刘茜
- 作品数：10 被引量：45H指数：4
- 供职机构：江苏省血吸虫病防治研究所更多>>
- 发文基金：江苏省自然科学基金国家自然科学基金国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 重组刚地弓形虫微线料体蛋白MIC10的制备与特性分析被引量：2
- 2018年
- 目的制备重组刚地弓形虫微线体蛋白10(MIC10),并对其免疫学特性进行分析。方法利用逆转录PCR(RT-PCR)技术从弓形虫总RNA中反转录制备第一链cDNA,再利用特异性引物从cDNA中扩增出编码MIC10的基因片段,构建重组表达质粒pET28a-MIC10,转化入大肠埃希菌BL21(DE3)后用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达,通过镍螯合亲和层析法纯化重组MIC10蛋白。用纯化的重组蛋白免疫家兔,制备抗MIC10多克隆抗体,采用Western blot分析重组MIC10蛋白的免疫学特性。结果采用RT-PCR法从弓形虫cDNA中反转录扩增到长度约为416bp的特异性DNA,基因序列分析证实为编码MIC10的基因片段;制备的重组表达质粒pET28a-MIC10转化大肠埃希菌BL21(DE3)后经IPTG诱导,能表达重组MIC10蛋白;用纯化的重组MIC10蛋白免疫家兔,血清抗体效价达到1∶200 000以上。Western blot分析显示该抗体能识别弓形虫排泄分泌抗原中的天然MIC10分子而不识别弓形虫成虫抗原,证明MIC10为外分泌蛋白。结论制备了具有天然免疫原性的重组弓形虫MIC10蛋白,并证明该蛋白为外分泌蛋白。
- 周伟宋丽君沈双殷旭仁许永良刘茜余传信
- 关键词：刚地弓形虫免疫原性免疫诊断
- 烯醇化酶作为日本血吸虫现症感染指征的诊断价值
- 目的：寻找日本血吸虫高丰度的循环抗原,建立检测循环抗原烯醇化酶(Sj Enolase)的双抗体夹心ELISA,评估其于血吸虫现症感染的诊断与疗效考核价值。方法：采用二维电泳和飞行质谱分析鉴定血吸虫成虫排泄分泌抗原中高丰度...
- 余传信高玒宋丽君沈双殷旭仁刘茜
- 关键词：日本血吸虫循环抗原烯醇化酶现症感染疗效考核
- 日本血吸虫皮肤期童虫排泄分泌抗原的诊断价值
- 2016年
- 目的探讨日本血吸虫童虫排泄分泌抗原对血吸虫感染的诊断价值。方法收集日本血吸虫尾蚴,机械转化制备皮肤期童虫。收集童虫培养上清液,制备童虫排泄分泌抗原。用不同数量的尾蚴感染小鼠,收集不同感染度、感染时间的小鼠血清,采用基于血吸虫童虫排泄分泌抗原的酶联免疫吸附法检测抗童虫排泄分泌抗原抗体IgG水平的动态变化,观察其早期诊断价值。以同样方法检测健康人血清,血吸虫病患者及其他寄生虫病患者血清,观察该方法的临床诊断价值。结果小鼠感染血吸虫后1周血清中抗童虫排泄分泌抗原IgG即开始出现,并随着感染时间的延长抗体水平不断上升,5、10、15和20条尾蚴感染组小鼠在感染后1周抗体阳性率分别为40%、40%、80%和20%。用童虫排泄分泌抗原ELISA检测血吸虫病患者、健康人和其他寄生虫病患者血清均阳性。结论以日本血吸虫皮肤期童虫排泄分泌抗原ELISA检测相应IgG抗体对血吸虫初次感染小鼠具有早期诊断价值,可用于对血吸虫感染风险环境监测预警哨鼠的检测,但该方法尚不能用于人感染血吸虫的实验诊断。
- 刘茜宋丽君张秋明殷旭仁沈双周伟许永良余传信
- 关键词：童虫哨鼠
- 环介导同温DNA扩增法(LAMP)与解剖-显微镜检法检测血吸虫感染性钉螺效果的比较被引量：25
- 2014年
