杜承
- 作品数：53 被引量：38H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省自然科学基金中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 磺胺二甲嘧啶单克隆抗体的制备及其鉴定
- 2011年
- 目的制备磺胺二甲嘧(Sulfadimidine,SM2)啶单克隆抗体,并对其进行鉴定。方法经小鼠腹腔免疫SM2-BSA抗原,采用常规技术进行细胞融合,间接竞争ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,有限稀释法进行亚克隆,硫酸铵-辛酸法纯化抗体,并鉴定其抗体效价、杂交瘤细胞染色体数量、相对分子质量、抗体亚型、亲和力和特异性。结果筛选到1株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株3D7,细胞培养液上清和抗体效价分别为1∶6.4×102和1∶1.28×105;纯化后3D7抗体效价>1∶128 000,杂交瘤细胞染色体平均数为50±2对,分泌的抗体属于IgG1亚类,相对分子质量为164 280,亲和常数为6.09×108 M-1,与6种磺胺类药物及青霉素、庆大霉素和泰乐霉素交叉反应IC50大于1 mg/ml,交叉反应率小于0.01%。结论已成功制备了SM2单克隆抗体,该抗体能满足建立免疫学检测方法的需要。
- 王颖安宇李研东沈庆丰杜承柳增善罗云波
- 关键词：磺胺二甲嘧啶抗体单克隆
- 可抑制恶性疟原虫侵入的抗Pf332-DBL区单克隆抗体
- 本发明公开了可抑制恶性疟原虫侵入的抗Pf332-DBL区单克隆抗体，能与恶性疟原虫Pf332膜蛋白质DBL区功能性多肽，其氨基酸序列如SEQIDNo.2所示，特异性结合；它可以通过用带His标签的DBL重组蛋白免疫小鼠，...
- 姜宁陈启军杜承尹继刚陆慧君
- 一种可抑制恶性疟原虫侵入的抗Pf332-DBL区单克隆抗体
- 本发明公开了一种可抑制恶性疟原虫侵入的抗Pf332-DBL区单克隆抗体，能与恶性疟原虫Pf332膜蛋白质DBL区功能性多肽，其氨基酸序列如SEQ ID No.1或2所示，特异性结合；它可以通过用带His标签的DBL重组蛋...
- 陈启军杜承姜宁尹继刚陆慧君
- 马传染性贫血病毒强毒株gag和gp45基因的体内进化分析
- 2012年
- 为研究马传染性贫血病毒(EIAV)强毒株体内进化规律,将3匹马分别以1×105 TCID50/匹接种EIAVLN40强毒株后,在不同时间点采取外周血,分离单核白细胞。提取白细胞中的DNA,并以其为模板,应用套式PCR技术分别扩增EIAV前病毒DNA的p15,p9和gp45基因,经克隆后进行序列分析。结果显示,与接种前EIAVLN40相比较,p15基因核苷酸和氨基酸平均差异率分别为1.8%(0～2.9%)和1.7%(0～3.6%);p9分别为2.5%(0.3%～3.8%)和2.9%(0～4.8%);gp45-Ⅰ分别为1.3%(0.3%～2.1%)和1.8%(0～3.2%),gp45-Ⅱ分别为2.1%(0～3.4%)和2.6%(0～4.7%)。在EIA发热期,每个基因核苷酸和氨基酸差异率最小;在亚临床阶段,每个基因平均差异率总体上相对较高。氨基酸变异位点分析发现,发病期(2-2、3-1)各基因氨基酸序列回复到亲本株EIAVLN40,其余时期p15基因氨基酸稳定变异位点16N/S、88T/S和112M/E;p9基因115E/G和122K/M;gp45-Ⅰ基因9T/F/L;gp45-Ⅱ基因21E/K和29G/S。此外,p15基因进化树结果显示,发热期(2-2、3-1)p15基因序列与EIAVLN40序列处于同一分支上,亚临床阶段大多数p15基因序列处于另一个大分支上;其他基因进化情况与p15基因类似。对EIAV p15、p9、gp45基因体内进化分析,有助于对EIAV在马体内感染进程的研究,为进一步研究EIAV持续感染和逃避免疫监视的机制提供参考。
- 刘强王雪峰王珊珊韦华冕杜承林跃智马建周建华王凤龙
- 关键词：马传染性贫血病毒P15基因
- ELR1和eCyclinT1转基因小鼠的构建及其对马传染性贫血病毒易感性的研究
- 马传染性贫血病(Equine infectious anemia,EIA),是由马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus,EIAV)感染引起的马属动物的一种传染病,以持续感染、反复发...
