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重组大肠杆菌毒素蛋白LT-Ⅱc1B-Stx2B-STa13的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究: 犊牛大肠杆菌性腹泻是由致病性大肠杆菌感染犊牛引起的一种常见临床疾病，主要表现为腹泻、脱水或败血症，是新生犊牛死亡的主要病因之一，给养牛业带来严重的经济损失。目前治疗大肠杆菌病主要应用抗生素，但药物治疗的效果越来越差，因此...; 唐杰; 关键词：黏附素肠毒素志贺毒素体液免疫; 文献传递

重组大肠杆菌毒素蛋白LT-IIc1B-Stx2B-STa13的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究: 犊牛大肠杆菌性腹泻是由致病性大肠杆菌感染犊牛引起的一种常见临床疾病,主要表现为腹泻、脱水或败血症,是新生犊牛死亡的主要病因之一,给养牛业带来严重的经济损失。目前治疗大肠杆菌病主要应用抗生素,但药物治疗的效果越来越差,因此...; 唐杰; 关键词：犊牛腹泻毒力因子重组蛋白体液免疫; 文献传递

大肠杆菌耐热肠毒素基因多拷贝串联表达及其单克隆抗体的制备: 2015年; 为制备具有免疫原性的重组大肠杆菌耐热肠毒素蛋白(STp)及抗STp特异性单克隆抗体(MAb),本研究将5拷贝estp串联,克隆于p GEX-6p-1中,构建重组表达质粒p GEX-estp5-his,并转化于大肠杆菌中进行重组蛋白STp5-His(r STp5-His)的表达。以r STp5-His为免疫原,重组蛋白MBP-5STp为检测抗原,制备和筛选阳性杂交瘤细胞株,并采用western blot、阻断ELISA方法对MAb进行鉴定。结果显示,r STp5-His主要以包涵体形式表达,大小约为38 ku,具有良好的免疫原性,以其作为免疫原制备了4株能够识别天然STp的MAb,特异性良好。研究表明,多拷贝基因串联表达可以制备具有免疫原性的重组STp蛋白,所制备的MAb为天然STp和重组STp蛋白检测方法的建立奠定了基础。; 韩林林阿力马斯别克.哈山李金萍唐杰刘文鑫关玮琨李星月赵志腾师东方; 关键词：大肠杆菌基因串联体免疫原性单克隆抗体

大肠杆菌肠毒素基因多重PCR检测方法的建立被引量：9: 2015年; 目的建立一种快速检测大肠杆菌耐热肠毒素(heat-stable enterotoxin,STa,STb)和不耐热肠毒素(heat-labile enterotoxin,LT-Ⅰ,LT-Ⅱ)基因的多重PCR方法。方法参照文献合成四对可扩增产肠毒素大肠杆菌(Enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)耐热肠毒素基因(estA、estB)和不耐热肠毒素基因(elt-Ⅰ、elt-Ⅱ)的特异性引物,通过反应条件的优化,敏感性、特异性试验和临床样品检测,建立检测大肠杆菌肠毒素的多重PCR方法。结果用所建立的多重PCR方法可特异性扩增出estA(229bp)、estB(480bp)、elt-Ⅰ(605bp)和elt-Ⅱ(300bp)基因片段,最低检出量分别为2.55×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL、2×101 CFU/μL和2.47×103 CFU/μL。从22株大肠杆菌分离株中检测到estA基因(2/22),elt-Ⅱ基因(3/22),未检测到estB和elt-Ⅰ基因,检测结果与常规PCR检测结果一致。结论建立了检测大肠杆菌肠毒素基因(estA、estB、elt-Ⅰ和elt-Ⅱ)的多重PCR方法,该方法具有良好的特异性和敏感性,能够满足对细菌培养物的检测要求。; 孟相秋袁超文刘文鑫关玮琨杜元策李丹丹赵姝静唐杰师东方; 关键词：产肠毒素大肠杆菌不耐热肠毒素多重PCR

