欧阳东云
- 作品数：48 被引量：162H指数：8
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 负载野生型p53抗原肽HLA-A^＊2402四聚体的制备和鉴定
- 2010年
- 目的:制备负载野生型p53抗原肽的HLA-A*2402四聚体,用于检测卵巢肿瘤患者p53特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL)。方法:在p53125-134抗原肽TYS和轻链β2微球蛋白存在时,利用稀释法复性获得负载p53125-134抗原肽(TYSPALNKMF,TYS)的可溶性单体,经生物素酰化并纯化后与荧光素标记的链亲和素按4∶1的比例混合形成HLA-A*2402/TYS四聚体,以流式细胞仪检测特异性CTL的频率。结果:流式细胞术分析显示,卵巢癌患者外周血中可检测减低频率的p53125-134TYS抗原肽特异性CTL。结论:成功制备HLA-A*2402/TYS四聚体。
- 王笑迎查庆兵何贤辉欧阳东云徐丽慧郭贺高琦
- 关键词：四聚体细胞毒T淋巴细胞
- 中国恒河猴Mamu-B*1703/EGFP在K562和B16细胞中的表达及分布被引量：3
- 2010年
- 目的分析恒河猴主要组织相容性复合体(major histocompatibility complex,MHC)Ⅰ类分子重链的亚细胞分布,建立适于体外研究恒河猴MHCⅠ类分子表达和抗原呈递功能的细胞系。方法将含Mamu-B*1703重链基因真核表达载体pEGFP-N1分别转染K562和B16细胞,细胞收集后以W6/32单克隆抗体或抗Mamu-B*1703抗血清及PE标记二抗染色,利用激光共聚焦显微镜和流式细胞术分析Mamu-B*1703复合体在细胞内和细胞表面的表达。结果在K562和B16细胞的细胞质内均可观察到与Mamu-B*1703重链基因融合表达的绿色荧光蛋白激发后的绿色荧光,即2种细胞均可表达外源Mamu-B*1703重链分子;但通过藻红蛋白标记的抗MHCⅠ类分子复合体抗体染色显示,Mamu-B*1703复合体仅表达于K562细胞表面,而不表达于B16细胞表面。结论Mamu-B*1703重链可与人K562细胞而不能与小鼠B16细胞内的βm轻链结合组装成复合体,表达于细胞表面,提示研究恒河猴的MHCⅠ分子表达应利用人类的细胞株。
- 欧阳东云徐丽慧高琦郭贺何贤辉
- 关键词：中国恒河猴转染
- 大黄素等5种蒽醌衍生物的体外抗HIV-1活性(英文)被引量：15
- 2010年
- 目的:检测大黄素、大黄酸、大黄酚、大黄素甲醚和芦荟大黄素等蒽醌衍生物的体外抗HIV-1活性。方法:在96孔培养板中加入不同浓度的衍生物,在倒置显微镜下观察HIV-1ⅢB急性感染的C8166细胞形成合胞体的数量,并用ELISA的方法检测培养上清中HIV-1 p24的抗原水平,得到相应的50%抗HIV-1有效浓度(EC50)。结果:大黄素等蒽醌衍生物有较好的体外抗HIV-1活性,表现为:(1)抑制HIV-1ⅢB感染诱导的合胞体形成,EC50均值分别为(11.44±0.93)μmol/L(大黄素),(51.28±2.86)μmol/L(大黄酸),(90.58±2.30)μmol/L(大黄酚),(8.59±0.38)μmol/L(大黄素甲醚)和(0.89±0.08)μmol/L(芦荟大黄素);(2)抑制HIV-1ⅢB急性感染的C8166细胞p24抗原产生,EC50均值分别为(11.61±0.56)μmol/L(大黄素),(12.35±4.73)μmol/L(大黄酸),(39.63±2.87)μmol/L(大黄酚),>250μmol/L(大黄素甲醚)和(2.75±0.20)μmol/L(芦荟大黄素)。结论:大黄素等5种蒽醌衍生物具有不同水平的体外抗HIV-1活性,其中以芦荟大黄素的抑制活性最强。
- 欧阳东云刘春永曾耀英何贤辉曾祥凤
- 关键词：蒽醌类大黄素大黄素甲醚芦荟大黄素
- ASCT2胞外域ECL2原核可溶性表达条件的优化及其纯化
- 2010年
