夏靖华 作品数:12 被引量:41 H指数:5 供职机构: 第四军医大学唐都医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
应用ARMS原理建立人类EGFR基因突变检测方法 肺癌是全世界公认的恶性肿瘤之一,严重危害人类的生命安全,其中非小细胞肺癌占肺癌总量的75%-85%。大部分肺癌在确诊时已处于中晚期。对于处于二、三期的非小细胞肺癌患者,主要集中于化疗和放疗这两种传统的治疗方法,但经治疗的... 夏靖华关键词:分子靶向治疗 EGFR 突变检测 文献传递 EGFR 19-Del上调Fn14及JAK/STAT的表达促进非小细胞肺癌的发生发展 2016年 目的:本研究检测Fn14、p-JAK1、p-STAT1在EGFR 19-Del的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞系中的表达,并探讨EG F R 1 9-Del对Fn 1 4及J A K 1/STAT 1表达的调控作用,以期为EGFR 19-Del之NSCLC的发展机制研究奠定基础。方法:采用EGFR TKI(吉非替尼)处理HCC827细胞系(EGFR 19-Del)、H1975(L858R)及H292细胞系(正常肺上皮细胞),Western blot法检测Fn14、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达。结果:相比于H1975和H292细胞系,Fn14、p-JAK1及p-STAT1基因和蛋白在HCC827细胞系中有较高的表达水平。对比未经吉非替尼处理的HCC827细胞系,经抑制剂处理后的HCC827细胞系中Fn14、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达明显受到抑制,而在H292细胞系中无此现象。由此说明,EGFR 19-Del对Fn14及JAK/STAT信号分子的表达具有调控作用。结论:EGFR 19-Del可能通过上调Fn14及JAK/STAT信号分子的表达促进NSCLC的发生发展,而Fn14可能是EGFR 19-Del之NSCLC潜在的治疗靶点。 冯征 孙盈 周勇安 王雪娇 文苗苗 夏靖华 邢昊 王磊 李小飞 张志培关键词:EGFR JAK/STAT 非小细胞肺癌 CREPT和CDK4在非小细胞肺癌组织中的表达及临床意义 被引量:6 2018年 目的探讨CREPT与细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达情况及临床意义。方法收集2006年3月至2011年12月手术切除的271例NSCLC组织及相应正常肺组织标本,采用免疫组化En Vision法检测上述组织中CREPT和CDK4的表达情况,分别采用RT-PCR和Western blotting检测NSCLC组织及相应正常肺组织标本中CREPT和CDK4的mRNA和蛋白表达。结果 CREPT与CDK4主要表达于细胞核。CREPT在NSCLC组织中的阳性表达率为96.7%(262/271),高于正常肺组织的42.1%(114/271),差异有统计学意义(P=0.000);CDK4在NSCLC组织中的阳性表达率为91.9%(249/271),高于正常肺组织的15.5%(42/271),差异有统计学意义(P=0.000)。CREPT表达与分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),CDK4表达与肿瘤直径、分化程度、TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05)。在NSCLC总体、腺癌、鳞癌组织中,CREPT和CDK4表达均呈正相关(r值分别为0.520、0.544、0.501,P=0.000)。Western blotting检测显示,CREPT和CDK4蛋白在NSCLC组织中表达,在相应正常肺组织中不表达。RT-PCR检测显示,CREPT和CDK4的mRNA水平在NSCLC组织中(0.2846±0.0780、0.4013±0.0677)明显高于正常肺组织(0.0894±0.0292、0.1882±0.0761),差异有统计学意义(P=0.024,P<0.001)。结论 CREPT和CDK4是NSCLC组织与相应正常肺组织表达的差异蛋白,二者表达均与NSCLC分化程度、TNM分期、淋巴结转移有关,在NSCLC发生、发展中起促进作用。 夏靖华 张志培 文苗苗 李维妙 孙盈 王雪娇 李小飞CREPT与CyclinD3在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究 被引量:2 2015年 目的:检测CREPT(cell-cycle related and expression-elevated protein in tumor)与细胞周期蛋白D(CyclinD3)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,分析二者在促进NSCLC发生发展过程中的作用。方法:免疫组织化学法检测CREPT、CyclinD3在271例NSCLC及相应正常组织中的表达情况,统计学分析二者间的相关性及其在临床病理因素中的差异性。