涂建欣 作品数:9 被引量:27 H指数:3 供职机构: 温州医科大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 浙江省自然科学基金 温州市科技局科研基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
一种快速检测沙眼衣原体的实时荧光定量PCR检测试剂盒及应用 本发明公开了一种快速检测沙眼衣原体的实时荧光定量PCR检测试剂盒及应用,涉及一种沙眼衣原体基因定量检测技术。本发明由DNA裂解液、荧光定量PCR反应液、标准阳性品、阴性质控标准品组成。荧光定量PCR反应液含有正反向引物和... 张丽芳 薛向阳 朱珊丽 朱小春 涂建欣文献传递 沙眼衣原体主要外膜蛋白_(21-387)的原核表达及其免疫原性 被引量:1 2015年 目的:探讨沙眼衣原体(Ct)E血清型主要外膜蛋白(MOMP21-387)的原核表达及其免疫原性。方法:利用PCR方法扩增Ct E血清型MOMP第21至第387氨基酸的基因序列,克隆至p ET21a(+)原核表达载体构建重组质粒p ET21a(+)/MOMP21-387,并进行原核表达和纯化,经SDS-PAGE和Western blot法分析鉴定后,通过BALB/c小鼠免疫检测MOMP21-387蛋白的免疫原性,即通过ELISA法检测小鼠血清Ig G和生殖道分泌物Ig A抗体反应,乳酸脱氢酶(LDH)法检测其脾细胞的特异性杀伤作用。结果:在原核表达系统成功表达了MOMP21-387融合蛋白,经SDS-PAGE及Western blot法鉴定在相对分子质量(Mr)约44 000处出现特异性条带;并经NiNTA亲和层析的方法获得了纯化的MOMP21-387融合蛋白,免疫BALB/c小鼠可诱导产生特异性血清Ig G抗体和生殖道分泌物Ig A抗体,至第6周达到高峰,MOMP21-387组的Ig G和Ig A抗体较PBS组差异均有统计学意义(P<0.05);LDH检测结果显示,MOMP21-387组小鼠脾细胞对靶细胞的杀伤率,在10:1、20:1和40:1和80:1时均明显高于PBS组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:Ct E型MOMP21-387融合蛋白具有良好的免疫原性,为基于MOMP21-387的Ct的ELISA法检测方法的开发和疫苗研究奠定了基础。 刘巧琼 涂建欣 林晓云 熊一融 朱珊丽 陈韶 张丽芳关键词:沙眼衣原体 主要外膜蛋白 原核表达 免疫原性 雷公藤多苷片联合托珠单抗治疗类风湿关节炎临床分析 被引量:12 2015年 目的:观察雷公藤多苷片治疗类风湿关节炎的临床疗效及药物不良反应。方法:将110例类风湿关节炎患者采用随机数字表法分为对照组及观察组各55例。对照组给予托珠单抗治疗,观察组在对照组治疗的基础上给予雷公藤多苷片治疗。对比两组临床疗效及药物不良反应发生率。结果:两组治疗前晨僵时间、关节疼痛度、关节肿胀度评分、血沉及血清C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、Th1及Treg差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,观察组患者晨僵时间、关节疼痛度及关节肿胀度评分、CRP、RF、ESR、IL-1、IL-6、IL-8、TNF-α、Th1水平均显著低于对照组(P<0.05),Treg显著高于对照组(P<0.05)。对照组药物不良反应发生率为21.82%,观察组为25.45%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在类风湿关节炎的治疗中应用雷公藤多苷片可有效提高临床疗效,且不增加药物不良反应发生率。 李永吉 张挺 朱晓芳 涂建欣 金怡 夏晓茹关键词:雷公藤多苷片 类风湿关节炎 临床疗效 药物不良反应 胃癌组织中人巨细胞病毒感染及其临床意义 被引量:5 2014年 目的:初步探讨人巨细胞病毒(HCMV)感染与胃癌的关系。方法:采用化学发光(CLIA)法对胃癌组(n=80)及健康对照组(n=80)的外周血清进行HCMV Ig G、Ig M抗体检测;巢式PCR技术检测22例胃癌患者的肿瘤及癌旁正常胃黏膜组织标本中的HCMV UL55基因;统计分析HCMV感染与胃癌临床特征的关系。结果:胃癌组血清HCMV-Ig G阳性率为95%(76/80),HCMV-Ig M阳性率为6.25%(5/80);在健康对照组血清中,HCMV-Ig G阳性率为97.5%(78/80),HCMV-Ig M阳性率为3.75%(3/80),HCMV Ig G、Ig M在胃癌组与健康对照组血清中差异无统计学意义(P>0.05)。HCMV UL55阳性检出率在22例胃癌组织中为50%(11/22),在相应正常胃黏膜组织中为9.09%(2/22),胃癌组织HCMV阳性检出率较癌旁正常组织显著升高(P<0.01)。此外,未发现HCMV感染与胃癌的TMN分期、组织病理分化及肿块大小有显著性关联。结论:胃癌组织中存在HCMV感染,且HCMV相较于癌旁正常组织更倾向感染癌灶,提示HCMV感染可能参与胃癌的发生发展过程。 