赵敏
- 作品数：12 被引量：37H指数：4
- 供职机构：北京生物制品研究所更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划“八五”国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划更多>>
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- 蔗糖垫超速离心法提纯乙型脑炎疫苗被引量：4
- 1995年
- 经Vero细胞培养的P3株乙脑灭活病毒，以超滤浓缩和硫酸色精蛋白处理后，40％蔗糖垫层在27500r／min离心6小时，收集沉淀制成提纯乙脑疫苗。其蛋白含量在0．012～0.035mg／ml，稀释8倍后其疫苗效价仍能超过日本提纯鼠脑乙脑疫苗参考标准和我国乙脑疫苗参考标准。Vero细胞残余DNA＜100pg／0．5ml，残余牛血清＜1μg／ml。
- 丁志芬陈景才石慧颖常振彦李荆赵敏庞成华杨抗抗
- 关键词：乙型脑炎疫苗提纯超速离心
- SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果观察被引量：5
- 2004年
- 观察SARS灭活疫苗对猴体的免疫原性及保护效果 ,为进一步的临床研究奠定基础 .将BJ0 1株SARS病毒感染的Vero细胞的培养液过滤澄清 ,经 β 丙内酯灭活和超滤浓缩 ,然后经凝胶过滤和离子交换层析获得纯化的SARS灭活疫苗 .经HPLC分析其纯度为 97.6 % ,在电子显微镜下可观察到SARS病毒样颗粒 .蛋白质印迹 (westernblotting)分析表明 ,纯化SARS灭活疫苗可与SARS患者恢复期血清起反应 .纯化的SARS灭活疫苗符合有关的质量标准 .用SARS灭活疫苗免疫猴体可产生高效价的中和抗体 ,可阻止SARS病毒在猴体内增殖 ,且对SARS病毒攻击具有保护作用 .在低中和抗体情况下 ,用SARS病毒攻击免疫猴后没有出现感染增强现象 .猴体免疫SARS灭活疫苗后 ,无论正常剂量还是大剂量疫苗免疫 ,均未发现局部和全身副反应 。
- 秦鄂德石慧颖唐琳王翠娥常国辉丁志芬赵铠汪建于曼司炳银刘建源陈则吴东来彭文明孟庆文刘伯华韩伟国尹训南段鸿元杨保安战大伟田龙程晓洁吴劲松谭刚李懿李豫川李双利刘永刚刘洪
- 关键词：猴体SARS病毒灭活疫苗免疫原性中和抗体疫苗免疫
- 乙型脑炎灭活疫苗Vero细胞适应毒种的研究被引量：2
- 1997年
- 将乙脑P3株鼠脑毒种在Vero细胞中适应性传代，当传至10代时，毒种的CPE和感染性虽无明显变化，但其免疫原性却明显减弱，因此，用在Vero细胞中传递1至2代的几株建立毒种库（P3V1和P3V2），其涵度分别为7．71和78210gpfu／ml。在毒种中加入以山梨醇为主要成分的稳定剂后，4～S℃保存30天，－30℃1年，－60℃2年，滴度降低约0．51ogpfu／ml，在生产中使用效果良好。
- 庞成华杨抗抗常振彦赵敏丁志芬
- 关键词：乙型脑炎灭活疫苗
- Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗及其制备方法
- 本发明涉及一种Vero细胞乙型脑炎灭活疫苗及其制备方法,该疫苗是在Vero细胞上接种Vero细胞乙脑病毒毒种得到的纯化乙脑灭活疫苗,制备方法包括Vero细胞的培养扩增、在Vero细胞上接种Vero细胞乙脑病毒毒种、收获病...
- 丁志芬石慧颖庞成华常振彦杨春婷赵敏杨抗抗李荆顾佩伟
- 文献传递
- Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性
- 2009年
- 目的探讨Sabin株脊髓灰质炎病毒在Vero细胞上的传代稳定性。方法用Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型分别以0.01、0.1和1MOI接种Vero细胞,进行传代培养,共传13代。采用微量细胞病变法测定病毒滴度;双抗体夹心法测定D抗原含量;免疫Wister大鼠,采用微量中和试验测定病毒的免疫原性。结果Sabin株脊髓灰质炎病毒Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型在Vero细胞上连续传13代,病毒滴度基本稳定;D抗原含量呈下降趋势;免疫原性下降迅速。结论用Sabin株脊髓灰质炎病毒制备灭活疫苗,在Vero细胞上传代的代次越低越好。
- 李懿宁海京张冲支惠陈明宋冬梅马淑花赵敏王红燕石慧颖沈心亮
- 关键词：脊髓灰质炎病毒VERO细胞传代稳定性
- 肠病毒71型空斑检测方法的建立被引量：4
- 2009年