结果:CREPT和CyclinD3定位于细胞核与细胞质中,在NSCLC组织中高表达,癌组织与正常组织中阳性表达率差异性极显著(P<0.001)。CREPT、CyclinD3在腺癌、鳞癌间表达无统计学差异(P=0.638,P=0.503);在总NSCLC、腺癌、鳞癌的病理分级间,表达均具有极显著性差异(P<0.001);在总NSCLC组织TNM分期、淋巴结是否转移间的表达差异性显著(P=0.025,P=0.001;P=0.003,P=0.026);在总NSCLC、腺癌、鳞癌中,CREPT和CyclinD3表达秩相关系数r分别是0.458、0.393、0.468;P<0.001,二者具有正相关性。结论:CREPT和CyclinD3是NSCLC组织与相应正常组织表达的差异蛋白,二者的过表达可能在NSCLC的发生发展过程中起作用。 李维妙 夏靖华 王雪娇 王磊 文苗苗 孙盈 范亮波 邢昊 程庆书 张志培关键词:非小细胞肺癌 CHCHD2在非小细胞肺癌中的表达及临床意义 被引量:1 2017年 目的:检测CHCHD2在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和相应正常组织中的表达,探讨其在NSCLC发生发展过程中的可能作用及临床意义。方法:收集209例NSCLC组织,采用免疫组织化学法检测NSCLC及相应正常组织中CHCHD2的表达,分析其在临床病理因素中的差异性。结果:CHCHD2主要定位于细胞质中,癌组织与正常组织中表达阳性率差异有统计学意义(P<0.001)。CHCHD2在鳞癌亚型间表达差异无统计学意义(P=0.957);在腺癌亚型间表达差异有统计学意义(P=0.027);在腺癌、鳞癌的病理分级间,表达差异均有统计学意义(P=0.009,P=0.006);在TNM分期的T分期和N分期中表达差异有统计学意义(P=0.011,P<0.001)。结论:CHCHD2在NSCLC中高表达,是NSCLC组织与相应正常组织表达的差异蛋白,其高表达可能会促进NSCLC的发展、侵袭和转移,有望成为NSCLC不良预后的指标。 杨锋 夏靖华 孙盈 王雪娇 文苗苗 李小飞 张志培关键词:非小细胞肺癌 免疫组织化学 非小细胞肺癌EGFR基因突变与ERCC1、RRM1、TUBB3 mRNA表达相关性研究 被引量:3 2016年 目的:探讨非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)基因突变与切除修复交叉互补蛋白1(excision repair crosscomplementation 1,ERCC1)、核苷酸还原酶亚单位M1(ribonucleotide reductase subunit M1,RRM1)及3型β-微管蛋白基因(classⅢβ-tubulin,TUBB3)表达的关系。方法:回顾性分析我院经病理诊断的69例NSCLC患者的手术切除的肿瘤标本,利用扩增受阻突变系统(amplification refractory mutation system,ARMS)进行EGFR基因突变检测,应用实时荧光定量PCR检测ERCC1、RRM1及TUBB3mRNA的表达水平。结果:69例患者中,EGFR突变率为33.33%(23/69),在性别、吸烟史、病理类型组间突变率有显著性差异。ERCC1低、高表达率分别为59.42%(41/69)、40.58%(28/69),EGFR突变与ERCC1表达呈负相关性,EGFR无突变时ERCC1趋向于高表达(P=0.024);RRM1低、高表达率分别为31.88%(22/69)、68.12%(47/69),EGFR突变与RRM1表达无相关性(P>0.05);TUBB3低、高表达率分别为8.70%(6/69)、91.30%(63/69),EGFR突变与TUBB3表达无相关性(P>0.05)。ERCC1、RRM1、TUBB3三者间的基因表达均无相关性。结论:NSCLC患者肿瘤组织中EGFR突变患者ERCC1倾向低表达,这类患者可能更能从铂类化疗和靶向药物中受益。 文苗苗 邢昊 王雪娇 李维妙 王磊 孙盈 夏靖华 张志培 李小飞关键词:非小细胞肺癌 分子检测 Fn14在EGFR外显子19缺失突变的非小细胞肺癌中的表达及其临床意义 被引量:5 2015年 目的:探讨成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)在表皮生长因子受体(EGFR)外显子19缺失的非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其临床意义。方法:选择2010年9月至2013年11月第四军医大学唐都医院收治的125例原发性EGFR外显子19缺失的NSCLC组织及与之相对应的30例正常肺组织为研究对象,应用免疫组化法检测和比较其Fn14的表达,分析Fn14的表达与原发性EGFR外显子19缺失的的NSCLC临床病理特征的关系。结果:Fn14阳性表达主要定位于胞膜和胞质中。在125例原发性EGFR外显子19缺失的NSCLC组织中,Fn14的阳性表达率为100%,显著高于正常肺组织(P<0.001)。鳞癌和腺癌NSCLC组织中Fn14的阳性表达率比较无统计学差异(P=0.106);不同病理分化程度、不同TNM分期的NSCLC组织中Fn14的阳性表达率比较均具有显著性差异(P=0.000、P=0.000)。