贺谷雨
- 作品数：6 被引量：2H指数：1
- 供职机构：汕头大学医学院第二附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 人脐带间充质干细胞源性心肌细胞的纯化及生物学特性鉴定
- 2013年
- 目的探讨基因修饰的方法纯化人脐带间充质干细胞源性心肌细胞的可行性,为临床心肌细胞移植寻找新的干细胞来源。方法将人心肌球蛋白轻链(MLC-2v)基因启动子与嘌呤霉素抗性基因融合,然后转染人脐带间充质干细胞,通过嘌呤霉素筛选,纯化培养出MLC-2v阳性细胞,用5-氮杂胞苷进行诱导,检测诱导后MLC-2v阳性细胞是否表达心脏相关标记物。结果纯化培养出的MLC-2v阳性细胞经5-氮杂胞苷诱导后表达心肌细胞的标记物肌钙蛋白Ⅰ(troponinⅠ)、MLC-2v和结蛋白(desmin)。RT-PCR检测证实,人脐带间充质干细胞在转染及诱导前不表达Nkx2.5和desmin,经筛选诱导后细胞表达Nkx2.5和desmin。结论人脐带间充质干细胞通过基因修饰方法可以得到相对纯化的心肌样细胞,可能成为心脏细胞移植治疗重要的细胞来源。
- 汪涛林晓波吴毅陈晓东马桂霞贺谷雨蔡志伟刘必刚秦山马廉
- 关键词：脐带间充质干细胞心肌细胞基因修饰
- DAZL腺病毒载体的构建及其对人脐带间充质干细胞向男性生殖细胞诱导分化的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建高效表达的DAZL重组腺病毒载体系统，观察DAZL基因对人脐带间充质干细胞（HUMSCs）向男性生殖细胞分化的影响。方法1．用Gateway腺病毒系统制备含DAZL及EGFP基因的重组腺病毒pAd-DAZL-EGFP。2．用组织块贴壁法获得HUMSCs，用Ad-EGFP-DAZL感染第3代生长良好的HUMSCs，观察感染效率及细胞生长情况，确定最佳感染复数（MOI）和感染时间。3．通过形态学、反转录（RT）-PCR和免疫荧光鉴定DAZL基因异位表达诱导HUMSCs向男性生殖细胞方向分化的结果。结果成功构建表达DAZL的腺病毒，病毒滴度为1．0×10^9pfu／mL。最佳的感染条件为：MOI=100，感染时间：8h，该条件下的感染率为（43．00±1．52）％。HUMSCs在感染DAZL重组腺病毒后形态发生了明显的变化，第4—6天由成纤维细胞变成圆形，少数变圆的细胞在2～3周后变成蝌蚪状，阴性对照组及空白对照组细胞则未发生类似变化。RT—PCR和免疫荧光均证实实验组表达精原细胞的标志STELLA（DDPA3）、VASA（DDX4）、c—kit、DAZL和OCT4（POU5F1），阴性对照组及空白对照组则只表达内参基因。结论DAZL重组腺病毒感染HUMSCs后能诱导HUMSCs向男性生殖细胞方向分化，证实DAZL基因是精子形成过程中的关键基因。
- 吴扬赖秀蓝唐秋灵陈辉罗梅娟冯学永蔡志伟刘必刚贺谷雨秦山马廉
- 关键词：DAZL人脐带间充质干细胞腺病毒载体生殖细胞
- 脑室内注射丁酸钠调控弓状核POMC和AgRP/NPY的基因表达:减少大鼠摄食和体重的中枢机制
- 陈福宜贺谷雨陈程马廉
- 脑室内注射丁酸钠减少大鼠摄食和体重的中枢机制
- 陈福宜贺谷雨陈程马廉
- 重组慢病毒载体的构建及其感染人脐带间充质干细胞的研究
- 2014年
- 目的 利用包装制备的重组慢病毒载体感染人脐带间充质干细胞,为后续的细胞重编程奠定基础.方法 利用组织块贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞（HUMSC）.携带目的基因（oct4、sox2、klf4、c-myc）及绿色荧光蛋白的质粒经验证、扩增后,转染HEK-293T细胞,制备携带上述基因的慢病毒上清液.荧光显微镜下梯度稀释法检测病毒滴度.慢病毒液感染3～5代生长良好的HUMSC,荧光显微镜及流式细胞术检测病毒感染力,RT-PCR及定量PCR检测目的基因mRNA水平.结果 成功验证、扩增携带目的基因的质粒.制备的新鲜病毒液滴度达5×108U/mL,冻存后降为5×106 U/ml.重组慢病毒感染HUMSC的感染力高于80％,4种目的基因的表达均明显高于对照.结论 重组慢病毒载体可以在体外高效的转染HUMSC,并稳定表达目的基因,是HUMSC重编程的有效基因转移载体.
- 刘思征赖秀蓝陈元国贺谷雨Martín Maldonado林丽敏谢丽春吴卫照黄天华蔡志伟刘必刚马廉
- 关键词：重组慢病毒载体人脐带间充质干细胞细胞重编程
- 3-甲基胆蒽诱导人脐带间充质干细胞的恶性转化被引量：1
- 2013年
- 目的探讨3一甲基胆蒽（MCA）诱导人脐带间充质干细胞（HUMSCs）发生恶性转化的可能性，为其临床应用前的安全性检测提供可借鉴的检测模式及探索有效的预防恶性转化的方法。方法采用组织块贴壁法获得HUMSCs，实验组用含MCA的培养基处理HUMSCs1周，然后用基础培养基继续培养；对照组用含二甲基亚砜的培养基做同样的处理。倒置显微镜观察细胞的形态差异和生长速度，将实验组的HUMSCs注入裸鼠皮下，肿瘤长出后取出肿瘤组织做病理学鉴定，并对其进行原代培养，通过细胞染色体G显带判断是否为人源性。结果9批对照组细胞传至30～60d陆续凋亡，注射裸鼠皮下未见包块形成；9批实验组细胞中8批细胞30～60d后陆续凋亡，仅1批细胞的形态、生长状态和生长速度发生变化，表现出肿瘤细胞的一些特征；将此细胞注射于裸鼠皮下，约2个月后可形成包块，病理切片（HE染色）提示包块为恶性肿瘤，结合免疫组织化学提示病理类型为肉瘤或低分化肿瘤；肿瘤细胞常染色体显示为人源性细胞。结论HUMSCs在MCA诱导下能发生恶性转化，在体外培养的过程中可能存在安全隐患，体内移植后可能存在致瘤性风险，其临床应用的安全性仍有待证实。
- 唐秋灵陈秋蓉陈辉陈业增赖秀兰刘思征谢庆东贺谷雨马廉
- 关键词：人脐带间充质干细胞恶性转化