- 目的构建重组人ASCT2胞外域ECL2融合蛋白的原核表达载体，优化其在大肠埃希菌中可溶性表达的条件，并获得纯化的ECL2蛋白。方法以PCR方法扩增编码ECL2的DNA片段，插入至pET-41b载体中，构建ECL2的原核表达载体，转化至大肠埃希菌，优化可溶性表达条件，GSH—Agarose亲和层析纯化并鉴定，与MCF-7细胞结合活性的测定。结果免疫印迹显示，ECL2融合蛋白既表达于包涵体中，也能以可溶性形式表达。随IPTG浓度的增高，可溶性表达水平提高；培养温度为28℃和33℃时可溶性产物高于37℃；而随诱导时间的延长至12h以上，可溶性表达量下降。可溶性表达优化条件为：温度33℃、IPTG浓度0．4mmol／L、诱导时间4h。经亲和层析获得高纯度ECL2蛋白并具有与MCF-7细胞结合活性。结论优化了ECL2融合蛋白的可溶性表达条件，通过亲和层析一步法可获得高纯度融合蛋白。
- 陈清欧阳东云徐丽慧耿梅张延亭何贤辉
- 关键词：胞外结构域可溶性表达
- OX40L在小鼠B16黑素瘤细胞中表达及对活化淋巴细胞凋亡影响
- 2009年
- 目的:构建OX40L的真核表达载体,分析其在B16细胞中的表达,研究OX40L对活化T淋巴细胞凋亡的影响。方法:以小鼠C57BL/6脾脏的cDNA为模板,PCR扩增小鼠OX40L基因,构建真核表达载体pVAX1-OX40L,转染B16细胞后,荧光染色检测OX40L的表达;利用AnnexinV-PE凋亡试剂盒,检测B16黑素瘤细胞-淋巴细胞体外混合培养中对活化淋巴细胞凋亡的影响。结果:成功构建OX40L的真核表达载体,并转染B16细胞中,流式细胞术和激光共聚焦显微术均可检测到OX40L表达于B16细胞表面。淋巴细胞体外混合培养显示,表达OX40L的B16细胞组活化淋巴细胞的凋亡率为6.57%,而空质粒转染组为17.24%。结论:OX40L能表达于B16细胞表面,并能显著抑制活化淋巴细胞凋亡。
- 高琦徐丽慧郭贺欧阳东云王笑迎何贤辉
- 关键词：OX40L黑素瘤淋巴细胞混合淋巴细胞培养
- 葫芦素E对脂多糖诱导RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响及作用机制被引量：8
- 2012年
- 分析葫芦素E(CuE)对脂多糖(LPS)诱导的小鼠RAW264.7巨噬细胞炎症反应的影响,研究其抗炎作用的分子机制。采用改良MTT法检测RAW264.7细胞的增殖;以碘化丙锭染色检测CuE对细胞周期的影响;采用细胞内细胞因子染色法分析肿瘤坏死因子(TNF-α)的表达;免疫荧光染色分析胞内Actin的结构;应用免疫印迹法检测CuE对G-肌动蛋白(G-ac-tin)及核转录因子NF-κB核转位的影响。实验结果显示CuE对RAW264.7细胞的增殖具有剂量依赖性抑制作用,并降低细胞内G-actin的水平;CuE明显阻止LPS诱导的细胞伸展和伪足形成,使细胞周期阻滞于G2/M期。同时,CuE还明显抑制LPS活化的RAW264.7细胞表达促炎因子TNF-α,并显著降低LPS诱导的转录因子NF-κB的核转位作用。这些结果表明,CuE通过破坏RAW264.7巨噬细胞的肌动蛋白细胞骨架,引起细胞周期阻滞,并抑制LPS诱导的NF-κB核转位以及TNF-α的表达,从而发挥抗炎作用。
- 乔静徐丽慧何健欧阳东云何贤辉
- 关键词：RAW264.7细胞脂多糖肌动蛋白细胞骨架
- 丙戊酸钠对人外周血T淋巴细胞细胞因子表达的影响(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的:研究丙戊酸钠(VPA)对人外周血T淋巴细胞的活化、凋亡及细胞因子表达的影响。方法:双色荧光抗体染色结合流式细胞术分析VPA对多克隆刺激剂二丁酸佛波酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激下的人外周血T细胞CD69表达的影响,DiOC6(3)染色检测VPA对T细胞凋亡的影响。利用胞内细胞因子染色检测T细胞IL-2、IL-4、IFN-γ和TNF-α的表达,以探讨VPA的保护机制。结果:VPA(1和5 mmol/L)对PDB和Ion诱导的人外周血T细胞CD69的表达具有明显的促进作用(P<0.01)。DiOC6(3)染色结果表明VPA(1和5 mmol/L)可以增强线粒体膜电势,抑制T细胞活化诱导的凋亡,高浓度则作用相反。胞内细胞因子染色分析显示,VPA在低浓度时能明显促进IL-2表达而高浓度时则抑制。同时,VPA能显著促进IFN-γ和TNF-α的表达(P<0.05),并呈剂量依赖性,而对IL-4表达的影响较小。结论:VPA对多克隆刺激剂诱导的人外周血T细胞的活化和凋亡具有双向调节作用,诱导IL-2、IFN-γ和TNF-α的表达。