Fn14蛋白的表达与EGFR外显子19缺失的NSCLC的淋巴结转移状态、肿瘤大小以及肿瘤解剖学分类均显著相关(P=0.000、P=0.029、P=0.000、P=0.026),而与患者的性别、年龄、吸烟史均无关(P=0.816、P=0.122、P=0.816)。结论:Fn14在原发性EGFR外显子19缺失的NSCLC中呈异常高表达,EGFR外显子19缺失突变很可能通过上调Fn14通路,促进NSCLC的发生和发展。 孙盈 王雪娇 夏靖华 文苗苗 邢昊 庞赛楠 李小飞 张志培关键词:非小细胞肺癌 表皮生长因子受体 根皮素诱导小细胞肺癌H446细胞凋亡的机制研究 被引量:1 2017年 目的探讨根皮素对人小细胞肺癌H446细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法采用20、30、40μg/ml根皮素分别处理人小细胞肺癌H446细胞,并设不加药对照组。采用MTT法检测不同浓度根皮素对H446细胞作用24、48及72 h的细胞增殖率;采用流式细胞术检测不同浓度根皮素作用24 h的H446细胞凋亡数量;采用Western blotting检测不同浓度根皮素对细胞浆中细胞色素C含量的影响;采用实时定量PCR(QPCR)检测不同浓度根皮素作用于H446细胞24 h procaspase-3、Bax和Bcl-2基因的表达。结果 20、30、40μg/ml根皮素均能抑制H446细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性(P<0.05);流式细胞术检测显示,对照组细胞的凋亡比例为(4.23±0.25)%,经20、30、40μg/ml根皮素处理后细胞的凋亡比例分别增加到(12.97±0.21)%、(18.48±0.24)%、(33.61±0.27)%,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05);此外,根皮素剂量依赖性地增加细胞浆中细胞色素C的含量和pro-caspase-3 mRNA和Bax mRNA的表达,同时抑制Bcl-2 mRNA的表达(P<0.05)。结论根皮素能够抑制H446细胞的增殖,其机制可能为通过调节线粒体中细胞色素C的释放和凋亡相关分子的表达促进H446细胞的凋亡。 杨婷 赵凯涛 夏靖华 王雪娇 张志培 孙盈 李小飞关键词:小细胞肺癌 增殖 凋亡 EGFR 19缺失突变的非小细胞肺癌中Fn14表达与EGFR 19缺失的相关性及临床意义 被引量:6 2015年 [目的]探讨成纤维细胞生长因子诱导14(Fn14)与表皮生长因子受体(EGFR)外显子19缺失突变之间的关系。[方法]对125例EGFR外显子19缺失突变的非小细胞肺癌(NSCLC)患者,应用免疫组织化学法检测组织样本中EGFR 19缺失(EGFR 19-Del)和Fn14的表达,统计分析EGFR 19-Del与Fn14在不同临床病理特征中的表达差异以及两者之间的相关性。[结果]EGFR 19-Del阳性主要在细胞膜上表达,Fn14阳性表达主要定位于胞膜和胞质中。EGFR 19-Del的阳性表达率为99.2%,Fn14阳性表达率为100.0%。EGFR 19-Del、Fn14在鳞癌、腺癌组间的表达差异均无统计学意义(P=0.480;P=0.106);EGFR 19-Del、Fn14在总的NSCLC、腺癌的不同病理分级、TNM分期中差异显著(P均<0.05),而在鳞癌的不同病理分级、TNM分期中差异无统计学意义(P均>0.05)。Fn14与EGFR 19-Del在总的NSCLC、腺癌、鳞癌中的表达均呈正相关(P均<0.05,rs均>0.47);二者在中、低分化癌中呈正相关(P均<0.05,rs均>0.43),而在高分化癌中无相关性(rs<0.3);二者在Ⅱ、Ⅲ期中呈正相关。[结论 ]Fn14在NSCLC EGFR 19缺失突变样本中有很高的表达率,其表达与EGFR 19-Del有相关性,提示EGFR激活突变可能会影响Fn14的表达。 孙盈 李维妙 庞赛楠 文苗苗 王雪娇 夏靖华 杨光 张志培 李小飞肿瘤高表达细胞周期相关蛋白在非小细胞肺癌中的表达及临床意义 被引量:3 2015年 目的研究肿瘤高表达细胞周期相关蛋白(CREPT)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及相应癌旁组织中的表达,探讨其在肺癌中的作用及临床意义。方法收集271例NSCLC组织,采用免疫组织化学方法检测NSCLC组织以及癌旁组织中CREPT的表达。结果 CREPT在NSCLC组织中表达阳性率为96.1%,明显高于在癌旁组织的表达率(30.4%);CREPT表达与年龄、肿瘤大小无关,CREPT在低分化肿瘤组织表达增强;CREPT在总NSCLC样本的不同临床分期间表达有显著性差异;在总NSCLC、有淋巴结转移的腺癌组织中,CREPT表达明显增强;鳞癌CREPT的表达与淋巴结转移无明显关联。结论CREPT在NSCLC不同病理分级间表达存在差异,有淋巴结转移的腺癌组织CREPT表达增强。 李维妙 夏靖华 冯征 王雪娇 文苗苗 邢昊 程庆书 张志培关键词:非小细胞肺癌 免疫组织化学技术