- 目的建立肠病毒71型(EV71)空斑检测方法,为EV71生物学特性及疫苗的研究提供手段。方法将不同稀释度的5株EV71分别接种至单层RD细胞和Vero细胞,加入甲基纤维素覆盖,计数空斑,并计算病毒滴度。通过3次连续检测,验证空斑法的精密性,并对空斑法与微量细胞病变法检测病毒滴度的结果进行比较。结果采用RD细胞和Vero细胞,通过空斑法对EV71病毒滴度进行检测,96h后均能规律地出现边缘整齐、清晰的空斑,RD细胞和Vero细胞检测的空斑直径分别为1～2mm和0.5～1mm。连续3次重复试验结果显示,试验间变异系数的平均值Vero细胞为2.52%,RD细胞为4.49%。空斑法与微量细胞病变法比较,其检测结果具有良好的线性相关性,相关系数为r=0.972,P=0.006。结论已建立了精密性好、出斑规律的EV71病毒空斑检测方法。
- 郝春生赵敏张晨何薇薇王潇潇杨永娟张中洋沈心亮李秀玲
- 关键词：肠病毒71型
- 大规模区带离心纯化Vero细胞乙脑疫苗被引量：7
- 1998年
- 本文报道一种适合疫苗生产的大规模纯化Ｖｅｒｏ细胞乙脑疫苗的方法。原疫苗经适当浓缩和去除ＤＮＡ处理后，用不连续蔗糖梯度（３６％和６０％）。３２６００ｇ，速率区带离心４ｈ。纯化后疫苗的效力比中国参考疫苗高出６倍以上，补体结合抗原比中国参考疫苗高４～８倍。总蛋白含量低于３０μｇ／ｍＬ，牛血清含量降至０．５μｇ／ｍＬ以下，细胞残余ＤＮＡ低于１００ｐｇ／０．５ｍＬ。用此法连续制备三批纯化疫苗，其纯度和效力均高于日本鼠脑纯化疫苗。此法对于制备其它纯化Ｖｅｒｏ细胞疫苗也具有一定的参考意义。
- 石慧颖丁志芬赵敏庞成华杨抗抗李荆
- 关键词：乙脑疫苗VERO细胞
- 转瓶培养非洲绿猴肾传代细胞生产纯化流行性乙型脑炎疫苗的研究被引量：9
- 1998年
- 目的研究用１５Ｌ转瓶培养非洲绿猴肾传代细胞（Ｖｅｒｏ细胞）生产纯化流行性乙型脑炎（以下简称乙脑）疫苗的工艺，提高乙脑疫苗的质量。方法用１５Ｌ转瓶培养Ｖｅｒｏ细胞和扩增乙脑病毒，病毒经过灭活、浓缩、硫酸鱼精蛋白处理、蔗糖密度梯度区带离心纯化，制备成冻干疫苗。结果建立了一套１５Ｌ转瓶培养Ｖｅｒｏ细胞生产纯化乙脑疫苗的工艺，用此工艺制备三批冻干疫苗，经检定疫苗质量达到同类产品的国际水平，已通过新药审评，人体安全性和效果观察正在进行中。结论转瓶培养Ｖｅｒｏ细胞生产纯化乙脑疫苗是可行的。
- 丁志芬石慧颖庞成华常振彦赵敏李荆杨抗抗刘培生
- 关键词：流行性乙型脑炎疫苗纯化VERO细胞
- 应用柱层析法纯化Vero细胞乙型脑炎疫苗被引量：8
- 1997年
- 浓缩Vero细胞乙脑疫苗经SepharoseCL－6B柱层析可去除大部分杂蛋白，再经SphacrylS－500HR层析可进一步去除比病毒大的杂质及残余小分子量杂蛋白。经两步凝胶过滤层析纯化后，疫苗总蛋白含量减少约99％，抗原比活性提高87～165倍，抗原回收率达30％～50％，残余牛血清和残余细胞DNA均符合WHO有关规程要求，提纯疫苗的效力达到或超过中国地鼠肾灭活乙脑疫苗和日本提纯鼠脑拔苗的参考苗。
- 杨春亭丁志芬石慧颖赵敏
- 关键词：柱层析乙型脑炎疫苗VERO细胞纯化
- 肠病毒71型分离株的鉴定及免疫原性研究被引量：1
- 2009年
- 目的在对肠病毒71型（enterovirus 71，EV71）分离株进行鉴定的基础上，对其诱导小鼠产生的免疫应答水平进行研究，拟为进一步的EV71候选疫苗研究奠定基础。方法超速离心纯化病毒后，采用磷钨酸负染法通过电镜观察病毒形态、大小；采用特异性EV71单抗通过间接免疫荧光法（IFA）检测病毒的特异性；合成EV71特异性引物，通过RT—PCR对病毒进行分子生物学鉴定；病毒的VP1基因序列测定后，与其他EV71序列进行比较，绘制种系发育树，确定病毒基因型；通过腹腔注射途径免疫小鼠，免疫后分离血清通过微量细胞病变抑制法测定血清中和抗体效价，ELISA法检测血清抗体水平和抗体亚型水平。结果电镜下可观察到典型的圆形病毒颗粒，直径为20～30nm，呈典型的肠病毒形态；085和087株病毒感染细胞中均能观察到黄绿色荧光，提示该两株病毒可与EV71单抗特异性结合；RT—PCR可以从病毒感染细胞中扩增出226bp大小的特异性产物带，而采用CA16特异性引物则不能扩增出相应大小的产物带；基于VP1基因序列的种系发育分析显示，087和085株均为c4基因型；085和087株E、EV71免疫小鼠后可诱导产生能中和包括其本身在内的多个病毒株的中和抗体，针对同一株中和病毒，实验组间差异无统计学意义；针对不同中和病毒株，各实验组中和本株、523-07T株的能力明显高于FY-02T株（P〈0．05）；ELISA法检测结果显示，接种灭活前后的EV71病毒085和087株后均能诱导小鼠产生抗EV71特异性IgG；IgG亚型为IgG1／IgG2a混合型，灭活病毒免疫组小鼠血清EV71特异性IgG、IgG1、IgG2a水平明显高于活病毒免疫组（P〈0．05）。两株病毒之间差异无统计学意义。结论本研究分离到的085和087株病毒均为EV71CA基因亚型，并具有一定的免疫原性。
- 李秀玲张中洋王潇潇杨永娟郝春生赵敏何薇薇张晨沈心亮
- 关键词：肠病毒71型免疫原性
