杨瑞锋
- 作品数：10 被引量：29H指数：3
- 供职机构：西北农林科技大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学自动化与计算机技术化学工程更多>>
- 人骨形成蛋白2基因的克隆及序列测定被引量：1
- 2005年
- 为了获得人骨形成蛋白2(hBMP-2)基因,以GeneBank(NM001200)中的hBMP-2基因编码序列为依据设计引物,采用RT-PCR技术从人胎盘中获得hBMP-2基因cDNA,并将其重组到pMD18-T载体中,转化到大肠杆菌JM109后挑选阳性克隆,经双酶切鉴定并进行测序。结果表明,获得的基因片断为hBMP-2全编码序列,同源性为99.9%。
- 华松贾战生武浩扈苯荃杨瑞锋张涌
- 关键词：人骨形成蛋白2RT-PCR克隆
- 应用RT-nested PCR检测猪传染性胃肠炎病毒被引量：11
- 2005年
- 根据GenBank中已发表的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)基因序列,利用Primer5.0程序软件,设计并合成了M基因的2对引物,以mRNA为模板,通过RT-PCR,RT-nestedPCR方法,成功扩增出长度为1328bp和1037bp的TGEV目的片段,但未扩增出猪传染性腹泻病毒(PEDV)片段。在优化RT-PCR反应条件的基础上,建立了快速检测TGEV的诊断方法。结果表明,RT-nestedPCR方法可用于检测猪传染性胃肠炎病毒,而且此方法简单省时、灵敏性高,可以作为检测RNA病毒的一种分子生物学方法。
- 王玉洁刘金龙彭树英杨瑞锋张涌
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒RT-PCRPCRM基因
- 牛β-酪蛋白基因的克隆及乳腺特异性表达载体的构建被引量：1
- 2005年
- 利用PCR技术分3段克隆了长约9．7kb的牛β-酪蛋白基因,分另4克隆在pGEM-T easy Vector的T位点。经NCBI Blastn分析,与牛β-酪蛋白基因相应区段的同源性为98％。这3段序 列包含完整的5’侧翼序列、前8个外显子及第8个内含子的部分序列。以此构建了两个乳腺特 异性表达栽体:利用第1段和第2段共有的酶切位点将两段融合,作为5’调控区(6．8kb),第3段 和实验室已有的600 bp的加尾信号通过重组PCR拼接作为3’调控区(3．4kb)构建了一乳腺特异 性表达栽体;以第一段作为5’调控区,实验室已有的600bp加尾信号作为3’为调控区构建了另一 乳腺特异性表达载体。可以应用于进一步乳腺生物反应器的研制。
- 杨瑞锋刘金龙安志兴李志艳张涌
- 关键词：克隆
- 猪传染性胃肠炎病毒S与M基因融合表达载体及IRES连接双基因共表达载体的构建被引量：3
- 2006年
- 目的:研究如何提高猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)中主要抗原基因S与M基因对猪传染性胃肠炎的免疫调节作用,进一步探究基因疫苗的有效开发途径。方法:通过两种方法应用牛β酪蛋白启动子构建S和M融合基因表达载体以及构建IRES连接M和S双基因共表达核酸疫苗载体。结论:成功构建好M和S融合基因表达载体及IRES连接的M和S双基因真核共表达载体,并为利用乳腺生物反应器生产可食性疫苗提供有效措施。
- 贺小英彭树英杨瑞锋张涌
- 关键词：核酸疫苗IRES
- 动物乳腺生物反应器研究进展被引量：5
- 2004年
