陈江涛
- 作品数:6 被引量:16H指数:2
- 供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金:“十一五”国家科技支撑计划国家高技术研究发展计划国家肉羊产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域:农业科学医药卫生生物学更多>>
- 猪膜联蛋白A2 C末端多克隆抗体的制备
- 2010年
- 膜联蛋白A2(Annexin A2,ANNXA2)是膜联蛋白多基因家族成员之一,是一种多功能蛋白[1-3],在钙离子存在时能与带负电荷的磷脂结合,近年来国内外研究发现病毒感染与膜联蛋白A2存在密切联系,膜联蛋白A2引起人们的普遍关注。目前,
- 陈江涛王光祥吉艳红尚佑军刘艳红刘湘涛
- 关键词:多克隆抗体
- 应用重组PCR构建猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白融合基因被引量:1
- 2010年
- 膜联蛋白A2是膜联蛋白多基因家族成员之一,在Ca2+存在时能与带负电荷的磷脂结合。最近研究显示,膜联蛋白A2在病毒感染方面发挥了重要作用。本研究应用RT-PCR和PCR方法分别获得了猪源膜联蛋白A2和增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)。然后用重组PCR技术成功构建了膜联蛋白A2-EGFP融合基因,为研究膜联蛋白A2在病毒感染细胞中的定位和表达,以及病毒和宿主细胞相互作用奠定了基础。
- 陈江涛吉艳红王光祥尚佑军刘艳红刘湘涛
- 关键词:重组PCR膜联蛋白A2增强型绿色荧光蛋白融合基因
- 猪膜联蛋白A2多克隆抗体的制备、亲和纯化与鉴定被引量:2
- 2010年
- 本研究旨在制备并亲和纯化兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。通过PCR从质粒pA2-EGFP中将编码猪膜联蛋白A2与增强型绿色荧光蛋白融合基因(Annex A2-EGFP)亚克隆到pET-30a(+),构建了原核表达质粒p30a/AE,转化大肠杆菌Rosetta(DE3),经IPTG诱导以包涵体形式表达了猪ANNXA2-EGFP融合蛋白,用Ni-Resin HP树脂对表达的目的蛋白进行亲和纯化。用纯化的ANNXA2-EGFP融合蛋白免疫兔,制备兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体。将以前纯化的猪可溶性GST-ANNXA2融合蛋白偶联NHS活化琼脂糖凝胶FF,亲和纯化多克隆抗体。用GST-ANNXA2亲和纯化的多抗效价达到1∶12800,Western blot和免疫组化结果证实具有高特异性。制备的高效价和高特异性兔抗猪膜联蛋白A2多克隆抗体,为进一步研究膜联蛋白A2在病毒感染中的作用奠定了基础。
- 陈江涛王光祥吉艳红尚佑军刘艳红刘湘涛
- 关键词:多克隆抗体
- 仔猪心肌原代细胞培养及其对口蹄疫病毒敏感性研究被引量:2
- 2010年
- 目的旨在建立仔猪原代心肌细胞的培养方法,探索O型口蹄疫病毒对易感动物心肌原代细胞的敏感性,为研究O型口蹄疫感染引发幼畜心肌炎致病机理提供细胞模型。方法利用混合消化酶(2g/L胰蛋白酶(trypsin)和1g/LⅡ型胶原酶(collagenase)1∶1混合)消化法培养原代心肌细胞;相差显微镜观察心肌细胞生长和波动情况;胎盘蓝对细胞染色,鉴定细胞成活率。将生长良好的原代心肌细胞接种口蹄疫O型乳鼠毒观察其敏感性,同时将该毒接种BHK21细胞做平行对比。结果仔猪原代细胞成活率为95.6%;成活细胞形态完整,部分细胞自行蠕动,当生长成片后可见呈岛屿状搏动。仔猪原代心肌细胞对O型口蹄疫病毒敏感。与BHK21细胞相比,结果无明显差异。结论本试验成功培养了仔猪心肌原代细胞,并且培养的原代细胞对O型口蹄疫病毒敏感。
- 王光祥尚佑军陈江涛吉艳红刘湘涛
- 关键词:O型口蹄疫敏感性
- 猪圆环病毒2型感染性克隆的构建
- 2009年
- 为进一步研究猪圆环病毒2型(PCV2)的致病机制和基因功能,利用PCR方法从河北保定株(HBBD0608)猪PCV2病料中获得了PCV2全基因组序列,将其定向克隆入pEGFP-N1载体,成功构建了PCV2全基因组串联双拷贝的重组质粒pEGFP-N1-2PCV2。将该质粒转染PK-15细胞并连续盲传5代,用PCR方法可以在转染后盲传的细胞中检测到PCV2核酸;间接免疫荧光可以检测到绿色荧光,表明有PCV2抗原存在。证明构建的双拷贝重组质粒具有感染性。
- 王光祥郑海学尚佑军刘艳红常艳燕田宏吴锦艳陈江涛刘湘涛
- 关键词:猪圆环病毒2型感染性克隆感染性
- 湖北省羊口疮病毒的分离鉴定被引量:11
- 2012年
- 利用MDBK传代细胞系对湖北通山县某羊场疑似羊口疮(Orf)的黑山羊病料进行分离,通过病毒理化特性试验、动物回归试验和PCR等方法对分离的毒株进行鉴定。结果表明,病料悬液接种MDBK细胞后出现细胞病变,接种病料的羊只出现典型的Orf症状,扩增出羊口疮病毒(Orf virus)B2L基因,该毒株与台湾山羊株(EU935106.1、DQ904351.1)相似性最高(均为99%),亲缘关系最近。本研究成功分离鉴定到一株ORFV,命名为ORFV/HB/09。
- 王光祥尚佑军陈江涛吕占禄张克山刘湘涛
- 关键词:动物回归试验聚合酶链反应