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小麦与条锈菌非亲和互作的cDNA文库构建及表达序列标签分析被引量：5: 2008年; 【目的】了解小麦受条锈菌诱导后的基因表达情况,从分子水平揭示寄主与病原菌非亲和互作机理。【方法】以小麦品种水源11和条锈菌CY23号小种组成的非亲和组合为材料,利用SMART技术构建条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库。随机挑取克隆测序,对其中获得的507条高质量表达序列标签(EST)进行生物信息学分析。【结果】得到原始文库的滴度为1.2×106pfu·ml-1,扩增文库滴度2×109pfu·ml-1,重组率97%,插入片段大小为0.4～3kb。对获得的237个非重复序列进行BLAST分析,已知功能基因大部分与能量代谢、蛋白质合成修饰及加工、转运、信号转导、防卫反应等相关。【结论】该cDNA文库质量较高,信息丰富,获得的已知功能基因中能量和代谢相关约占40%,抗病与防御相关约占17.1%,这些信息有利于在分子水平上研究小麦与条锈菌互作机制,为进一步克隆小麦与条锈菌互作中的相关重要基因及功能分析奠定基础。; 王艳飞屈志鹏张永红马金彪郭军韩青梅黄丽丽康振生; 关键词：小麦条锈菌 CDNA文库

条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库构建及表达序列标签分析: 小麦条锈病是我国乃至世界上所有产麦国家小麦上危害最严重的病害之一。目前,人们已从形态学、组织学、细胞学、生理生化等方面对小麦与条锈菌的亲和互作进行了许多研究,在不同层次、不同水平上认识了小麦与条锈菌亲和互作机理。但是在分...; 马金彪; 关键词：小麦条锈菌 CDNA文库; 文献传递

小麦与条锈菌非亲和互作的cDNA文库构建及表达序列标签分析: ＜正＞小麦条锈病是一种重要的世界性的小麦叶部病害,培育抗病品种是控制小麦条锈病的经济有效的途径。然而,大面积推广种植单一抗病品种又常常促使条锈菌新小种的产生和发展,而最终导致小麦品种抗病性的“丧失”,目前这一状况已成为抗...; 王艳飞屈志鹏张永红马金彪郭军韩青梅黄丽丽康振生; 文献传递

小麦与条锈菌亲和互作表达序列标签（EST）分析和条锈菌转录基因物理图谱构建: 小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)是世界范围内危害小麦正常生长的病原物。由其引发的小麦条锈病具有流行性强、危害范围广、危害严重等特点,成为世界粮食安全生产的制约因素。过去,人...; 马金彪; 关键词：小麦条锈菌 VIGS; 文献传递

条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库构建及表达序列标签分析被引量：15: 2007年; 以小麦品种水源11和条锈菌CY31号小种为材料,用SMARTTMcDNA Library Construction Kit构建条锈菌诱导的小麦叶片cDNA文库。得到原始文库的滴度为6×106pfu/mL,扩增文库滴度9×109pfu/mL,重组率98%,插入片段在0.5～2.2kb。随机挑取600个克隆,测序获得594条高质量ESTs,与GenBank序列进行BLASTx分析,已知功能ESTs与植物同源比例最高,占44%;其次为真菌,占32%;有18%ESTs在GenBank中没有匹配的同源产物。蛋白功能分析表明,PIG28编码蛋白、ABC转运子、金属硫因、泛素、质膜H+-ATPase和氨基酸透酶等可能参与了寄主与病原菌互作过程。; 马金彪王晓杰于秀梅徐亮胜韩青梅黄丽丽康振生; 关键词：小麦条锈菌 CDNA文库生物信息学

小麦过氧化物还原酶基因TaPrx的克隆与功能初步分析被引量：7: 2009年; 【目的】克隆TaPrx基因并对其在小麦与条锈菌互作中的功能进行初步分析。【方法】利用PCR方法结合RACE技术在cDNA文库中筛选得到TaPrx基因的全长序列并进行生物信息学分析,然后克隆至pET-32a(+),转化E.coliBL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达。通过Real-timeRT-PCR进行表达模式分析。【结果】得到TaPrx基因的全长序列688bp,ORF489bp,编码162个氨基酸残基,分子量17.36kD,等电点5.32,含一个保守的半胱氨酸残基(Cys),不含信号肽及跨膜结构域,亚细胞定位94%的可能性在细胞质。TaPrx融合蛋白分子量38kD,最佳IPTG诱导浓度0.05mmol·L-1,20℃诱导20h可得到最大量的融合蛋白。Real-timeRT-PCR分析表明TaPrx基因在小麦与条锈菌的亲和与非亲和互作中均受诱导表达,分别在接种后24h、18h达到表达高峰。【结论】获得了TaPrx基因特异性的多克隆抗体;TaPrx基因受条锈菌诱导表达,可能参与了小麦与条锈菌互作。但是否参与了小麦受条锈菌侵染后产生的ROS的清除与调节仍需进一步验证。; 张海燕李国田王晓杰段迎辉徐亮胜郭军马金彪黄丽丽康振生; 关键词：小麦条锈菌克隆原核表达 REAL-TIME RT-PCR

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马金彪