孟凡峰
- 作品数：14 被引量：55H指数：4
- 供职机构：山东农业大学动物医学院更多>>
- 发文基金：公益性行业(农业)科研专项国家自然科学基金江苏省农业三新工程项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生更多>>
- 通过公鸡血液和精液禽白血病病毒分离净化禽白血病的研究被引量：2
- 2021年
- 在对种鸡群实施禽白血病净化过程中,检测并淘汰感染公鸡对推进净化极其重要,然而对于以血液病毒分离为准还是以精液病毒分离为准还缺乏准确的参考数据。为此,本研究对中国正在实施禽白血病净化的4个不同品系的种公鸡群同时采集血液和精液分别实施病毒分离,并对其中某蛋鸡场公鸡通过这两种方式分离的病毒进行了gp85基因扩增并分析其同源性与遗传进化关系。病毒分离结果显示,4个鸡群采用血液分离禽白血病病毒(ALV)的阳性率分别为15.51%(188/1212)、3.25%(13/400)、4%(4/100)和2.5%(5/200);采用精液分离ALV的阳性率分别为3.71%(45/1212)、2.75%(11/400)、2%(2/100)和1.5%(3/200);而两种病毒分离结果同时为阳性的公鸡分别有16只、8只、1只和2只。结果表明,血液病毒分离和精液病毒分离结果不完全一致,后者较前者ALV分离的阳性率总体要低。序列同源性分析结果显示,该蛋鸡场阳性公鸡经血液和精液两种方式分离ALV的gp85基因序列(分别为11与9条基因序列)的同源性高达99.0%-100%,所有分离株均与ALV-A亚群参考株同源性为88.6%-99.2%,而与其他各亚群参考株的同源性仅为50.0%-89.6%。遗传进化分析也表明分离株均属于A亚群,表明该蛋鸡场主要以ALV-A亚群感染为主。上述结果提示在禽白血病净化过程中,应对公鸡分别采用血液和精液两种病毒分离方法,任何一种病毒分离结果为阳性的公鸡均应被淘汰。本研究为完善现有禽白血病净化技术方案提供了数据支持,有助于加速种公鸡禽白血病的净化进程。
- 张亚文崔帅赵颖洁孟凡峰李阳王一新赵鹏常爽
- 关键词：禽白血病病毒公鸡精液血液
- ALV-J经卵黄囊接种对鸡的致病性与逆转录酶抑制剂类药物对鸡的保护作用
- 2016年
- 通常鸡群通过垂直传播感染ALV-J后的致病性比通过水平传播更为严重。本研究通过对SPF鸡胚卵黄囊接种模拟了ALV-J经垂直传播感染鸡群后的致病性,在此基础上通过联合使用逆转录酶抑制剂类药物Zidovudine(AZT)和Lamivudine(LAM)并观察其对减缓ALV-J垂直传播致病性方面的作用。结果显示未使用药物的病毒感染组其体重、死亡率以及免疫ND和AI-H9灭活疫苗所产生的抗体水平均显著低于使用药物的病毒感染组(P<0.05),更显著低于未接毒的生理盐水对照组(P<0.05)。研究表明AZT和LAM等逆转录酶抑制剂类药物的使用有助于降低ALV-J垂直传播感染对鸡群的危害。
- 赵颖洁张玉标孟凡峰吕艳艳崔治中常爽徐步范建华赵鹏
- 关键词：禽白血病病毒AZTLAM
- 利用核苷类逆转录酶抑制剂去除疫苗毒种中禽网状内皮组织增生症病毒污染
- 2017年
- 使用污染有禽网状内皮组织增生症病毒(REV)的弱毒疫苗被认为是REV流行的原因之一,去除疫苗毒种中REV污染是生产合格疫苗的基础环节,本研究试图利用核苷类逆转录酶抑制剂类药物Azidothymidine(LAM)和Lamivudine(AZT)去除疫苗毒种中REV污染。首先通过在培养液中添加不同质量浓度AZT或LAM连续传代以及利用CCK-8测定细胞活性的方法,证实了在培养液中添加不超过5mg/L的抑制剂类药物对于DF-1细胞复制和活性没有影响。体外试验证实,当在培养液中分别添加5mg/L的AZT或LAM以及两者联合应用时均可以显著抑制REV在DF-1细胞上的复制,通过在新城疫弱毒疫苗中人为添加REV模拟AZT或LAM以及两者联合应用对疫苗毒种中REV污染的净化作用,结果显示经药物干预4代后即将REV去除,并且净化后毒种检验合格。本研究证实了AZT或LAM在体外对REV的抑制作用,并在人工模拟试验中成功净化了疫苗毒种中污染的REV。
- 苏红芹李思菲任志浩栾怀彪孟凡峰李阳崔治中常爽赵鹏
- 关键词：禽网状内皮组织增生症病毒AZIDOTHYMIDINELAMIVUDINE弱毒疫苗
- 不同检测方法在禽白血病病毒测定中的应用及其灵敏度比较
- 为比较不同禽白血病病毒(ALV)抗原ELISA检测试剂盒和胶体金试纸条的灵敏度，我们将A、B、J三种不同ALV亚群分别以50 TCID50、 100 TCID50、 500 TCID50三种剂量接种培养于DF1细胞上，接...