- 目的探讨环介导同温DNA扩增法（LAMP）与解剖-显微镜检法对血吸虫感染不同阶段钉螺检出率的差异。方法用日本血吸虫毛蚴感染钉螺,于25℃培养箱中培养。分别于感染后1、2、3、4、5、6、7、8、9、10周收集10只实验钉螺,解剖后在解剖镜下检查血吸虫感染情况。取解剖的钉螺软体抽提基因组DNA,采用LAMP法进行检测。在感染后10周,取100只实验钉螺,同时用解剖-显微镜检法和LAMP法进行检测。收集吸虫病流行区现场钉螺,采用两种方法同时进行检测,统计血吸虫感染性钉螺阳性率。结果解剖-显微镜检法和LAMP法检测感染1-10周的10批钉螺血吸虫感染率分别为0.00%、0.00%、0.00%、10.00%、0.00、10.00%、20.00%、20.00%、60.00%、60.00%和50.00%、20.00%、30.00%、20.00%、20.00%、40.00%、30.00%、40.00%、80.00%、70.00%,总阳性率分别为18.00%和40.00%,差异有统计学意义（χ^2=11.75,P〈0.01）。两种方法检测感染后7周的100只钉螺阳性率分别31.00%和39.00%,检测来源于两个不同省份血吸虫病流行区钉螺,阳性率分别为29.80%和19.47%。结论环介导同温DNA扩增法能有效地检出感染不同阶段的感染性钉螺,检测结果能更准地反映流行区钉螺的血吸虫感染状态。
- 熊春蓉殷旭仁宋丽君沈双王玠高玒刘茜余传信杨坤
- 关键词：感染性钉螺阳性率
- 日本血吸虫烯醇化酶的表达与诊断价值研究被引量：4
- 2016年
- 目的制备可溶性表达的日本血吸虫烯醇化酶,观察其免疫学特性及免疫诊断价值。方法采作RT-PCR方法反转录合成编码日本血吸虫烯醇化酶的cDNA片段,亚克隆到表达质粒pET28a(+)中构建重组表达质粒。将重组表达质粒转化到大肠埃希菌BL21中,在不同条件下诱导表达可溶性重组烯醇化酶(rSj Enolase),采用镍亲和层析法纯化rSj Enolase。以rSj Enolase免疫小鼠,制备抗血清,采用Western blot法分析rSj Enolase的免疫反应性与特异性。以rSj Enolase为抗原,建立检测抗Sj Enolase抗体IgG的ELISA方法,并以此方法对血吸虫病患者、其他寄生虫病患者及健康人血清进行检测,观察检测抗Sj Enolase抗体IgG用于血吸虫病诊断的敏感性与特异性;对治疗前及治疗后不同时间点的同一患者配对血清进行检测,观察治疗前、后患者血清中抗Sj Enolase抗体IgG水平的动态变化,并观察该方法的疗效考核价值。结果成功克隆编码Sj Enolase基因,并在18℃低温条件下成功表达可溶性rSj Enolase蛋白,采用镍亲和层析进行纯化rSj Enolase蛋白免疫小鼠获得效价大于1︰100 000的抗血清。Western blot显示rSj Enolase蛋白可被血吸虫病患者血清识别,而不与健康人血清反应;抗rSj Enolase鼠血清能识别血吸虫成虫抗原(AWA)和排泄分泌物(ESA)中的天然Sj Enolase分子。rSj Enolase不被曼氏裂头蚴病患者血清,华支睾吸虫病患者及卫氏并殖吸虫病患者血清识别,ELISA显示以rSj Enolase为抗原检测血吸虫感染者血清中的抗Sj Enolase特异性抗体的敏感性为93.71%,特异性为97.92%,与华支睾吸虫患者血清的交叉反应率为8.5%,与弓形虫病患者血清的交叉反应率为0。治疗后3个月的血吸虫病患者血清抗Sj Enolase抗体IgG水平迅速下降,阴转率达58.92%。结论可溶性重组Sj Enolase表达成功。该蛋白具有较高的抗原特异性,以此为抗原检测抗Sj Enolase抗体IgG具有血吸虫病诊断价值。
- 殷旭仁高玒张秋明余传信张伟宋丽君沈双刘茜周伟