牛源产Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌的分离鉴定及重组毒素制备被引量：5: 2014年; 产Ⅱ型不耐热肠毒素(LT-Ⅱ)大肠杆菌是一类能引起严重腹泻的人畜共患肠道致病菌。为了解LT-Ⅱ在牛源腹泻性大肠杆菌中的流行情况,本研究对2010-2012年间分离的138株大肠杆菌进行了LT-Ⅱ毒素基因的检测,对分离到的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌进行了测序及分析。进一步将LT-Ⅱcl毒素基因双顺反子的ORF克隆入pET30a表达载体、转化Rossatta感受态并诱导表达重组LT-Ⅱcl毒素,经Y-1小鼠肾上腺皮质细胞对重组毒素进行了初步的毒性验证。结果显示,所分离的10株LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中,有8株表达LT-Ⅱcl毒素,1株表达LT-Ⅱc4毒素,1株表达LT-Ⅱc6毒素。SDS-PAGE和Western Blot结果表明成功地制备出LT-Ⅱcl重组毒素,该重组毒素可以使Y-1小鼠肾上腺皮质细胞发生明显的病变,其细胞最小致死量为17.8 pg。本研究为中国国内首次分离到牛源产LT-Ⅱ型不耐热肠毒素大肠杆菌,为深入研究LT-Ⅱ毒素奠定了基础。; 袁超文刘文鑫关玮琨孟相秋唐杰李星月赵志腾师东方; 关键词：重组毒素细胞毒性

东北地区仔猪腹泻大肠杆菌EAST1基因调查被引量：5: 2016年; 大肠杆菌肠聚集性热稳定肠毒素Ⅰ(EAST1)是近年来备受关注的一种肠毒素。为进一步了解EAST1毒力基因在东北地区仔猪腹泻大肠杆菌中的存在情况,以及EAST1毒力基因与其他毒力基因的存在关系进行研究,试验于2010—2013年从东北地区38个规模化猪场共采集断奶仔猪腹泻粪便样品290份,经染色镜检和生化试验鉴定出362株大肠杆菌,应用PCR检测方法对STa、STb、LTa、LTb、paa、AIDA-I、afa E、irp2和EAST1等毒力基因进行检测。结果表明:有286株大肠杆菌携带毒力基因,其中89株(占31.12%)携带EAST1毒力基因,只含有EAST1毒力基因的有49株(占17.13%),同时携带其他毒力基因的有40株(占13.99%)。EAST1毒力基因可以协同F1菌毛、paa基因频繁交叉出现在同一致病菌中,但这些毒力基因编码的毒素之间是否存在协同致病关系尚需进一步研究。; 唐杰袁超文刘文鑫孟相秋关玮琨李星月赵志腾王时葛建松郭德民江松泽师东方; 关键词：腹泻

重组大肠杆菌肠毒素蛋白LTA_(192)-STa_(13)的表达及其诱导小鼠体液免疫的研究被引量：1: 2015年; 为研究重组大肠杆菌肠毒素融合蛋白LTA192-STa13的免疫原性,本研究将产肠毒素大肠杆菌(ETEC)elt A和est A基因定点突变后构建融合基因,进行重组蛋白LTAR192G-STaG13Q的表达。利用纯化的重组蛋白和灭活菌液分别免疫小鼠,比较不同抗原诱导小鼠体液免疫应答能力,以及体外免疫血清对毒素的中和作用。结果显示,各组免疫小鼠均可以产生高滴度抗LTA和STa抗体,其血清抗体可以通过乳汁传递给新生仔鼠,其中蛋白免疫组血清抗体效价更高。体内外中和试验证明,实验组小鼠三免后的血清能够中和LT和STa毒素对实验鼠的毒性作用,并且能够中和LT对Y-1细胞的毒性作用,蛋白免疫组血清抗体中和效价可达到1∶89.13,明显高于灭活菌免疫组。研究表明,重组蛋白LTA192-STa13对小鼠具有良好的免疫原性,能够诱导免疫鼠产生良好的体液免疫应答,可以作为ETEC亚单位疫苗的候选抗原。; 杜元策沙木哈吾.别开刘文鑫关玮琨孟相秋韩林林李金萍袁超文唐杰李星月赵志腾师东方; 关键词：大肠杆菌肠毒素重组蛋白体液免疫

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唐杰