郭建军
- 作品数：12 被引量：30H指数：3
- 供职机构：华中师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省自然科学基金国家大学生创新性实验计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生环境科学与工程农业科学更多>>
- VR1^+细胞模型的构建和Nielsen假说的验证被引量：3
- 2006年
- 为研究类香草素受体(vanilloidreceptortype1,VR1)作为刺激性室内空气污染物的触发性生物靶分子的生理作用,在VR1cDNA质粒基础上,应用分子克隆和细胞转染技术构建了体外培养的VR1+HEK293细胞模型,应用此细胞模型进行辣椒素和甲醛致VR1+HEK293细胞死亡实验.结果表明,VR1+HEK293细胞模型构建成功,VR1+细胞死亡实验是一种简便有效的鉴定VR1体外表达的实验方法;甲醛能够激活VR1,且激活反应能被VR1特异性拮抗剂capsazepine所阻断,从而推断甲醛对气道的刺激作用也是通过VR1所介导的.用体外细胞学实验证实了VR1是甲醛作用的生物靶分子,以实验证实了Nielsen假说的正确性.
- 严彦乔永康徐钱王丽丁书茂郭建军周砚青刘丹丹杨旭
- 关键词：甲醛
- 稀有海洋放线菌Salinispora arenicola非核糖体肽合成酶和卤代酶生物合成基因簇核心区的克隆及序列分析被引量：10
- 2011年
- 克隆稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的非核糖体肽合成酶(NRPS)和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段。根据已发表的放线菌NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区的核苷酸序列保守区设计两对简并性引物,采用PCR的方法扩增NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,使用分子生物学软件进行序列分析。获得两段大小分别为662bp和557bp的基因片段,编码220个和185个氨基酸。这两段序列与海洋放线菌Salinispora arenicola CNS-205的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因核苷酸序列的同源性分别为99%和98%。成功地获得了稀有海洋放线菌Salinispora arenicola的NRPS和卤代酶生物合成基因簇核心区基因片段,该基因片段的获取将为分离全长基因簇以及研究该基因簇在生物合成中的功能奠定基础。
- 马艳玲邓海魏菁菁郭秀红刘中来邓灵福刘艳丽郭建军姚汉超熊国梅祁超
- 关键词：系统进化
- GST-Dot4融合蛋白的表达·纯化及鉴定
- 2009年
- [目的]为了提高Dot4蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达并获得较高纯度的蛋白。[方法]以pGEX-KG-Dot4重组质粒转化E.coliBL21后,用IPTG诱导重组菌表达GST-Dot4融合蛋白,采用SDS-PAGE及W estern B lot法鉴定表达产物,用G lutathione Sepharose4B亲和层析柱分离纯化。[结果]pGEX-KG-Dot4重组表达载体在大肠杆菌中获得高效表达;经G lutathione Sepharose4B亲和层析柱纯化获得了高纯度的Dot4融合蛋白;W estern B lot表明,该蛋白可与GST标签抗体反应,表明获得了目的蛋白。[结论]在大肠杆菌中表达纯化后得到较高纯度的GST-Dot4融合蛋白,为Dot4蛋白的结构、功能及作用机制研究奠定了基础。
- 张艳梅丛文娟郭建军刘中来
- 关键词：融合蛋白可溶性表达蛋白纯化
- D1蛋白酶的高效毛细管电泳检测
- 2010年
- 在低温条件下表达的两种融合蛋白pET-28a ctpA与pET-23a-ctpA通过亲和色谱纯化、层析柱脱盐及浓缩,获得大量较高纯度的可溶性融合蛋白;并用高效毛细管电泳(HPCE)技术对两种融合蛋白进行分离检测,同时用荧光法配合确证.高效毛细管电泳分离检测结果显示,运行缓冲液的pH值相同时,两种融合蛋白的迁移时间存在显著差异;运行缓冲液的pH值在一定范围内变化时,同种蛋白的迁移时间无显著变化,表明蛋白结构是影响蛋白迁移的主要因素,两种蛋白的结构存在差异.
- 张艳梅陈腊月李伟国郭建军刘中来姚汉超刘艳丽祁超
- 关键词：融合蛋白高效毛细管电泳
- VR1+细胞模型的构建和Nielsen假说的验证
- VR1+细胞模型是由VR1(vanilloidreceptortype1,VR1类香草素受体亚型1)膜蛋白和离体动物载体细胞构建的一种生物活性细胞,由美国加州大学于1997年构建成功,并用于了疼痛传导机理和分子药理学研究...