- 关键词：烯醇化酶
- 日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶免疫功能的研究
- 2015年
- 目的研究日本血吸虫硫氧还蛋白谷胱甘肽还原酶(Thioredoxin Glutathione Reductase of Schistosoma japonicum,SjTGR)的免疫原性及抗日本血吸虫感染的免疫保护性作用。方法 75只小鼠随机分为5组:空白组、PBS组、CpG2免疫组、TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组,免疫3次。首次免疫前及第3次免疫后2周经尾静脉采血,采用酶联免疫法分别检测血清中抗SjTGR蛋白IgG、IgG1和IgG2a的抗体水平。第3次免疫后2周,每只小鼠经腹部感染日本血吸虫尾蚴40±2条,42 d后剖杀,收集成虫和虫卵,计算减虫率和减卵率;制备各组小鼠单个脾淋巴细胞,采用流式细胞术检测脾细胞表面标志物CD44high、CD4+CD44high或CD8+CD44high水平;用SjTGR刺激免疫小鼠脾细胞72 h,采用酶联免疫法检测脾细胞的IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的水平。结果第3次免疫后2周TGR与CpG2+TGR免疫组小鼠血清抗SjTGR抗体的IgG滴度均达1:200 000以上,IgG2a与IgG1的比值(IgG2a/IgG1)随时间的延长缓慢增高。TGR免疫组和TGR+CpG2联合免疫组细胞上清中的IFN-γ和IL-2水平与空白组、PBS组、CpG2免疫组相比明显增高(P<0.05)。TGR免疫组与TGR+CpG2免疫组小鼠脾细胞的CD44high、CD8+CD44high及CD4+CD44high与空白组和PBS组相比细胞比值增加(P<0.05)。TGR免疫组和CpG2+TGR免疫组的减虫率分别为9.4%,10.5%,减卵率分别为9.2%和32.8%。结论 SjTGR具有较强的免疫原性,可诱导小鼠免疫反应向Th1型极化,但不足以产生抗日本血吸虫感染的保护效应。CpG2 ODN可能是一种有效的Th1型免疫佐剂。
- 宋丽君余传信殷旭仁沈双高玒张伟金一姚媛刘茜王玠柯雪丹许永良杨静
- 关键词：日本血吸虫免疫原性免疫保护
- 抗三磷酸甘油醛脱氢酶抗体IgG检测诊断日本血吸虫病的研究被引量：3
- 2015年
- 目的探讨检测抗日本血吸虫三磷酸甘油酸脱氢酶(Sj GAPDH)抗体IgG诊断血吸虫病的价值。方法收集血吸虫现症感染患者治疗前、后不同时间点的血清及其他寄生虫病患者血清。以纯化的重组Sj GAPDH蛋白为抗原建立检测抗Sj GAPDH抗体IgG的常规酶联免疫吸附试验方法(Sj GAPDH ELISA)及生物素-亲和素信号放大酶联免疫吸附试验方法(Sj GAPDH BA ELISA),同时对收集的血清标本进行抗Sj GAPDH抗体IgG检测,并与检测抗SEA抗体IgG的SEA ELISA结果作比较,评价检测抗Sj GAPDH抗体IgG用于血吸虫病诊断与疗效考核的价值。结果 Sj GAPDH ELISA和Sj GAPDH BA ELISA检测79份现症感染血吸虫患者血清抗Sj GAPDH抗体IgG的敏感性分别为54.43%和91.14%,差异有统计学意义(P<0.05%);特异性分别为93.85%和92.31%,差异无统计学意义(P>0.05%)。Sj GAPDH ELISA检测患者在治疗后6个月血清特异性抗体阴转率为44.19%,治疗后12个月阴转率达53.49%。Sj GAPDH BA ELISA检测患者治疗后6个月血清特异性抗体阴转率为5.55%,治疗后12个月阴转率为9.72%。患者血清中抗SEA抗体IgG治疗后6和12个月均阳性。结论 Sj GAPDH蛋白在患者体内诱导短寿抗体反应,检测患者血清中的抗Sj GAPDH特异性抗体IgG水平及其在治疗前、后的变化具有一定的诊断与疗效考核价值。
