骆洋
- 作品数：5 被引量：115H指数：4
- 供职机构：安徽农业大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金安徽省自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 茶树实时荧光定量PCR分析中内参基因的选择被引量：103
- 2010年
- 选择合适的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析(qRT-PCR)准确性的先决条件。该文以茶树(Camellia sinensis)芽、叶、幼根、嫩茎、花瓣、种子和愈伤组织为材料,应用实时荧光定量PCR技术,分析了18S rRNA、GAPDH、β-actin和α-tubulin4个常用内参基因在茶树不同器官组织中的表达情况。经GeNorm和NormFinder软件分析发现,当利用荧光定量PCR分析比较茶树不同器官组织中的基因表达差异时,可选择β-actin作为校正内参基因;而比较不同成熟度的叶片和愈伤组织时,可以选择GAPDH作为校正内参基因。
- 孙美莲王云生杨冬青韦朝领高丽萍夏涛单育骆洋
- 关键词：茶树实时荧光定量PCR内参基因
- 茶树不同器官组织总RNA提取方法的研究被引量：4
- 2011年
- 从茶树组织中提取高质量的总RNA,是开展茶树基因组学、功能基因组学研究的重要前提,而RNase、多酚类物质严重干扰茶树总RNA的分离提取。鉴于茶树组织总RNA提取过程难易不一、总RNA提取质量良莠不齐的现状,现对材料用量、提取液、DNA和蛋白质抽提液、RNA沉淀试剂、多酚氧化抑制剂等进行了比较研究,建立了一种适合茶树各器官组织总RNA提取的简单高效的方法(简易CTAB-LiCl法),并与实验室常用的改良Tri-Reagent法、改良CTAB法进行了比较。核酸定量和琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,简易CTAB-LiCl法从茶树各器官组织中提取到的总RNA质量高、得率高。总RNA的得率是改良CTAB法的1.6-5倍。因此,简易CTAB-LiCl法具有效率高、适用范围广,且操作简单、实验成本低的特点。RT-PCR和cDNA-AFLP实验表明,提取的总RNA能够用于后续的分子生物学研究。
- 杨冬青王云生孙美莲单育骆洋韦朝领高丽萍夏涛
- 关键词：茶树总RNA器官
- 茶树花青素还原酶基因的原核表达
- 儿茶素是茶树重要次生代谢产物茶多酚的主体组分，也是决定茶叶品质的主要化学成分，研究茶儿茶素合成途径中关键基因的功能，对茶树良种选育、茶叶品质调控具有重要意义。
儿茶素合成途径基本探明，其中花青素还原酶（ANR）是儿...
- 骆洋
- 关键词：还原酶原核表达茶叶品质
- 文献传递
- 茶树丝氨酸羧肽酶基因的克隆及表达分析被引量：1
- 2013年
- 近年来,人们发现丝氨酸羧肽酶类蛋白(SCPL)参与植物次生代谢产物的酰基转移过程,即具有转酰基功能。本研究采用RT-PCR技术,获得了3个茶树丝氨酸羧肽酶基因的全长序列;生物信息学分析表明,3个CsSCPL蛋白均包含了1个底物结合位点、3个催化作用保守区和多个N-糖基化位点,及其Ser-Asp-His三联体催化中心等SCPL家族的典型特征;进化树分析表明,3个CsSCPL可能具有酰基转移酶的功能。实时荧光定量PCR结果表明3个基因在芽叶茎根中都有表达,其中,CsSCPL1和CsSCPL3在叶中的相对表达量明显高于茎和根,而CsSCPL2则在根中高表达。本研究成功地将CsSCPL重组到表达载体pET32a(+)上进行原核表达,并对诱导时间及诱导温度进行了优化;经IPTG诱导、SDS-PAGE检测,目标蛋白条带分子量为70 kD,与预测大小相符。
- 仇传慧李伟伟王云生李明卓骆洋刘亚军高丽萍夏涛
- 关键词：茶树生物信息学分析原核表达
- 茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化被引量：7
- 2011年
- 茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶。采用RT-PCR技术,获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框,它编码含337个氨基酸的蛋白质,推测分子量为37 kD,等电点为6.54;成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、氨苄青霉素浓度,纯化出目的蛋白。HPLC检测表明,目的蛋白具有ANR酶活性。
- 骆洋王弘雪王云生卢忠尉刘亚军单育陈啸天叶辉高丽萍夏涛
- 关键词：茶树原核表达酶活性