- 针对利用动物乳腺生物反应器技术生产重组蛋白,具有生产效率高和经济效益明显的特点。综述了制备乳腺生物反应器时表达载体构建和基因转移两个关键环节的研究现状,并就基因打靶和体细胞克隆技术的结合探讨了乳腺生物反应器的发展趋势。
- 舒建洪刘津胡先春杨瑞锋张涌
- 关键词：乳腺生物反应器转基因基因打靶体细胞克隆
- 猪传染性胃肠炎病毒主要抗原基因S与M双基因共表达载体的构建被引量：3
- 2007年
- 研究如何提高猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)中主要抗原基因S与M对猪传染性胃肠炎的免疫调节作用,进一步探究基因疫苗的有效开发途径。方法:通过两种方法应用牛β-酪蛋白启动子构建TGEV的S和M融合基因表达载体以及构建IRES连接M和S双顺反子共表达核酸疫苗载体。结果成功构建好M和S融合基因表达载体及IRES连接的M和S双顺反子真核共表达载体,并为利用乳腺生物反应器生产可食性疫苗提供有效措施。
- 贺小英彭树英刘艳春杨瑞锋张涌
- 关键词：核酸疫苗IRES猪传染性胃肠炎病毒
- 牛乳腺核基质附着区的克隆及其功能研究
- 2006年
- 从奶牛的全血中提取基因组DNA,参照GenBank已有序列,通过Prim er5.0和Vector 7.0辅助设计一对引物,克隆了牛乳腺核基质附着区(BMR s)。利用生物学软件对其进行初步分析后,TA克隆于pMD 18-T vector上。上下游引物5′端分别引入Kpn2Ⅰ和XhoⅠ酶切位点,将所得的BMR s克隆到pEGFP-C1的报告基因下游,构建成表达载体pBE,脂质体法转染牛耳成纤维细胞。以转染pEGFP-C1的牛耳成纤维细胞作为对照,发现所克隆的BMR s功能明显,在消除位置效应、增强报告基因表达方面具有一定的作用。
- 杨瑞锋舒建洪李志艳刘金龙张涌
- 关键词：核基质附着区克隆细胞表达
- 人t-PA指形区缺失体乳腺特异性表达载体的构建及细胞表达研究
- 本研究以奶牛β-酪蛋白基因调控区为指导元件，以人组织型纤溶酶原激活剂指形区缺失体(t-PA指形区缺失体)为表达序列，构建了乳腺特异性表达载体pEBT。转染牛耳成纤维细胞，筛选获得稳定表达株。在载体pEBT的基础上，加入牛...
- 杨瑞锋
- 关键词：定向克隆抗性筛选纤溶酶原激活剂乳腺生物反应器
- 文献传递
- SOEing法在构建人瘦蛋白乳腺表达载体中的应用被引量：2
- 2004年
- 目的 :将奶牛CSN2 5′端启动子区与人瘦蛋白cDNA序列进行拼接 ,进而构建人瘦蛋白乳腺特异性表达载体。方法 :设计特殊的“巨型引物” ,运用PCR方法分别从质粒pBBC和pHL上扩增了牛CSN2 5′端启动子 ( 2 8kb)和有完整读码框的人瘦蛋白基因。利用改进的重叠区扩增基因拼接法 (SOEing法 ) ,将两个独立的片断进行了拼接。结果 :得到了两者线形融合基因 。
- 刘金龙刘津杨瑞锋张涌
- 关键词：SOEING乳腺启动子奶牛重叠区扩增基因拼接法
- 人溶菌酶基因cDNA的克隆和序列分析被引量：3
- 2006年
- 根据GenBank中的人溶菌酶(hLYZ)mRNA序列设计引物,以人胎盘组织总RNA为模板,通过RT-PCR方法扩增出长度为0.85 kb的hLYZ cDNA序列,经过序列测定表明所克隆的片段与已发表的hLYZ cDNA序列的同源性为99%。推导的氨基酸序列经blastp分析与人溶菌酶蛋白质前体的同源性为97%,成熟肽的同源性为99%,为进一步构建人溶菌酶基因乳腺特异性表达载体奠定了基础。
- 何晓宁彭树英杨瑞锋刘凤军郑月茂张涌
- 关键词：CDNA克隆