- 王玠刘茜张秋明余传信宋丽君沈双殷旭仁高玒何伟曹国群华万全钟春蕾
- 关键词：血吸虫疗效考核
- 检测华支睾吸虫特异性IgG4生物素-亲和素复合酶联免疫吸附法的建立及检测效能分析被引量：4
- 2015年
- 目的探讨亲和素-生物素复合酶联免疫吸附法(ABC-ELISA)检测特异性Ig G4抗体用于诊断华支睾吸虫病的效果。方法建立检测华支睾吸虫特异性抗体Ig G4的ABC-ELISA法(Ig G4-ABC-ELISA),以此方法检测华支睾吸虫病、日本血吸虫病、卫氏并殖吸虫病、弓形虫病、棘球蚴病、囊尾蚴病和曼氏裂头蚴病患者血清样本。以Ig G4-ELISA和Ig GELISA法为对照,比较3种方法用于诊断华支睾吸虫病的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值及诊断效率。结果成功建立了用于检测华支睾吸虫特异性抗体的Ig G4-ABC-ELISA法,用此方法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G4的敏感性为90.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.8%,阴性预测值为97.0%,诊断效率为96.3%;Ig G4-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体敏感性为86.0%,特异性为98.2%,阳性预测值为93.5%,阴性预测值为95.9%,诊断效率为95.4%;Ig G-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体Ig G的敏感性为94.0%,特异性为88.1%,阳性预测值为70.1%,阴性预测值为98.0%,诊断效率为89.4%。Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫病患者血清特异性抗体的敏感性高于Ig G4-ELISA法(P<0.05),特异性高于Ig G-ELISA法(P<0.05)。结论 Ig G4-ABC-ELISA法检测华支睾吸虫特异性抗体IgG4具有高度敏感性与特异性,在华支睾吸虫病诊断中具有较好应用价值。
- 王玠宋丽君余传信沈双许永良殷旭仁柯雪丹高玒刘茜
- 关键词：华支睾吸虫亲和素-生物素酶联免疫吸附法IGG4
- 烯醇化酶作为日本血吸虫现症感染指征的诊断价值
- 目的 :寻找日本血吸虫高丰度的循环抗原,建立检测循环抗原烯醇化酶(Sj Enolase)的双抗体夹心ELISA,评估其于血吸虫现症感染的诊断与疗效考核价值。方法 :采用二维电泳和飞行质谱分析鉴定血吸虫成虫排泄分泌抗原中高...
- 余传信高玒宋丽君沈双殷旭仁刘茜
- 关键词：日本血吸虫循环抗原烯醇化酶现症感染疗效考核
- 文献传递
- 血吸虫现症感染诊断方法的研究进展被引量：9
- 2016年
- 血吸虫病是严重危害人类健康、阻碍流行区社会经济发展的一种重要人兽共患寄生虫病。准确诊断现症感染对于减轻血吸虫感染对人体健康的危害、控制血吸虫病流行具有重要意义。本文对血吸虫现症感染的实验室诊断方法(包括病原学、免疫学及分子生物学技术)的研究进展及应用进行综述,以期为血吸虫病现场防治工作提供借鉴。
- 刘茜余传信
- 关键词：血吸虫病现症感染
