杨玉莹
- 作品数：158 被引量：346H指数：10
- 供职机构：长江大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金湖北省“十一五”科技攻关项目湖北省自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生文化科学更多>>
- 肝脏特异性Pten基因敲除小鼠模型的制备及鉴定
- 2019年
- 目的为研究抑癌基因Pten在肝脏中的生物学功能,利用Cre/Loxp基因敲除技术建立肝脏特异性Pten基因敲除小鼠模型。方法将Ptenflox/flox小鼠与肝脏特异性表达Alb-Cre重组酶的小鼠进行交配,对F1代小鼠进行鉴定,筛选出基因型为Ptenflox/+/Alb-Cre的子代小鼠,将其与Ptenflox/flox小鼠进行交配,筛选出基因型为Ptenflox/flox/Alb-Cre的F2代小鼠,将Ptenflox/flox/Alb-Cre小鼠与Ptenflox/flox小鼠进行交配,获得F3代基因敲除小鼠,Ptenflox/flox/Alb-Cre小鼠为本实验所构建的肝脏特异性Pten基因敲除小鼠,Ptenflox/flox小鼠为对照小鼠。提取小鼠基因组DNA,通过PCR方法鉴定不同子代小鼠的基因型;提取小鼠肝脏、肺以及肾脏组织的总RNA和蛋白,利用Real-TimePCR和WesternBlot技术检测Pten基因在小鼠不同脏器中的mRNA和蛋白质表达水平。结果获得敲除小鼠基因型为Ptenflox/flox/Alb-Cre,和对照小鼠相比,Ptenflox/flox/Alb-Cre小鼠在肺和肾脏中Pten基因的mRNA水平及蛋白水平无明显变化,仅在肝脏中Pten水平显著低于Ptenflox/flox型小鼠。结论本研究利用Cre/Loxp技术成功构建了肝脏特异性Pten基因敲除小鼠,为在体内进一步研究Pten基因的功能提供了重要动物模型。
- 刘宏扬黄丽张昆丽翁长江翁长江
- 关键词：PTEN基因敲除
- 表达A亚群禽白血病病毒Gp85蛋白的乳酸菌的构建被引量：1
- 2021年
- 本研究旨在构建乳酸菌表达载体以研制A亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup A,ALV-A)的活菌疫苗,用于预防禽白血病。使用锚定表达载体构建2株分别表达gp85和gp85-DCpep基因的重组植物乳杆菌,以感染ALV-A的DF-1细胞的基因组DNA为模板,使用PCR方法扩增ALV-A Gp85蛋白的编码基因gp85,将树突状细胞靶向肽(DC-targeting peptide,DCpep)编码基因与gp85基因进行融合,获得gp85-DCpep基因;使用乳酸菌锚定表达载体pSIP409-pgsA’通过同源重组的方法构建重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85;经测序正确后将上述质粒分别电转化植物乳杆菌NC8感受态细胞,获得重组植物乳杆菌;使用SppIP诱导重组植物乳杆菌的表达,收集处于对数生长期的菌体,通过反复冻融获取细胞膜的蛋白样,采用Western blotting技术检测pgsA’-gp85-DCpep和pgsA’-gp85蛋白的表达情况。结果显示,试验成功获得基因片段gp85和gp85-DCpep,构建的重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85测序无突变和丢失情况,并成功电转到植物乳杆菌NC8感受态细胞中,使用SDS-PAGE和Western blotting技术在细胞膜蛋白样中检测到蛋白的表达,大小分别为48.3(pgsA’-gp85-DCpep)和47 ku(pgsA’-gp85)。本试验成功构建了重组质粒pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和pSIP409-pgsA’-gp85,获得的重组植物乳杆菌NC8-pSIP409-pgsA’-gp85-DCpep和NC8-pSIP409-pgsA’-gp85中的蛋白均成功表达,且具有反应原性,为后期深入研究重组植物乳杆菌在抗ALV-A感染中的保护机制奠定良好的基础。
- 李鼎伟高可丽曾扬方春杨玉莹刘晶梁雄燕
- 关键词：植物乳杆菌树突状细胞
- 布氏杆菌抗原蛋白pbp39基因重组穿梭质粒的构建与鉴定
- 2011年
- 为构建融合表达PBP39-P276的E.coli-分枝杆菌穿梭载体,分别以布氏杆菌(Brucella abortus)基因组DNA和PMD 18-T-p276质粒为模板,通过PCR扩增得到约1206bp的pbp39抗原基因和276bp的p276基因序列,将pbp39基因与穿梭表达质粒pMV361重组,得到重组质粒pMV361-pbp39,再将p276基因序列克隆至pMV361-pbp39中,得到重组质粒pMV361-pbp39-p276。质粒pMV361-pbp39-p276经PCR扩增鉴定证实,克隆基因pbp39和抗原基因p276正确插入载体pMV361。重组质粒pMV361-pbp39-p276可望在卡介苗(BCG)中分泌性表达布氏杆菌的免疫保护性抗原蛋白PBP39-P276,该质粒的构建成功为发展新型布氏杆菌疫苗奠定了基础。
- 钟蓓杨玉莹张西臣顾玉芳陈振威多婷
- 关键词：穿梭质粒
- REV囊膜蛋白的原核表达、抗体制备及鉴定被引量：1
- 2021年
- 【目的】禽网状内皮增生症病毒(reticuloendothelial virus,REV)囊膜蛋白与细胞表面受体结合启动病毒感染,并在REV的复制、致病过程中具有重要作用。为探索REV囊膜蛋白相关生物学特性,研究获得了高效表达的禽网状内皮增生症病毒囊膜蛋白,制备多克隆抗体。【方法】利用原核表达载体pET-28a和pGEX-6p-1表达REV囊膜蛋白gp90,并通过Ni2+亲和层析柱对融合蛋白REV-His-gp90进行纯化,纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备了多克隆抗体;纯化的REV-GST-gp90蛋白用于检测多克隆抗体效价。【结果】pET-28a-REV-gp90和pGEX-6p-1-REV-gp90表达质粒构建成功,通过SDS-PAGE验证蛋白能在大肠杆菌BL21菌株中表达;Western-blot检测结果显示制备的多克隆抗体具有良好的反应性和特异性;采用间接ELISA法检测抗血清效价为1∶64000;IFA结果显示,制备的多克隆血清能与REV特异性反应。【结论】研究制备的多克隆抗体效价高、特异性良好,为进一步开展REV囊膜蛋白的生物学特性研究及其特异性抗体应用奠定基础。
- 朱丽霖王后坤陈雪阳高可丽方春梁雄燕杨玉莹
- 关键词：原核表达囊膜蛋白多克隆抗体
- 一种畜牧舍用消毒装置
- 本实用新型公开了一种畜牧舍用消毒装置，包括固定钢筋挂钩、双通接头、转动套管、三通接头、连通水管、消毒液箱和小型吸水泵，所述固定钢筋挂钩下端连接有转动机构，且转动机构内固定有转动套管，所述三通接头的两端固定有连通水管，且连...
