在苹果植株体内的分布被引量：3
- 2018年
- 以采自河北农业大学苹果园的褪绿叶斑病毒(apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)样本为试材,采用实时荧光定量RT-PCR方法,研究了苹果不同组织部位、不同树体方位、不同生长发育时期和病毒相对含量之间的关系,以期为明确褪绿叶斑病毒在苹果植株中的时空分布规律提供参考依据。结果表明:从组织部位角度分析,在苹果的盛花期,ACLSV在花中的相对含量最高,芽中最低,ACLSV相对含量由高到低依次为:花、二年生枝皮组织、叶、一年生枝皮组织和芽。从树体方位角度分析,在苹果一年生枝皮组织中,ACLSV在4个方位上的病毒相对含量差异显著,位于南向的病毒相对含量最高,西向最低。从生长发育时期角度进行分析,2015年9月至2016年4月,苹果一年生枝皮组织中,病毒相对含量从9月中旬至10月中旬大幅升高,10月中旬达到这8个月中的最高峰,此后病毒相对含量开始下降,3月起呈上升趋势。
- 李楠王亚迪杨军玉丁丽王亚南曹克强
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒实时荧光定量RT-PCR
- 利用酵母双杂交筛选与苹果褪绿叶斑病毒CP互作的寄主因子
- 利用酵母双杂交系统筛选与苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)外壳蛋白(coat protein,CP)互作的寄主因子,了解其在病毒与寄主互作过程中可能发挥的作用。...
- 何乙坤钟敏胡同乐王树桐段豪丁丽王亚南曹克强
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒酵母双杂交
- 文献传递
- ACLSV苹果植株体内分布及互作基因PR10超表达、RNAi载体构建
- 苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV)是世界性分布最广的一类苹果潜隐性病毒，该病毒会导致树体衰弱、产生慢性病害，严重影响果树的生长发育。繁育无毒苗木是目前苹果病毒病...
- 丁丽
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒核糖核酸干扰
- 文献传递
- 苹果褪绿叶斑病毒植株体内分布
- 苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus,ACLSV)是世界性分布最广的一类苹果潜隐性病毒,该病毒会导致树体衰弱、产生慢性病害,严重影响果树的生长发育。繁育无毒苗木是目前苹果病毒病...
- 李楠王亚迪吕运霞丁丽王树桐胡同乐王亚南曹克强
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒RT-PCR
- 文献传递
- 苹果褪绿叶斑病毒互作寄主因子的筛选与鉴定
- 王亚南赵绪生曹克强丁丽王树桐胡同乐陶晡张瑜何乙坤段豪
- 在搭建高效筛选与ACLSV互作寄主因子的酵母双杂交系统的基础上，以ACLSV 外壳蛋白和运动蛋白为诱饵，筛选苏俄苹果（R12740-7A）cDNA文库中能与其互作的蛋白131个，通过生物信息学分析，推测了13个重要蛋白在...
- 关键词：
- 关键词：苹果褪绿叶斑病毒生物信息学
