王海霞
- 作品数：15 被引量：20H指数：2
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家教育部博士点基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽
- 本发明公开了一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，其特征在于：由OD2和S5连接构成SAH-OD2。本发明一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，具有制备简单，药物使用浓度低，稳定性高，OD2不需要连接转导肽CTP...
- 冯文莉王海霞曾建明黄世峰肖恒
- 文献传递
- 携SH2-Caspase8融合基因重组腺病毒的构建及对K562细胞增殖的影响被引量：2
- 2011年
- 目的构建并鉴定携SH2-Caspase8融合基因的重组腺病毒AdE-SC-EGFP及其突变体,观察其对K562细胞增殖的抑制作用。方法采用RT-PCR、重叠PCR扩增SH2-Caspase8融合基因,克隆至腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建穿梭质粒pAdT-SC-EGFP,进行酶切和测序鉴定。将PmeⅠ酶切后的穿梭质粒转化pAdEasy-BJ5183感受态,通过细菌内同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒质粒pAdE-SC-EGFP及其突变体,PacⅠ酶切后将其转染AD293细胞进行包装,PCR和Western blot鉴定重组腺病毒AdE-SC-EGFP,验证后扩增病毒并测定滴度。结果 PCR检测、酶切和测序结果均表明腺病毒穿梭质粒pAdT-SC-EGFP和重组腺病毒质粒pAdE-SC-EGFP构建成功;PCR检测、EGFP表达检测结果证明重组腺病毒AdE-SC-EGFP包装成功,扩增后,滴度可达1.5×1012pfu/ml。感染K562细胞后,Western blot检测目的蛋白的表达,MTT和半固体集落形成实验检测其对K562细胞生长增殖的影响。结论成功构建并鉴定了携带SH2-Caspase8融合基因的重组腺病毒AdE-SC-EGFP及其突变体;MTT和克隆形成实验证明重组腺病毒AdE-SC-EGFP对BCR-ABL阳性的K562细胞有明显的增殖抑制作用。
- 刘双凤胡晶曹唯希史静彭智王海霞李亚娟冯文莉
- 关键词：细胞增殖SH2CASPASE8重组腺病毒K562细胞BCR-ABL
- 一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽
- 本发明公开了一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，其特征在于：由OD2和S5连接构成SAH-OD2。本发明一种杀伤慢性粒细胞白血病细胞的小分子多肽，具有制备简单，药物使用浓度低，稳定性高，OD2不需要连接转导肽CTP...
- 冯文莉王海霞曾建明黄世峰肖恒
- 文献传递
- NEDD9在上皮卵巢癌恶性生物学行为中的作用及机制的初步研究
- 卵巢癌是女性生殖系统最常见的三大恶性肿瘤之一，其死亡率高居妇科恶性肿瘤之首，其中，上皮性卵巢癌(Epithelial ovarian cancer，EOC)是卵巢癌最常见的病理类型，约占所有卵巢癌的80％以上。因为卵巢深...
- 王海霞
- 关键词：上皮性卵巢癌细胞增殖信号通路临床病理特征
- Apg-2基因沉默对BaF3-MIGR1及BaF3-P210细胞增殖的影响被引量：2
- 2013年
- 目的探讨Apg-2基因沉默对pMIGR1空载体感染的BaF3-MIGR1细胞及稳定表达Bcr-Abl融合基因的BaF3-P210细胞增殖的影响,为进一步研究Apg-2在Bcr-Abl阳性的CML细胞中的作用奠定基础。方法针对Apg-2基因609～629、845～865和2 110～2 130核苷酸合成3条shRNA序列Hspa41、Hspa42、Hspa43,同时合成阴性对照序列HspaHK,电穿孔转染BaF3-MIGR1和BaF3-P210细胞,经G418筛选稳定抑制细胞株,RT-PCR和Western blot检测细胞中Apg-2基因mRNA的转录水平及蛋白的表达水平;Am-blue法检测细胞增殖;甲基纤维素法检测细胞克隆形成能力;流式细胞技术检测细胞周期的变化。结果转染的3条shRNA质粒中,shRNA-Hspa42的干扰效果最佳。Apg-2表达抑制后,BaF3-P210细胞的增殖与克隆形成能力均明显下降(P<0.05),处于G1期细胞的百分率明显升高(P<0.05),处于S期的细胞百分率明显下降(P<0.05);而BaF3-MIGR1细胞的增殖与克隆形成能力均明显增强(P<0.05),处于S期的细胞百分率明显升高(P<0.05)。结论干扰Apg-2基因的表达可抑制Bcr-Abl阳性细胞BaF3-P210的增殖,而对Bcr-Abl阴性细胞BaF3-MIGR1的增殖起促进作用。
- 陈熙钟梁肖青李春莉李亚娟王海霞冯文莉
- 关键词：RNA干扰BCR-ABL细胞增殖
- 融合蛋白TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA的原核表达、纯化及其生物学活性
- 2014年
