郑海英
- 作品数：4 被引量：11H指数：2
- 供职机构：福建师范大学更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 内切中性纤维素酶EGⅡ的发酵条件优化被引量：2
- 2012年
- 对毕赤酵母基因工程菌EIM-50-eg2产内切中性纤维素酶的主要影响因子进行研究,考察氮源、pH、温度、微量元素PTM1和甲醇浓度等对工程菌产酶的影响。单因素实验和正交实验结果表明,优化后的培养基组成及培养条件:磷酸氢二铵40 g/L,甲醇15 mL/L,硫酸镁10 g/L,磷酸二氢钾9 g/L,初始pH 6.0,培养温度28℃,PTM1添加量0.02%,甲醇诱导浓度1.5%。优化后内切葡聚糖酶活力可达4 158 U/(mL.min)是优化前1 449 U/(mL.min)的2.86倍。
- 郑海英蔡少丽黄平杨威黄杨杨鹤张爱平刘小琳黄建忠
- 关键词：毕赤酵母
- 碱性果胶酶基因在毕赤酵母中的非诱导表达
- 2012年
- 为了使碱性果胶酶基因能在毕赤酵母中获得非诱导表达,利用聚合酶链式反应(PCR)技术,以实验室保藏菌株毕赤酵母EIM-60基因组为模板,设计引物扩增出编码碱性果胶酯裂解酶的基因PGL,大小约为1 206 bp。酶切后连接到毕赤酵母组成型表达载体pGAPZαA的多克隆位点上,成功构建了重组载体pGAPZαA-PGL,将其电转化入毕赤酵母GS115进行异源表达。SDS-PAGE银染结果表明,该重组质粒在毕赤酵母中获得了异源表达,分子量为44.3 ku。通过考马斯亮蓝法蛋白浓度试剂盒测定其蛋白含量为0.430 g/L,通过BandScan软件分析目的蛋白占总蛋白的41.4%,即0.178 g/L。
- 张爱平蔡少丽杨鹤郑海英柯崇榕黄建忠
- 关键词：碱性果胶酶毕赤酵母异源表达
- 中性纤维素酶外切葡聚糖酶CBHⅡ的异源表达被引量：2
- 2011年
- 利用聚合酶链式反应(PCR)技术,从本实验室保存的1株特异腐质霉EIM-50上克隆到中性纤维素酶外切葡聚糖酶基因(CBHⅡ)全长序列,大小约为1 586 bp。将其克隆到pPIC9K上,成功构建重组质粒pPIC9K-CBHⅡ,并经电转化引入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115,进行异源表达。SDS-PAGE银染结果表明,该重组质粒在毕赤酵母中获得了异源表达。gel pro Analyser软件分析其表达蛋白的表观分子量约为62.548ku。用BandScan软件分析其蛋白表达量为2.3%,即0.738μg/mL(mg/L)。
- 林国滟蔡少丽黄平郑海英柯崇榕杨章萍蔡水淋林艺平黄建忠
- 关键词：特异腐质霉毕赤酵母异源表达
- 特异腐质霉内切葡聚糖酶Ⅱ基因在毕赤酵母中的表达及酶学性质被引量：7
- 2012年
- 【目的】在毕赤酵母中表达特异腐质霉Humicola insolens的中性内切葡聚糖酶Ⅱ,并对其性质加以研究。【方法】利用RT-PCR的方法,以特异腐质霉(Humicola insolens)NC3总RNA为模板,克隆到中性内切葡聚糖酶Ⅱ基因(egⅡ)的cDNA。将其插入表达载体pPIC9K,重组质粒经线性化后电击转化毕赤酵母(Pichia pastoris)菌株GS115。【结果】SDS-PAGE和酶活的检测结果均表明:egⅡ基因在毕赤酵母中成功表达。重组酶的部分酶学性质研究表明,该酶的最适反应温度为70°C,且在65°C以下具有较好的热稳定性。最适反应pH为6.5,在pH 6.0?7.0之间有较好的稳定性。【结论】用重组毕赤酵母可高效表达外源中性内切葡聚糖酶,为其今后在工业应用奠定了基础。
- 郑海英黄平蔡少丽柯崇榕林国滟黄建忠
- 关键词：特异腐质霉毕赤酵母