- 耿梅王飞鹏欧阳东云徐丽慧陈清张延亭何贤辉
- 关键词：丙戊酸CD69细胞因子类淋巴细胞
- 葫芦素E对人外周血单个核细胞体外活化及细胞因子表达的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:分析葫芦素E(Cuc E)对二丁酸佛波醇酯(PDB)和离子霉素(Ion)刺激的人外周血单个核细胞(PBMC)活化及促炎因子表达的影响,探讨其潜在的抗炎效应及作用机制.方法:利用流式细胞术分析人外周血PBMC活化抗原CD69和CD25表达,用流式微球陈列检测白介素2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)表达的变化.结果:Cuc E能明显抑制PDB和Ion刺激引起的CD3+T细胞早期活化标志分子CD69和中期活化分子CD25的表达;同时,Cuc E以剂量依赖方式抑制PDB和Ion诱导的IL-2、TNF-α和IFN-γ的表达.结论:Cuc E对人外周血CD3+T细胞的活化具有明显抑制作用,同时减少炎症相关细胞因子的表达,提示其通过对适应性免疫的调控发挥抗炎效应.
- 王力先张晓钰潘浩徐丽慧欧阳东云何贤辉
- 关键词：人外周血单个核细胞CD69CD25细胞因子
- 细胞自噬与炎症反应相互作用的研究进展被引量：28
- 2013年
- 细胞自噬是维持细胞内环境自稳的一种自我保护机制,是由溶酶体介导的降解细胞内受损的蛋白质或者细胞器的代谢过程。细胞自噬与炎症反应密切相关,模式识别受体Toll样受体的激活能够诱导细胞自噬的发生,而细胞自噬又对炎症反应有调控作用。同时细胞自噬与抗感染免疫密切相关,而细胞自噬的缺损是诱发炎症反应和炎症性疾病的一个重要因素。本文简要综述细胞自噬与炎症反应的相互作用,为研究细胞自噬调控炎症反应的机制提供参考。
- 何贤辉何健欧阳东云
- 关键词：细胞自噬炎症炎症性疾病
- 雪胆素乙通过破坏微丝结构和促进p21Cip1表达抑制前列腺癌PC-3细胞的增殖被引量：9
- 2012年
- 目的分析雪胆素乙(CuⅡb)对人前列腺癌PC-3细胞增殖及细胞周期的影响,探讨其作用机制。方法 MTS法检测CuⅡb 0.064～200μmol·L-1作用48 h后PC-3细胞增殖;CuⅡb 2和20μmol·L-1作用24 h,相差显微镜观察细胞形态;CuⅡb 2和20μmol·L-1作用48 h,流式细胞术分析细胞周期分布;免疫荧光染色分析CuⅡb 20μmol·L-1分别作用1,4和24 h后微丝和微管细胞骨架变化;免疫印迹法测定CuⅡb20μmol·L-1分别作用1,4和24 h后G肌动蛋白、F肌动蛋白、p21Cip1及细胞周期蛋白A,B1,E和D1的表达。结果 CuⅡb以浓度依赖方式抑制PC-3细胞的增殖(r=0.9817,P<0.05)。CuⅡb 20μmol·L-1作用48 h,使细胞周期阻滞于G2/M期,从溶剂对照组的(27.7±1.5)%上升为(45.3±1.8)%(P<0.01),相差显微镜见细胞发生明显收缩。CuⅡb 20μmol·L-1作用24 h,使G肌动蛋白水平显著下降,F肌动蛋白发生严重聚集(P<0.05),而对微管只有轻微影响。与溶剂对照组相比,CuⅡb 20μmol·L-1作用24 h后,细胞p21Cip1表达明显升高,细胞周期蛋白A表达显著下调,其他细胞周期蛋白表达上调(P<0.05)。结论 CuⅡb能明显抑制人前列腺癌PC-3细胞的增殖,其机制可能是通过诱导肌动蛋白聚集,破坏微丝骨架,促进抑癌因子p21Cip1表达,阻滞细胞周期的进程。
- 任帅徐丽慧曾龙辉欧阳东云何贤辉
- 关键词：前列腺癌细胞细胞周期阻滞