- 目的原核表达、纯化融合蛋白TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA,并检测其生物学活性。方法以pET32a(+)CTP-OD-HA为模板,PCR扩增OD序列中的第1-87 bp和第190-216 bp序列,并通过重叠PCR连接成为新序列,命名为OD1,克隆至pET32a(+)载体,构建原核表达质粒pET32a(+)CTP-OD1-HA;再分别以pET32a(+)CTP-OD-HA和pET32a(+)CTP-OD1-HA质粒为模板,PCR扩增CTP-OD-HA和CTP-OD1-HA片段,分别克隆至表达载体pCOLDTF-DNA,构建质粒pCOLD-TF-CTP-OD-HA和pCOLD-TF-CTP-OD1-HA,转化E.coli BL21,IPTG诱导表达TF-CTPOD-HA和TF-CTP-OD1-HA融合蛋白;表达的融合蛋白经镍离子亲和层析纯化和脱盐浓缩后,采用MTT法和DAPI染色检测两种融合蛋白对K562细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用。结果重组原核表达质粒pCOLD-TF-CTP-OD-HA和pCOLD-TF-CTP-OD1-HA经菌落PCR及测序证实构建正确;表达的TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA融合蛋白相对分子质量分别约为67 000和63 000,主要为可溶性表达,表达量分别占总菌体蛋白的35%和20%,脱盐浓缩后,纯度分别约为98%和95%,均可与鼠抗HA单克隆抗体特异性结合;TF-CTP-OD-HA和TF-CTP-OD1-HA对K562细胞的增殖抑制率分别为34%和31%,与PBS对照组比较,差异有统计学意义(P<0.001);TF-CTP-OD-HA和TFCTP-OD1-HA处理的K562细胞胞核均具有细胞凋亡的典型特征。结论原核表达并纯化了TF-CTP-OD1-HA融合蛋白,该蛋白具有与TF-CTP-OD-HA相似的生物学活性,为今后开发治疗慢性粒细胞白血病的小分子多肽药物提供了新的策略。
- 王海霞肖恒陶崑钟梁李亚娟黄世峰冯文莉
- 关键词：融合蛋白纯化生物学活性
- NEDD9在上皮性卵巢癌恶性生物学行为中的作用及机制的初步研究
- 卵巢癌是女性生殖系统最常见的三大恶性肿瘤之一，其死亡率高居妇科恶性肿瘤之首，其中，上皮性卵巢癌（Epithelial ovarian cancer，EOC）是卵巢癌最常见的病理类型，约占所有卵巢癌的80%以上。因为卵巢深...
- 王海霞
- 关键词：上皮性卵巢癌RNA干扰SHRNA上皮性卵巢癌上皮性卵巢癌增殖信号通路
- 文献传递
- 重组腺病毒Ad5-hSH2抑制Bcr-AbI Y177磷酸化对白血病K562细胞增殖的影响
- ＜正＞目的:具有强烈激活酪氨酸激酶活性的Bcr-Abl融合蛋白可异常激活其下游RAS-MAPK、PI3K-AKT等多条细胞信号转导途径,导致血细胞的恶性转化。本课题构建并鉴定与Bcr-Abl Y177磷酸化位点相关的SH...
- 李亚娟王海霞史静彭智罗红伟罗秋平冯文莉
- 文献传递
- 重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP及其突变体的构建与鉴定被引量：10
- 2011年
- 目的构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HA标签的SH2基因重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP及其突变体Ad5-hSH2mt-EGFP,并观察其对K562细胞增殖的影响。方法设计并化学合成引物,采用RT-PCR法扩增hSH2基因,重叠PCR法扩增hSH2mt基因,分别克隆至pAdTrack-CMV,构建穿梭质粒,经PmeⅠ酶切,转化感受态pAdEasy-BJ5183,在细菌内同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒质粒pAd5-hSH2-EGPF和pAd5-hSH2mt-EGPF,PacⅠ酶切后转染AD293细胞进行包装,获得重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP,扩增病毒,测定滴度并经PCR和Western blot鉴定。重组腺病毒感染K562细胞,MTT法检测病毒对K562细胞增殖活性的影响。结果重组腺病毒质粒pAd5-hSH2-EGFP和pAd5-hSH2mt-EGFP经酶切鉴定构建正确;重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP的滴度均可达1.6×1012;PCR结果表明,2种重组腺病毒包装和扩增成功,Western blot结果表明,重组腺病毒携带的目的基因能够在AD293细胞中表达;MTT检测证实,Ad5-hSH2-EGFP对K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。结论已成功构建重组腺病毒Ad5-hSH2-EGFP和Ad5-hSH2mt-EGFP,Ad5-hSH2-EGFP能在体外明显抑制K562细胞的增殖,为进一步探讨SH2基因对慢性粒细胞白血病的治疗作用及其机制奠定了基础。
- 史静彭智罗红伟曹唯希陶崑李亚娟王海霞冯文莉
- 关键词：重组腺病毒K562细胞细胞增殖
- 融合肽CTP-OD1和CTP-OD2对K562和K562G01细胞凋亡作用及分子机制研究
- 2013年
- 目的探讨融合肽CTP-OD1和CTP-OD2对伊马替尼(imatinib)敏感和耐药的慢性粒细胞白血病细胞株(K562、K562G01)的促凋亡生物学效应及其分子机制。方法将CTP-OD1、CTP-OD2融合肽分别处理K562和K562G01细胞,用瑞氏染色和DAPI染色检测两种细胞的凋亡形态学变化;western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及pBcr-Abl、pStat5、pCrkL变化。结果 CTP-OD1和CTP-OD2处理K562和K562G01细胞后,胞浆出现空泡,细胞核碎裂,染色质浓缩、边缘化;western blot结果表明,与阴性对照组相比,融合肽处理组Bax蛋白表达上调(P<0.05),Bcl-2、pBcr-Abl、pStat5、pCrkL蛋白均表达减少(P均<0.05)。结论 CTP-OD1和CTP-OD2通过抑制Bcr-Abl激酶活性促进imatinib敏感株K562和耐药株K562G01细胞凋亡。
- 王海霞肖恒曹唯希陶崑刘鑫李会黄世峰冯文莉
- 关键词：融合肽细胞凋亡