- 胡敏万春云杨玉莹
- 禽骨髓细胞瘤病自然病例的病理学研究被引量：21
- 2002年
- 对禽骨髓细胞瘤病显性型病鸡、ELISA阳性的隐性型病鸡和阴性对照鸡进行了病理学研究。结果表明 ,临床症状明显的显性型病鸡肝、脾、肾、睾丸 (或卵巢 )、肺等组织有灰白色结节状病灶和不同程度的肿胀 ,甚至在股骨或肋骨等处出现大小不一的硬固肿块 ,镜检病变部位有大量髓细胞样瘤细胞 ,呈典型的骨髓细胞瘤病的病理特征。电镜下瘤细胞病变明显 ,瘤细胞胞膜下疑似病毒样粒子 ;在自然病例肾悬液感染的鸡胚成纤维细胞培养物中巨噬细胞的膜性结构上发现增殖的病毒样凸起。ALV JELISA抗体检测试剂盒检出阳性、无明显临床症状和眼观病变的隐性型病鸡 ,光镜下骨髓、肝、卵巢、心肌等组织中可见与显性型相同的髓细胞样瘤细胞 ,但数量较少。ELISA抗体检测阴性对照鸡骨髓中胞浆含有嗜酸性颗粒的髓细胞明显少于阳性鸡 ,除在肝、卵巢等组织中偶尔出现外 ,其他组织很少见到。
- 赵振华成子强顾玉芳郝永清杨玉莹王海燕高娃张二芹
- 关键词：自然病例骨髓细胞瘤病病理学禽类
- 禽白血病造血组织肿瘤
- 禽白血病(avian leucosis,AL)是由反转录病毒科禽白血病/肉瘤病毒群的成员引起具有传感性的、以禽类造血组织中某些细胞成分过度增生为主同时也有其他组织源性的肿瘤性疾病.本病的发病率不高,但对养禽业的影响却很大...
- 赵振华杨玉莹成子强顾玉芳佟程浩王金玲
- 关键词：禽白血病造血组织肿瘤病理学
- 文献传递
- 小鼠脾细胞体内、体外及脾内接种免疫动态学的研究
- 1995年
- 本研究以Ｏ型口蹄疫病毒（ＦＭＤＶ）为免疫原，通过对Ｂａｌｂ／ｃ鼠的脾内接种、尾静脉注射、脾细胞的体外培养及体外免疫，分别用ＥＬＩＳＡ法进行了免疫动态学的分析。并对小鼠脾细胞体外的生长动态亦进行了研究。实验结果表明，体外免疫及脾内接种免疫其应答反应快、抗原用量少，具有体内免疫许多不具备的优点。文中对体外免疫的可靠性亦进行了分析。
- 杨玉莹李巧贤任向远王潜渊
- 关键词：小鼠脾细胞接种
- 鸭巴氏杆菌病病理学诊断
- 2014年
- 送检病鸭经临床诊断、细菌分离培养及病理学诊断,确诊为鸭巴氏杆菌病。其病理学变化表现为肝细胞脂肪性变性及中性粒细胞浸润;脾脏淋巴性细胞增生;肾组织内瘀血、肿胀等。病原学检测为巴氏杆菌。
- 易艳芳顾玉芳杨玉莹梁雄燕
- 关键词：巴氏杆菌病理学
- 单增李斯特菌InlB的原核表达与多克隆抗体制备被引量：1
- 2020年
- 为了进一步研究单增李斯特菌分泌的细菌侵袭相关蛋白内化素B(InlB)的功能,试验通过原核表达载体pET-28a分别表达InlB的N36~321和C392~630,并通过Ni^2+亲和层析柱对重组蛋白进行纯化,纯化的蛋白免疫Balb/c小鼠,制备多克隆抗体,通过Western-blot检测单增李斯特菌InlB的表达情况。结果表明:成功构建重组表达质粒及诱导表达重组蛋白,制备的针对InlB N端和C端的多克隆抗体均能特异性检测单增李斯特菌中的InlB,但不能通过免疫荧光检测该菌表面的InlB。说明本研究制备的多克隆抗体可进一步用于研究单增李斯特菌InlB的功能。
- 方小伟施鹏彭鼎杨玉莹方春
- 关键词：单增李斯特菌原核表达多克隆抗体
