童师雯 作品数:20 被引量:30 H指数:3 供职机构: 重庆医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 中国博士后科学基金 长江学者和创新团队发展计划 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 更多>>
iTRAQ在肝脏疾病中的应用 目的:本研究旨在寻找人肝癌细胞株BEL7402和5-氟尿嘧啶耐药的BEL7402/5-FU细胞株,以及人肝癌细胞株hepG2和有乙肝病毒(HBV)复制的hepG2215细胞株各自的蛋白质组学差异,筛选出影响疾病发生或治疗... 童师雯 杨轶轩 胡怀东 张大志 胡鹏 任红关键词:乙型肝炎病毒 质谱技术 干扰素 分子机制 文献传递 谷氨酰胺代谢与肿瘤 谷氨酰胺(glutamine,Gln)以往被认为主要功能是在肌肉中储存氮原子并在各器官间运输氮原子的一个非必需氨基酸。它是血浆中是最多的氨基酸,在肌肉蛋白氨基酸中占4%,它在血浆自由氨基酸池中占20%,在肌肉自由氨基酸池... 童师雯 胡怀东文献传递 乙型肝炎病毒外膜蛋白真核表达质粒的构建和表达 被引量:1 2012年 目的:构建乙型肝炎病毒(HBV)S基因(包括Pre-S1,Pre-S2和S)的真核表达质粒.方法:将PCR克隆获得的Large surface antigen of HBV,Middle surface antigen of HBV和Small surface antigen of HBV基因片段通过T-A克隆插入真核表达载体Pcmv-Tag2B,构建重组质粒Tag2B-LS,Tag2B-MS和Tag2B-SS,经测序后转染293FT细胞,收取蛋白并鉴定.结果:分别双酶切构建的重组质粒,获得相应大小的DNA片段,且测序证实为有完整读码框的S基因,重组质粒分别转染293FT细胞并表达,经Western Blot鉴定证实.结论:成功构建真核表达质粒Tag2B-LS,Tag2B-MS和Tag2B-SS,并能正确表达,为进一步研究乙型肝炎病毒外膜蛋白的功能打下基础. 王丹 童师雯 张红敏 李宏 胡鹏 杨轶轩 张大志 胡怀东关键词:外膜蛋白 乙型肝炎病毒 真核表达质粒 Mov10稳定表达肝癌细胞株的建立及其生物学研究 被引量:1 2014年 目的构建稳定表达Mov10蛋白的HepG2细胞株,探讨Mov10在肝癌细胞增殖和侵袭等生物学行为中的作用。方法将含Mov10基因的真核表达载体pCMV-Mov10-GFP质粒,采用脂质体介导法转染至人肝癌细胞系HepG2,经过G418抗性筛选阳性克隆。采用qPCR、Western blot技术检测Mov10的表达,免疫荧光技术观察稳定株Mov10的细胞分布。通过MTS、平板克隆形成试验、体外侵袭能力检测观察稳定细胞株的增殖情况、克隆形成能力和侵袭能力。结果成功构建了表达Mov10蛋白的稳定细胞株HepG2-Mov10。内源性及外源性Mov10蛋白主要分布于细胞质。稳定细胞株HepG2-Mov10较对照组细胞增殖速度快(P<0.05),体外侵袭能力强(P<0.05)。稳定细胞株HepG2-Mov10、HepG2-GFP和细胞株HepG2的克隆形成能力分别为(56.7±17.3)%、(38.3±12.1)%、(31.3±8.1)%,HepG2-Mov10细胞与后两者间差异有统计学意义(P<0.05)。结论成功构建稳定表达Mov10的细胞株HepG2-Mov10,发现Mov10能促进肝癌细胞增殖并提高克隆形成能力和侵袭能力。 刘敏慧 童师雯 盛云建 殷文伟 彭虹 任红 汤慧关键词:肝细胞 质粒 抗FLT3受体单克隆抗体的制备与鉴定 2009年 目的制备抗FLT3受体的单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定。方法以PET146-FLT3-His-tag表达蛋白作为免疫原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗FLT3受体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用ELISA、Western blot、免疫组化对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到两株能稳定分泌抗FLT3受体单克隆抗体的细胞株5F3B11B1和D3H2C12,亚类鉴定两种单抗为IgG1,ELISA法测定两株细胞腹水抗体效价分别为1∶409600和1∶102400,抗体相对亲和力为7.85×106L/mol。Western blot显示抗体能特异识别免疫原。细胞免疫组化显示此单抗可以特异的识别急性髓系白血病病人骨髓中原始细胞表达的FLT3受体。