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杨云
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1
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供职机构:
厦门大学医学院抗癌研究中心
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发文基金:
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
罗芳洪
厦门大学医学院抗癌研究中心
史涛
中国人民解放军第174医院
王生育
厦门大学医学院抗癌研究中心
李哲
厦门大学医学院抗癌研究中心
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中国人民解放军第174医院
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抗人NRP-1单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞株的促凋亡作用
2014年
目的:研究抗人神经菌毛素1(neuropilin1,NRP-1)单克隆抗体对结肠癌LOVO细胞的促凋亡作用。方法:小鼠腹水法制备抗NRP-1单克隆抗体(NRP-1 MAb)并用rProtein A亲和柱纯化,间接ELISA检测抗体的滴度水平。细胞免疫荧光检测NRP-1蛋白在结肠癌细胞株LOVO上的表达,MTT法检测NRP-1 MAb对LOVO的生长抑制作用,DAPI荧光显微镜法观察细胞凋亡形态,ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测NRP-1 MAb诱导LOVO细胞凋亡,Western blotting检测凋亡相关蛋白caspase-3、cleaved caspase-3蛋白的表达。结果:SDS-PAGE和间接ELISA检测纯化的NRP-1 MAb纯度为95%、效价为2.56×10-5;细胞免疫荧光染色显示NRP-1定位于LOVO细胞膜;MTT法检测和ANNEXIN V-FITC/PI流式细胞仪法检测结果显示,NRP-1 MAb对LOVO细胞有生长抑制作用和促凋亡作用;DAPI染色·荧光显微镜观察发现,NRP-1MAb可以诱导LOVO细胞核浓缩与碎裂;Western blotting检测到在NRP-1 MAb作用下,LOVO细胞裂解液cleaved caspase-3条带信号增强、caspase-3条带信号减弱。结论:纯化的NRP1 MAb能抑制LOVO细胞的生长并诱导其凋亡。
曹畅
吕莎
李哲
王显江
杨云
罗芳洪
王生育
颜江华
史涛
关键词:
单克隆抗体
LOVO细胞株
促凋亡作用
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