- 杜承马建李云飞刘强林跃智王雪峰周建华孟庆文王晓钧
- 关键词：马传染性贫血病毒转基因小鼠
- 马传染性贫血病毒受体选择性剪接异构体的鉴定与分析被引量：1
- 2012年
- 马慢病毒受体1(ELR1)是马传染性贫血病毒(EIAV)唯一受体,属于肿瘤坏死因子受体超家族。为研究ELR1 mRNA选择性剪接的状况,本研究从EIAV靶细胞的巨噬细胞中提取RNA,经RT-PCR扩增并克隆测序。结果显示,ELR1 mRNA具有不同形式的选择性剪接异构体,主要表现为插入和缺失形式。插入片段为153 bp,位于序列的786 nt～787 nt之间,而缺失型异构体丢失了ELR1序列的415 nt～478 nt。不论序列的插入或缺失,均导致该基因编码框移位。特别是插入型异构体,编码框在跨膜区之前遇到终止密码子,造成翻译的提前终止,推测产生截短的可溶性ELR1。这些剪接异构体的鉴定为研究EIAV与机体的相互作用提供了新的研究方向。
- 杨非张淑琴杜承林跃智周建华
- 关键词：选择性剪接马传染性贫血病毒受体RT-PCR
- 马MAVS MAb的制备及其应用于EIAV感染机制的初步研究被引量：3
- 2022年
- 线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)是机体先天免疫系统中维甲酸诱导基因I(RIG-I)信号通路唯一的接头蛋白,该蛋白对I型干扰素(IFN-I)的激活以及促炎因子的表达至关重要。因人源MAVS抗体不能识别马MAVS(eqMAVS)蛋白,限制了对马属动物病原体调控RIG-I信号通路的研究。为了制备eqMAVS单克隆抗体(MAb),本研究利用PCR方法克隆缺失跨膜域的eqMAVS(eqMAVSΔTM)并构建重组蛋白表达质粒pET32a-eqMAVSΔTM-his、pGEX-6p-1-eqMAVSΔTM-GST,转化大肠杆菌Rosetta(DE3)并经IPTG诱导后,分别利用His和GST亲和层析柱纯化,结果获得eqMAVSΔTM-his蛋白和eqMAVSΔTM-GST蛋白。以eqMAVSΔTM-his蛋白为免疫原免疫6周龄BALB/c小鼠,经常规免疫程序后进行杂交瘤细胞融合,并以eqMAVSΔTM-GST为检测蛋白以筛选杂交瘤细胞。结果显示共获得两株阳性杂交瘤细胞(4E9、3C4)。选用4E9制备腹水并将MAb纯化后,利用SDS-PAGE鉴定纯化的MAb,结果显示,制备的MAb包含重链、轻链,表明MAb纯化成功。对MAb进行亚类鉴定,结果显示其重链均为IgM型,轻链均为kappa型。间接ELISA检测结果显示1 mg/mL MAb的效价可达2×105。将其应用于western blot检测马单核巨噬细胞eMDM和马胎皮肤细胞NBL-6内源性的MAVS和在HEK293T细胞中过表达的eqMAVS;另外,将MAb应用于western blot检测不同剂量EIAV感染NBL-6后内源性eqMAVS蛋白的表达变化。结果显示,该MAb能够特异性识别NBL-6细胞和eMDM细胞内源性表达的eq MAVS蛋白,以及能够特异性识别HEK293T细胞中过表达的eqMAVS蛋白。EIAV感染试验结果显示,随着EIAV感染剂量的增加,内源性eqMAVS蛋白的表达量递减。上述结果表明,本研究制备了eqMAVS的MAb,并利用该MAb首次证明EIAV对eqMAVS的表达具有负调控作用,该MAb为研究EIAV对抗马源RIG-I信号通路的作用机制提供了重要的研究工具。
- 孙克会王欣慧陈克伟杨光璞王晓钧杜承郝力力
- 关键词：原核表达蛋白纯化
- 马TRIM5α激活天然免疫信号通路的分子机制研究
- <正>天然免疫是宿主抵抗外来病原的第一道防线。TRIM5α是存在于多种宿主细胞内抗逆转录病毒天然免疫限制因子,可通过其SPRY结构靶向降解逆转录病毒衣壳蛋白(CA)和激活天然免疫来发挥抗病毒功能。我们发现,相对其它动物而...
- 那雷王翠辉林跃智王雪峰杜承王晓钧
- 关键词：信号通路分子机制
- 文献传递
- 马传染性贫血病毒弱毒疫苗env基因变异及其生物学意义
- <正>马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗是唯一成功应用的慢病毒弱毒疫苗,为慢病毒疫苗研究提供了独特模型。EIAV囊膜蛋白(Env)是病毒与靶细胞受体结合的主要区域,同时也是病毒的主要免疫原,与诱导中和抗体的产生密切相关...
- 王雪峰陈杰林跃智杜承那雷王晓钧
- 关键词：马传染性贫血病毒弱毒疫苗基因变异生物学
- 文献传递
- EIAV强弱毒感染后靶细胞差异表达microRNA的研究
- 同属慢病毒的马传染性贫血病毒(EIAV)与艾滋病毒相似。我国研制的EIAV弱毒疫苗,是首例经大规模应用证实安全、有效的慢病毒疫苗。阐明该疫苗的作用机理,将为其他慢病毒疫苗研究提供借鉴。前期研究表明,EIAV弱毒疫苗株与强...
- 杜承韩亚儒林跃智王晓钧
- 关键词：马传染性贫血病毒MICRORNA
- 文献传递