结论成功制备抗FLT3受体单克隆抗体,为进一步研究其与白血病等血液疾病的关系奠定了基础。 童师雯 宣景秀 章崇杰 魏大鹏关键词:单克隆抗体 白血病 白细胞介素15促进Vδ2 γδT细胞杀伤人白血病K562细胞 被引量:3 2015年 目的研究细胞因子白细胞介素15(IL-15)对 Vδ2γδ(Vδ2)T细胞杀伤人白血病K562细胞的影响。方法分离人外周血单个核细胞,唑来膦酸联合IL-2扩增Vδ2T细胞;体外IL-15刺激,流式检测Vδ2T细胞活化和功能变化。结果唑来膦酸可以大量扩增Vδ2T细胞,IL-15能活化Vδ2T细胞,增强Vδ2T细胞脱颗粒能力和分泌IFN-γ功能,并能促进Vδ2T细胞杀伤人白血病细胞K562。结论IL-15刺激可以显著活化Vδ2T细胞,增强杀伤K562细胞功能。 殷文伟 张琼芳 邵建营 童师雯关键词:白细胞介素15 细胞 K562细胞 iTRAQ在肝脏疾病中的应用 乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)感染是当前严重的全球健康问题之一,HBV感染是引起包括肝细胞癌在内的慢性肝脏疾病的重要致病因素,持续性HBV病毒感染会导致慢性肝脏损伤、肝纤维化、肝硬化以及原发性... 童师雯关键词:多药耐药性 热休克蛋白27 质谱技术 病毒复制 高盐饮食抑制小鼠NK细胞成熟和杀伤功能的研究 2022年 目的探究高盐饮食对小鼠自然杀伤(natural killer,NK)细胞成熟和功能的影响。方法3~4周龄雄性C57BL/6J小鼠(体质量约9 g)分为正常盐饮食(normal-salt diet,NSD)组(给予普通饲料及高压灭菌水喂养)和高盐饮食(high-salt diet,HSD)组(给予含4%NaCl高盐饲料及含1%NaCl高压灭菌水喂养)。采用CD27和CD11b的表达界定NK细胞成熟亚群,CD69标记细胞的早期活化,流式细胞术分析两组小鼠NK细胞亚群分布和活化水平;采用polyI:C体内处理18 h和体外佛波酯/离子霉素刺激4 h,流式细胞术检测两组小鼠NK细胞IFN-γ产生水平;通过YAC-1体内杀伤实验,流式细胞术评估两组小鼠NK细胞的细胞毒作用。结果高盐饮食不影响肝脏﹑脾脏﹑骨髓和外周血NK细胞比例,但抑制肝脏、脾脏NK细胞CD69表达(P<0.01)。高盐饮食组小鼠较正常盐饮食组小鼠肝、脾、骨髓中未成熟的NK细胞(CD27^(+)CD11b^(-))比例增加(P<0.05),而成熟的M1 NK细胞亚群(CD27^(+)CD11b^(+))比例降低(P<0.05),DX5^(+)NK1.1^(+)成熟NK细胞比例也降低(P<0.05),表明高盐饮食抑制NK细胞成熟。高盐饮食组小鼠NK细胞IFN-γ的表达低于正常盐饮食组小鼠(P<0.01),提示高盐饮食抑制NK细胞功能。体内杀伤实验表明,高盐饮食组小鼠腹腔剩余YAC-1细胞百分比和绝对数升高(P<0.01),提示高盐饮食抑制NK细胞的细胞毒作用。结论高盐饮食抑制NK细胞成熟,抑制NK细胞的活化和功能。 陶洪云 童师雯 殷文伟关键词:高盐饮食 CD27 CD11B 二氯乙酸钠在急性肝损伤预防中的应用 本发明公开了二氯乙酸钠(DCA)在急性肝损伤预防中的应用,具体研究了丙酮酸脱氢酶激酶抑制剂DCA在急性肝损伤预防中的药物用途。以脂多糖(LPS)/D‑半乳糖胺(D‑GalN)和肿瘤坏死因子‑α(TNF‑α)/D‑GalN... 殷文伟 向锋 童师雯 任红慢性丙型肝炎病毒感染者外周血滤泡辅助T淋巴细胞的变化研究 被引量:3 2016年 目的研究滤泡辅助T淋巴细胞(TFH细胞)在慢性丙型肝炎病毒(HCV)感染者外周血的变化特点及其与疾病特征的相关性。方法共纳入20名健康对照者和23例HCV感染者,其中4例接受聚乙二醇干扰素α联合利巴韦林治疗。流式细胞术检测外周血CD4^+CXCR5^+TFH细胞比例变化。结果慢性HCV感染者外周血CD4^+CXCR5^+TFH细胞占单个核细胞的比例为5.845%(2.680%~14.200%),健康对照组为3.765%(1.200%~8.520%)(u=124.5,P=0.010 6);占CD4^+T淋巴细胞的比例,感染组和对照组分别为14.800%(8.440%~36.600%)和9.550%(2.700%~21.800%)(u=132.0,P=0.017 6)。CD4^+CXCR5^+TFH细胞比例与HCV RNA载量呈负相关(r=-0.432 8,P=0.039 1),与GPT和GOT无相关性。抗病毒治疗后HCV感染者TFH细胞比例降低。结论 CD4^+CXCR5^+TFH细胞可能参与了慢性HCV感染机体抗病毒免疫应答。 殷文伟 童师雯关键词:丙型肝炎病毒 病毒载量 谷丙转氨酶