金劲激 涂建欣 吴明 马海广 沈贤 薛向阳关键词:胃肿瘤 人巨细胞病毒 膝骨关节炎软骨下骨髓水肿样病变的危险因素研究 被引量:2 2013年 目的探讨膝骨关节炎磁共振出现软骨下骨髓水肿样病变(BMLs)的危险因素。方法 41例膝骨关节炎患者纳入研究,采用WORMS法评估膝关节磁共振软骨下BMLs,采用Logistic回归分析BMLs的危险因素。结果体重指数、年龄是膝关节软骨下BMLs的危险因素,体重指数(r=0.437,P=0.004)、年龄(r=0.358,P=0.022)分别与BMLs呈正相关。结论体重指数、年龄是膝骨关节炎软骨下BMLs的危险因素,体重指数、年龄越大,软骨下BMLs也越严重。 熊江彪 陈静 涂建欣 朱小春关键词:骨关节炎 体重指数 HPV16型E7重组蛋白的表达及其多克隆抗体的制备 被引量:7 2014年 目的制备人乳头瘤病毒(HPV)16型E7原核表达蛋白及其多克隆抗体。方法用PCR方法从宫颈癌组织中扩增HPV16 E7基因,克隆至pET21a(+)载体并构建pET21a(+)/HPV16 E7重组质粒,测序鉴定;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),经异丙基硫代-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导后表达重组蛋白,用Ni-NTA亲和层析法纯化并经SDS-PAGE及Western blot分析鉴定;纯化的HPV16 E7重组蛋白免疫日本大耳白兔制备多克隆抗体,用ELISA检测多克隆抗体的效价,并用Western blot法及免疫荧光技术分析多克隆抗体的特异性。结果 HPV16 E7重组蛋白可通过原核表达系统进行表达和纯化;通过兔免疫后可制备特异性的多克隆IgG抗体,效价达1∶30 000;经Western blot法和免疫荧光染色结果证实兔多克隆抗体可特异性识别HPV16 E7蛋白。结论成功进行了HPV16 E7原核表达并制备了HPV16 E7兔多克隆抗体。 王冰冰 涂建欣 吕艳 侯柏龙 刘巧琼 林晓云 陈韶 薛向阳 朱珊丽 张丽芳关键词:人乳头瘤病毒 E7蛋白 多克隆抗体 基于沙眼衣原体MOMP蛋白及其基因的诊断方法研究 目的: 1.构建沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)主要外膜蛋白(major outermembrane protein,MOMP)重组质粒,并进行原核表达和鉴定,进一步检测其免疫原性 2.... 涂建欣关键词:沙眼衣原体 主要外膜蛋白 原核表达 免疫原性 系统性红斑狼疮 文献传递 乙型肝炎病毒C基因多态性及其蛋白特性分析 2012年 目的:调查温州医学院大学生人群乙型肝炎病毒(HBV)C基因多态性及其HBc蛋白特性变化,为了解乙肝病毒核心抗原(HBcAg)变异提供理论依据。方法:采用HBV-C基因特异性引物对21份温州医学院大学生HBV携带者(血清学检测为大三阳患者)血清标本进行PCR扩增鉴定,并取19份PCR检测阳性产物直接测序;进一步用Vector NTI 8.0和DNA Star软件分析HBV-C基因多态性及HBc蛋白特性的变化。结果:21份标本中,HBV-C DNA阳性率达90.48%(19/21),与标准基因序列(Gen Bank X01587)比较,HBV-C基因同源性为93.3%~95.1%。HBV-C基因分别形成51种突变模式,其中一处由于核苷酸的改变,翻译的氨基酸也发生了相应的改变,此处氨基酸序列的第130处脯氨酸(Pro)突变为苏氨酸(Thr),其余标本均为同义突变;但突变处编码蛋白在亲水性、表面可及性及抗原性与标准株相比较无明显变化。结论:温州医学院大学生HBV携带者的HBV C基因具有多态性,但是由C基因决定的核心蛋白序列相对保守。 冯娟 吕艳 陈昊 涂建欣 朱珊丽 薛向阳 张丽芳关键词:乙型肝炎病毒 C基因 突变 多态性 EB病毒对系统性红斑狼疮患者临床表现及Th1/Th2平衡的影响 2016年 目的 探讨EBV对SLE患者临床表现及Th1/Th2平衡的影响。方法 选择2013年1月~2015年12月在我院治疗的系统性红斑狼疮患者171例为研究组,另选择在我院进行健康体检者60例为对照组。SLE患者根据EBV-DNA结果分为EBV阳性亚组和EBV阴性亚组。分析EBV感染对患者临床表现的影响及对Th1/Th2平衡的影响。结果 SLE患者EBV-DNA阳性率显著高于对照组,差异有统计学意义(P〈0.05)。EBV阳性亚组SLE患者皮疹、关节炎、血液系统受累发生率、抗Rib-P抗体、抗Smith抗体阳性率及高免疫球蛋白血症发生率显著高于EBV阴性亚组,差异有高度统计学意义(P〈0.01)。SLE患者EBV阳性亚组与阴性亚组及对照组Th2水平及Th1/Th2水平,IL-4水平比较,差异有高度统计学意义(P〈0.01)。结论 EBV感染可能通过影响Th1/Th2平衡参与SLE发生发展,并与SLE患者皮疹、关节炎和血液系统损害有关。 涂建欣 朱小春 孙莉关键词:EB病毒 系统性红斑狼疮 TH1 TH2