- 孟凡峰崔贺范建华徐步时建蓬董宣常爽崔治中赵鹏
- 关键词：禽白血病病毒斑点杂交间接免疫荧光酶联免疫吸附试验TCID50
- 免疫抑制性病毒感染肉鸡群继发大肠杆菌的分离鉴定及多样性研究被引量：3
- 2014年
- 旨在了解免疫抑制性病毒感染肉鸡群后继发大肠杆菌的血清型及其耐药性的多样性。用J亚群禽白血病病毒与禽网状内皮增生症病毒感染或共感染1日龄商品代肉鸡,对两次重复试验中发生细菌感染而导致死亡的鸡进行麦康凯培养基分离培养。每个病变脏器各随机挑取5个红色菌落或(及)白色菌落,并分别进行生化试验、血清型鉴定和药敏试验。结果从58只呈现肝周炎或(和)心包炎的死亡鸡中分离到典型的红色菌落445个,白色菌落71个。经生化试验鉴定,516个菌落均为大肠杆菌。O抗原血清型鉴定结果表明,这些菌落分别属于12个不同的血清型。对12种常用抗生素的药敏试验(药敏片法和试管稀释法)结果表明,共感染能在较短时间内引起典型的大肠杆菌病,并引起较高的死亡率。从516个大肠杆菌中挑选的17组菌落(来自同一病鸡、同一脏器且经鉴定为同一血清型的5个菌落定义为一组菌落)的试管药敏试验的比较表明,第3组的5个菌落对黏杆菌素的最小抑菌质量浓度的范围为0.05~51.20 mg·mL-1;第17组菌落对丁胺卡那的最小抑菌质量浓度从0.05到51.20mg·mL-1,均相差1 000倍。同一群鸡肝周炎和心包炎的大肠杆菌分离株的高度多样性,证明这是在病毒感染诱发免疫抑制状态下发生条件性致病菌的继发性细菌感染。鸡群中大肠杆菌在耐药性上的多样性,是鸡群在不合理应用抗生素的条件下体内大肠杆菌迅速产生耐药菌株的遗传基础。
- 琚思迪董宣赵鹏李阳孟凡峰孙鹏董向磊高崧崔治中
- 关键词：免疫抑制性病毒肉鸡大肠杆菌血清型
- 种公鸡精液禽白血病病毒检测方法研究及初步应用被引量：9
- 2015年
- 研究旨在探讨种公鸡精液禽白血病病毒（ALV）检测的可行胜与实用性，为种禽场禽白血病净化材料的选择与方案制定提供参考依据。对绿壳蛋鸡种公鸡精液不同处理和检测方法效果，以及不同精液稀释度对病毒分离效果的影响进行了研究，并将确定的检测方法应用于绿壳蛋鸡、矮脚鸡和芦花鸡3个地方鸡种合计551只种公鸡的检测净化中，同时与血浆病毒分离或血浆斑点杂交检测结果进行比较。结果显示，以血浆病毒分离为标准，精液样品经稀释离心后，取上清接种DF-1细胞，确保在培养基中最终稀释度为1：28-1：56时病毒分离效果最佳。初步应用结果显示，不同鸡种精液p27抗原ELISA检测阳性率均最高，但并不能将血浆和精液病毒分离检测为阳性的鸡均检出，存在“假阴性”；同一鸡种血浆和精液病毒分离阳性率高低不同，在绿壳蛋鸡和矮脚鸡种公鸡中，二者阳性符合率均低于50％，两种方法不可互相取代；芦花种公鸡精液病毒分离阳性率显著高于血浆病毒分离，亦高于血浆斑点杂交，二者阳性符合率分别为100％-36．4％，精液病毒分离效果优于血浆病毒分离。结果表明，对种公鸡精液进行ALV检测具有可行性和必要性，由于不同鸡种净化进程不同、带毒排毒状态不一，检测方法也应灵活运用。
- 俞燕徐步范建华高明燕张笛沈海玉孔祥伟孟凡峰韦玉勇龚建森戴有理孙淑红崔治中
- 关键词：禽白血病精液病毒分离P27抗原
- 种蛋中内源性禽白血病病毒的检测和鉴定被引量：19
- 2014年
- 某祖代种鸡群临床表现正常,在开产后用商品化禽白血病抗体检测试剂盒(ALV-Ab)和禽白血病抗原检测试剂盒检测发现血清抗体阳性率及蛋清抗原阳性率均显著高于正常水平,但对种蛋中抗原阳性的23只种鸡分别接种DF1细胞和SPF鸡胚来源的成纤维细胞(CEF)后均未分离到病毒。为探明该鸡群是否存在内源性禽白血病病毒(ALV—E)以及能否干扰商品化抗体检测试剂盒的结果判定,将23只种鸡所产种蛋分别孵化后逐一制备成CEF培养,盲传3代后检测到其中1只鸡的细胞培养上清抗原检测为阳性。从该细胞培养上清液提取RNA,RTPCR扩增其gp85基因,序列分析证明该检出病毒为E亚群ALV。将该E亚群ALV接种SPF鸡胚来源CEF后又可检出p27抗原,显示该内源性ALV具备传染性。同时,对该病毒gp85基因进行了原核表达,表达产物免疫鸡后部分鸡血清经ALV—Ab抗体检测试剂盒检测为阳性。本研究分离到1株对CEF具备传染性的内源性ALV-E,并证明其诱导产生的抗体能够干扰对外源性ALV的鉴别诊断,提示在进行临床类似情况的判定时要结合鸡群实际表现做全面分析。