- 严彦乔永康徐钱王丽丁书茂郭建军周砚青刘丹丹杨旭
- 关键词：甲醛细胞模型
- 文献传递
- 雷帕霉素对二种鳞翅目昆虫细胞自噬和凋亡的影响被引量：6
- 2009年
- 以2种鳞翅目昆虫细胞为材料,采用雷帕霉素进行处理,初步研究自噬作用与昆虫细胞凋亡的关系。结果表明:雷帕霉素能够提高家蚕细胞系BMN-e细胞的自噬水平,并能诱导BMN-e细胞发生凋亡;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤能抑制雷帕霉素诱导的BMN-e细胞凋亡。相反,雷帕霉素虽能诱导斜纹夜蛾细胞系SL-HP细胞的自噬水平提高,但不能诱导斜纹夜蛾Spodoptera litura(Fabricius)细胞发生凋亡;雷帕霉素的预处理能抑制放线菌素D诱导的斜纹夜蛾细胞系SL-HP细胞发生凋亡;自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤对放线菌素D诱导的细胞凋亡没有影响。因此家蚕Bombyx mori细胞自噬水平的提高与细胞凋亡具有正相关性,而斜纹夜蛾细胞自噬水平的提高与细胞凋亡不相关,相反还对细胞凋亡的诱导具有一定的抑制作用。
- 李佳芮邓玉杰张许平付涛马源郭建军刘凯于
- 关键词：自噬作用
- 海洋放线菌Streptomyces sp.大片段DNA基因组文库的构建被引量：2
- 2010年
- 目的:构建稀有海洋放线菌Streptomyces sp.基因组文库。方法:以稀有海洋放线菌Streptomyces sp.为实验材料,随机剪切提取的总DNA,5'-磷酸末端补平回收40kb左右的DNA片段,与pWEBTM载体连接,经包装蛋白包装成噬菌体后侵染宿主细胞E.coliEPI100,构建该菌株的基因组文库,并对该文库进行质量鉴定。结果:成功构建了稀有海洋放线菌Streptomyces sp.的基因组文库,效价达9.0×104CFU/mL,得到4000个阳性克隆子,远远大于按覆盖率为99%计算至少所需的837个阳性克隆子数,且平均插入片段长度为36kb,重组率100%。阳性克隆子保存于96孔板中,-80℃保存。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为了进一步评估Streptomyces sp.所能合成的所有潜在天然产物,还需要进一步检测该文库中包含有生物合成基因簇的大肠杆菌的表达情况。
- 马艳玲邓海刘中来邓灵福刘艳丽郭建军祁超
- 关键词：基因组文库噬菌体
- 克氏原螯虾精巢与输精管组织细胞原代培养方法初探被引量：2
- 2007年
- 将剪碎的克氏原螯虾(Procambarus clarkii)精巢与输精管组织块分别接种于含20%FBS、双抗以及添加了适量无机盐等的M199-MK、MEM、S20、Grace’s和L-15培养基中,25℃恒温静置培养。结果表明,在Grace’s培养基中,只有少量组织块贴壁。在其余培养基中,大多数组织块能在1～2周内逐渐贴壁,L-15和S20培养基培养效果最好。组织块贴壁后,一些成纤维细胞和上皮样细胞逐渐从组织块迁移出来。传代后组织块可继续贴壁并重新迁移出一些成纤维细胞与少量上皮样细胞。添加部分草鱼细胞系PSF或斜纹夜蛾细胞系Sl驯化的培养基进行培养,驯化培养基:新鲜培养基=1:5(v/v),结果表明,Sl驯化培养基能促进细胞的迁移。组织块一般可离体培养2～4个月,但是都未能形成细胞单层。胰蛋白酶消化后分散的虾细胞不能贴壁。
- 刘凯于姚汉超邱宝国郭建军彭建新洪华珠
- 关键词：克氏原螯虾细胞培养输精管原代培养
- 对B.t毒素敏感与抗性的昆虫细胞的差异蛋白质肽质指纹分析被引量：2
- 2007年
- 采用2-DE技术分析了粉纹夜蛾TnH5对B.tCrglAC毒素敏感和抗性2种细胞总蛋白质,建立了TnH5细胞双向电泳图谱,获得了一些差异蛋白质.对部分差异蛋白质点采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF/MS)测定了其胶内酶解后的肽质指纹图谱(PMF),查询数据库,结果表明,部分差异斑点分别与胞质外周蛋白、脂多糖生物合成蛋白、一种脱氢酶和类免疫球蛋白等类似.
- 刘凯于黄薇郭建军彭建新洪华珠
- 关键词：粉纹夜蛾昆虫细胞双向电泳抗性机制
- 轮状病毒WH-2株vp7基因的原核表达及单克隆抗体的制备被引量：2
- 2011年
- 目的:制备人B组轮状病毒WH-2株vp7基因的单克隆抗体(mAb),并研究其免疫学特性。方法:将B组轮状病毒WH-2株vp7基因克隆至pGEX-KG载体,然后转入大肠杆菌E.coliTop10,IPTG诱导表达GST-VP7融合蛋白。分离纯化蛋白GST-VP7并免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,利用间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞,有限稀释法克隆化,获得稳定分泌mAb检测为阳性的细胞株。结果:经过3次克隆化筛选,最终得到1株能和GST-VP7蛋白反应稳定分泌mAb的阳性细胞克隆,这些mAb通过Western blot鉴定结果显示其具有良好的特异性。结论:人B组轮状病毒WH-2株VP7蛋白成功在大肠杆菌中GST融合表达及mAb的制备体能用于GBRV结构和功能的研究,也为其引起的疾病预防、诊断和治疗等研究和临床诊断奠定了基础。
- 丛文娟杨继红邓妍陈凯峰郭建军熊国梅刘中来
- 关键词：VP7基因单克隆抗体
