罗时文
- 作品数：4 被引量：20H指数：3
- 供职机构：深圳市微生物基因工程重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金深圳市科技计划项目广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 粉尘螨cDNA文库的构建被引量：4
- 2004年
- 目的构建粉尘螨cDNA表达文库。方法提取粉尘螨总RNA和mRNA,以NotIdT18作为引物反转录合成第一链,置换法合成第二链。加EcoRI接头,经NotI酶切后,应用定向克隆技术将相应dscDNA片段插入λExCell/NotI/EcoRI/CIP载体的NotI和EcoRI双酶切位点间,经包装、转染宿主菌,构建成cDNA文库。检测文库库容量和重组效率,并采用PCR方法对插入片段大小进行分析。结果已成功构建一个含4.8×105个重组子的cDNA表达文库,重组率为100%,插入片段大小平均约1.2kb。结论所建文库容量及插入片段大小适合对粉尘螨特异性重组变应原的进一步研究。
- 刘志刚周珍文高波罗时文陈淑贞张兆松
- 关键词：粉尘螨CDNA文库
- 美洲大蠊变应原CrPI的表达、纯化与免疫学特性鉴定被引量：13
- 2005年
- 以阳性噬菌体克隆为模板 ,通过PCR扩增出目的基因片段并克隆入T载体 ,经测序证实为美洲大蠊Periplanetaamericana变应原CrPI后 ,将该基因亚克隆入表达载体pGEX 5X 1。美洲大蠊变应原CrPI在大肠杆菌中得到高效表达 ,但主要以包涵体形式存在于沉淀中。目的蛋白溶于 6mol L盐酸胍并经稀释复性后 ,经GlutathioneSepharoseTM 4B亲和层析 ,纯度达 90 %以上。以蟑螂过敏病人血清进行免疫印迹检测 ,结果显示重组变应原具有良好的IgE结合活性。
- 高波刘志刚邢苗徐宏罗时文赖仞
- 关键词：美洲大蠊PI蛋白表达免疫印迹
- 蟑螂变应原Cr-PI包涵体的变复性研究被引量：3
- 2004年
- 本研究优化了GST CrPI融合蛋白在大肠杆菌中的诱导表达条件和GST CrPI包涵体的复性条件 ;采用GlutathioneSepharoseTM 4B亲和层析分离纯化融合蛋白 ,以Xa酶切去掉其GST标签后 ,对CrPI进行了电喷雾电离串联质谱分析 (ESI MS MS)。结果表明 ,IPTG浓度对该蛋白的诱导效果影响不大 ,OD6 0 0 值为 0 6时诱导效果最佳 ;复性蛋白浓度和L 精氨酸浓度对稀释复性结果有重要影响。纯化融合蛋白经Xa酶切、分子筛层析去掉GST标签后 ,重组蛋白的纯度达 95 % 。
- 高波刘志刚苏东明罗时文
- 关键词：蟑螂变应原包涵体变复性融合蛋白大肠杆菌
- 蛔虫性哮喘免疫治疗肺组织病理变化的动态观察被引量：1
- 2004年
- 目的 为了观察人蛔虫变应原免疫治疗哮喘豚鼠后肺组织超微结构的动态变化 ,以及探讨蛔虫变应原致喘机理。方法 用人蛔虫变应原激发豚鼠哮喘后 1、2 4和 72h ,电镜观察不同实验组肺组织病理学变化。结果 阴性对照组和佐剂对照组豚鼠在激发后 1h、2 4h、72h肺泡间质无明显炎性细胞浸润 ,气血屏障结构完整、清晰。I型、II型肺泡上皮细胞结构正常。而阳性激发组豚鼠肺组织支气管粘膜上皮细胞纤毛脱落或缺失 ,分泌物增多 ;并对肺泡上皮细胞、气血屏障造成严重的损伤 ,使细胞器出现空泡、肿胀或呈碎裂状改变 ;肺泡表面活性物质合成减少。结论 用蛔虫变应原诱发豚鼠哮喘后 ,使得大量炎性细胞渗出、浸润 ,对气道上皮形成炎性损伤 ,进一步引起肺功能降低。
- 刘志刚方勇苏东明罗时文严涛
- 关键词：哮喘模型电镜观察