- 徐海鹏孟凡峰董宣赵鹏崔治中
- 关键词：GP85基因P27抗原
- PCR结合核酸斑点杂交检测猪伪狂犬病毒被引量：2
- 2019年
- 本研究基于猪伪狂犬病毒(Porcine pseudorabies virus,PRV)gE基因,建立了一种PCR结合核酸斑点杂交检测方法来鉴别野毒株和疫苗株,并利用这一方法对山东省部分地区的猪临床病料中PRV进行了检测。结果显示,建立的PCR结合核酸斑点杂交检测方法只与PRV野毒株反应,而与PRV gE基因缺失疫苗、猪瘟病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒以及猪圆环病毒2型不反应。PCR结合核酸斑点杂交方法在53份病料中检出PRV阳性病料5份,阳性率为9.43%,高于单纯PCR的检出率(7.55%)。结果表明,本研究建立的PCR结合斑点杂交的方法特异性强,灵敏度高,适合PRV野毒的检测以及流行病学调查,可应用于PRV的鉴别诊断和净化。
- 乌那尔汗.吉斯汗任衍倍孟凡峰田似报符玉涓张继红李舵美热木古丽任娟林汉亮崔治中常爽常爽
- 关键词：猪伪狂犬病毒核酸斑点杂交GE基因
- 新疆地区猪圆环病毒2型分子流行病学调查被引量：3
- 2018年
- 为了解目前新疆维吾尔自治区猪圆环病毒2型(PCV2)的分子流行病学特征,应用PCR方法对新疆14个地区猪场送检的共430份病料进行PCV2的检测,并对阳性样品的基因组进行了扩增和克隆测序,分析研究PCV2遗传变异情况。结果显示,430份样品中,有21份样品为PCV2阳性,阳性率为4.88%。经序列比较和遗传进化分析对21株PCV2进行了基因型鉴定,其中2份样品为PCV2a(9.52%),3份样品为PCV2b(14.29%),15份样品为PCV2d(71.43%),1份样品为PCV2e(4.76%)。与其他基因型相比,新疆地区PCV2优势基因型PCV2dORF2的特异性氨基酸位点主要集中在第53I、89L、90T、121T。结果表明,目前新疆地区的PCV2以PCV2d基因型为主,同时也伴有其他类型,本研究为更好地掌握新疆地区PCV2的流行情况、基因组特性进而提出针对性防控措施提供参考数据。
- 任衍倍乌那尔汗孟凡峰董桂伟张玉标王文马晓艳居马别克盛卓君常爽赵鹏
- 关键词：猪圆环病毒2型分子流行病学ORF2进化分析
- 不同分子生物学方法检测鸡传染性贫血病病毒的比较分析被引量：4
- 2018年
- 为了解不同鸡群传染性贫血病病毒(CIAV)感染情况及禽用弱毒疫苗中CIAV的污染情况,利用常规PCR、nested-PCR、PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR等不同核酸检测方法对近两年企业送检的11批次525份临床病料以及13批次125份疫苗样品进行了检测。结果显示:Nested-PCR灵敏度最高,从送检的病料样品中检测出CIAV阳性率为11.2%(59/525),疫苗样品中检测出CIAV阳性率为4.8%(6/125),PCR结合核酸斑点杂交和实时荧光定量PCR与Nested-PCR检出率基本一致,但常规PCR检出率明显低于其他三种。
- 张玉标李晓晗孟凡峰董桂伟任衍倍崔治中常爽赵鹏
- 关键词：CIAVPCRNESTED-PCR
