王小平
- 作品数：5 被引量：17H指数：3
- 供职机构：南方医科大学检验与生物技术学院抗体工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 抗羊口疮病毒蛋白ORFV086多克隆抗体的制备及其应用被引量：4
- 2014年
- 本试验旨在克隆表达羊口疮病毒(ORFV)蛋白ORFV086,制备兔抗ORFV086蛋白多克隆抗体并检测ORFV086蛋白的表达。以ORFV基因组DNA为模板,利用PCR方法扩增ORFV086的基因片段,将其克隆入原核表达载体pET-33b(+)。将构建的pET33b-086重组表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)pLys感受态细胞,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定融合蛋白的表达,以纯化蛋白作为免疫原,免疫新西兰大耳白兔制备多克隆抗体。应用ELISA和Western blotting方法对所得抗体进行检测。结果显示,重组蛋白pET33b-086主要以包涵体形式存在,分子质量约为100ku;目的蛋白经切胶纯化回收后作为免疫原制备的多克隆抗体效价达1∶128000;纯化的多克隆抗体可用于检测重组及天然ORFV086蛋白,特异性好。本试验制备了ORFV086多克隆抗体,为深入研究ORFV086蛋白在羊口疮病毒感染过程中的作用奠定了基础。
- 王小平郝文波罗树红宁章勇
- 关键词：羊口疮病毒原核表达包涵体多克隆抗体
- 柱上切除GST标签制备幽门螺杆菌Lpp20蛋白被引量：1
- 2012年
- 目的表达幽门螺杆菌Lpp20-GST融合蛋白,获取切除GST标签的重组蛋白。方法采用异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导重组表达质粒Lpp20/pGEX-4T-1在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达,收集菌体并采用反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌3种细胞破碎方法,表达产物在谷胱甘肽琼脂糖树脂4B柱上纯化,利用凝血酶切除GST标签,用鼠抗Lpp20单克隆抗体进行纯化产物western blot鉴定。结果高效表达出Lpp20-GST融合蛋白,相对分子质量约为4.5 kDa,产物以部分可溶性形式表达,凝血酶成功切除GST标签,纯化产物能被鼠抗Lpp20单克隆抗体识别。结论凝血酶柱上切除GST标签获得目的蛋白。
- 姜茵王小平何殿殿李妍
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20凝血酶纯化
- 羊口疮病毒蛋白ORFV035的表达、纯化和多克隆抗体的制备被引量：5
- 2017年
- 克隆表达羊口疮病毒蛋白ORFV035,并制备其多克隆抗体,为后续对病毒复制、装配、形态发生和成熟过程的研究奠定基础。PCR扩增羊口疮病毒ORFV035基因,将其与质粒pET-30a(+)经Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET30a-035。重组质粒经双酶切和测序鉴定,转化感受态大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE鉴定蛋白表达情况。表达产物进行超声破碎和Ni柱纯化,纯化后目的蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。成功构建了重组质粒pET30a-035,在大肠杆菌BL21中以包涵体形式高效表达。包涵体洗涤、溶解后进行Ni柱纯化,得到纯度较高的ORFV035-his融合蛋白。以纯化蛋白免疫小鼠获得多克隆抗体。Western blot检测显示该多抗可以识别天然ORFV035蛋白。成功诱导表达、纯化ORFV035蛋白并制备ORFV035多克隆抗体。
- 陈慧芹王小平罗树红王丽洁陈倩倩郝文波
- 关键词：羊口疮病毒纯化多克隆抗体
- 痘苗病毒主要核心蛋白水解的研究进展
- 2015年
- 痘苗病毒（vaccinia virus,VV）是痘病毒科正痘病毒属的dsDNA病毒,具有独特的形态及宿主细胞质复制位点[1].其病毒颗粒有4个结构组分：核心、侧体、外膜和包膜（只存在细胞外包膜病毒中）[2].该病毒的基因组大约185 - 200kb,编码200多种不同的病毒蛋白[3].VV在复制晚期（即病毒DNA合成后）发生了一系列复杂反应,用以形成成熟的病毒粒子[4].
- 王小平郝文波罗树红
- 关键词：痘苗病毒核心蛋白病毒粒子
- 幽门螺杆菌Lpp20融合蛋白的表达、标签切除及鉴定被引量：7
- 2011年
- 目的:利用GST融合基因表达系统表达Lpp20-GST融合蛋白,并利用凝血酶切除GST标签。方法:IPTG诱导重组质粒Lpp20/pGEX-4T-1在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,菌体经反复冻融、溶菌酶裂解及超声破菌后,发现Lpp20-GST融合蛋白以部分可溶性的形式表达。采用GST蛋白纯化系统对其纯化,得到Lpp20-GST融合蛋白,再用凝血酶进行GST标签的切除,所得产物进行Western Blot鉴定。结果:高效表达出Lpp20-GST融合蛋白的相对分子质量约4.5kDa,凝血酶成功切除了GST标签,Western Blot证实Lpp20蛋白能被鼠抗Lpp20单克隆抗体识别。结论:成功表达和纯化了重组Lpp20蛋白,为深入研究Lpp20的功能奠定了基础。
- 姜茵奚悦王小平何殿殿李妍
- 关键词：幽门螺杆菌LPP20纯化
