- MicroRNA-140靶向组蛋白去乙酰化酶7基因及在大鼠骨髓间充质干细胞成软骨分化过程中的表达分析被引量：2
- 2013年
- 目的检测组蛋白去乙酰化酶7（HDAC7）是否为MicroRNA（miRNA）-140的靶基因，并研究在大鼠骨髓间充质干细胞（ratMSCs）成软骨诱导分化中miRNA-140和HDAC7表达的相关性。方法利用生物信息学、双荧光素酶报告基因检测以及Western blot法鉴定miRNA-140与HDAC7之间的靶作用关系。选取4周龄Sprague—Dawley（SD）雄性大鼠采用全骨髓贴壁法进行体外分离培养纯化得到大鼠骨髓间充质干细胞并向成软骨方向诱导分化，同时采用实时定量PCR和Western blot法检测miRNA-140和HDAC7的表达水平。结果双荧光素酶活性分析结果提示，miRNA-140靶结合人HDAC7基因的3’UTR。将miRNA-140mimics转染大鼠骨髓间充质干细胞后抑制HDAC7的蛋白表达。在大鼠骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化过程中，miRNA-140表达上调，而HDAC7表达下降。结论miRNA-140通过靶结合HDAC7基因的3’UTR抑制HDAC7表达，二者在大鼠骨髓间充质干细胞成软骨诱导分化过程中表达负相关，提示miRNA-140通过抑制HDAC7蛋白表达保护软骨组织。
- 高原王伟林金德张春丽温传俊沈干
- 关键词：组蛋白去乙酰化酶大鼠骨髓间充质干细胞
- 基于双荧光素酶报告基因系统建立miR-140生物传感器
- 2014年
- 目的:利用双荧光素酶报告基因系统构建可检测miR-140活性的生物传感器。方法:首先,在psiCHECK-2双荧光报告基因质粒的多克隆位点插入miR-140成熟体的4个拷贝反义序列,构建miR-140sensor。其次,将miR-140 sensor和miR-140 mimics共转染HEK-293T细胞,利用双荧光素酶报告基因系统检验miR-140 sensor的功能。最后,转染miR-140 sensor至大鼠骨髓间充质干细胞(rat MSCs),分析在成软骨诱导中miR-140的活性变化,并与miR-140的表达水平相比较。结果:在HEK-293T细胞中,相对于阴性对照组,miR-140 sensor与miR-140 mimics共转能明显降低49%(20 nmol·L-1)和65%(50 nmol·L-1)的荧光活性。将转染miR-140 sensor的rat MSCs成软骨诱导7 d后,荧光活性降低43%,提示miR-140活性升高,与RT-qPCR法检测的miR-140表达水平相一致。结论:构建的miR-140 sensor是一种简单方便有效的miRNA传感器,可用于检测miR-140活性。
- 高原邹阳于影林金德张春丽温传俊沈干
- 关键词：荧光素酶实时荧光定量聚合酶链反应
- 抗氧化药物对抗皮肤光老化的研究
- 实验主要构建了UVA照射人皮肤成纤维细胞应激性衰老模型,观察9J/cm2UVA照射对人皮肤成纤维细胞(HSF)应激性衰老的作用,及不同浓度的白藜芦醇RESVERATROL)对UVA造成应急性衰老有无有效干预作用。材料与方...
- 沈干林金德张春丽高原温传俊
- 文献传递
- 抗氧化药物对抗皮肤光老化的研究
- 实验主要构建了UVA照射人皮肤成纤维细胞应激性衰老模型，观察9J/cm2UVA照射对人皮肤成纤维细胞(HSF)应激性衰老的作用，及不同浓度的白藜芦醇（RESVERATROL）对UVA造成应急性衰老有无有效干预作用。
- 沈干林金德张春丽高原温传俊
- 关键词：皮肤光老化纤维细胞抗氧化药物
