黎小军
- 作品数：3 被引量：3H指数：1
- 供职机构：浙江工业大学生物与环境工程学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程化学工程生物学更多>>
- 疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶Lip分子改造及催化合成普瑞巴林中间体
- ＜正＞（3S）-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基已酸是神经病理性疼痛和癫痫治疗首选药物普瑞巴林的关键手性中间体。本研究通过基因挖掘,从疏绵状嗜热丝孢菌基因组中获得一个能够高选择性拆分外消旋2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸...
- 郑仁朝黎小军郑裕国
- 关键词：疏绵状嗜热丝孢菌脂肪酶分子改造动力学拆分普瑞巴林
- 文献传递
- Thermomyces lanuginosus ZJB09222脂肪酶基因克隆及在大肠杆菌中的表达被引量：2
- 2012年
- Thermomyces lanuginosus脂肪酶(简称TLL)是具有重要商业应用价值的脂肪酶之一。运用RT-PCR技术,从Thermomyces lanuginosus ZJB09222基因组中克隆得到885 bp脂肪酶基因cDNA序列,其结构基因编码蛋白包含292个氨基酸。将脂肪酶基因cDNA序列开放阅读框克隆到大肠杆菌表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌BL21(DE3),构建了基因工程菌E.coli BL21/pET28b-TLL。诱导表达后SDS-PAGE电泳显示该脂肪酶分子量约为32 ku。筛选获得廉价重组菌培养基,表达条件优化结果表明,当OD600约为0.6～0.8时,加入IPTG至终浓度为0.1 mmol/L,在28℃诱导培养7 h,酶活达到41 U/mL。
- 雷丽华郑仁朝柳志强黎小军郑裕国
- 关键词：脂肪酶THERMOMYCESLANUGINOSUS克隆大肠杆菌
- 摩氏摩根菌ZJB-09203酯酶的分离纯化及性质被引量：1
- 2014年
- 立体选择性水解2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸乙酯(CNDE)是化学-酶法合成重大疾病治疗药物普瑞巴林的关键步骤。分离纯化了能够高效水解S-型CNDE的摩氏摩根菌ZJB-09203胞内酯水解酶,并进行酶学性质研究。采用硫酸铵分级沉淀、Phenyl Sepharose 6 FF疏水柱层析、DEAE Sephadex A-50阴离子交换和羟基磷灰石Bio-Scale CHT层析,纯化得到电泳纯的酯水解酶。SDS-PAGE和凝胶过滤HPLC分析确定该酶为单亚基蛋白,分子量为68 kDa。不同碳链长度p-硝基苯酚酯特异性酶解结果表明,该酶为酯酶,酶促合成普瑞巴林手性中间体(S)-2-羧乙基-3-氰基-5-甲基己酸的最适pH为9.0,最适温度为45℃,且在pH 7.0-9.0和40℃条件下具有良好的稳定性。Ca2+、Cu2+、Mn2+对酶活有一定的促进作用,Co2+、Fe3+、Ni2+及EDTA对酶活有较强的抑制作用。此外,考察了该酯酶水解p-硝基苯酚酯的动力学参数,及CNDE浓度对转化率的影响。首次报道了能够立体选择性水解CNDE的酯酶,相关酶学性质研究将为该酶催化合成普瑞巴林手性中间体的工业化应用提供重要依据。
- 郑仁朝王天真黎小军郑裕国
- 关键词：酯酶分离纯化酶学性质
