杜凤
- 作品数：16 被引量：27H指数：4
- 供职机构：中国科学院成都生物研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金四川省科技计划项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学理学更多>>
- 基于LAMP建立非洲猪瘟病毒的快速可视化检测方法被引量：10
- 2022年
- 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)由非洲猪瘟病毒(ASF virus,ASFV)引起,具有高度传染性和破坏性,给猪产业造成严重的经济损失,威胁全球食品安全;1921年在肯尼亚首次报告,欧亚多国也陆续报告了该病.该病目前没有商业疫苗和有效治疗方法,控制疫情最有效的办法是对感染和接触的猪立即扑杀并深埋.因此建立精准快速的检测方法对ASF的预防和疫情监测十分关键.基于环介导等温扩增技术建立了一步法可视化等温检测,选择ASFV的P72基因作为检测的靶标,构建含有该靶标的标准质粒样本,利用Real-time LAMP确定引物扩增的特异性和效率,通过筛选可视化染料、优化显色条件建立两种ASFV的等温比色检测方法,真实样本基因组可以在40 min内完成检测,可肉眼直接判断检测结果.本研究构建方法为非洲猪瘟的现场诊断和疫情监测提供了一种可靠、便捷、低成本的选择.
- 韦莹华丁盛董娟杜凤崔欣唐卓
- 关键词：非洲猪瘟病毒核酸检测环介导等温扩增技术可视化
- 体外筛选剪切DNA的DNA酶
- 2013年
- 为得到能够剪切单链DNA序列的人工DNA酶,通过体外筛选的方法,得到了一类DNA酶F-9.F-9的结构由两侧与底物结合区域和中间的酶活性中心组成;F-9在一定的Cu2+、Mn2+离子浓度下发挥催化作用,可以与底物结合形成二级结构.F-9可以剪切DNA序列,底物识别区域ACTG为保守序列.同时,对DNA酶的剪切位点作了进一步研究,证明F-9是一个多位点剪切的DNA酶.
- 张华帆王明齐陈浩东董娟杜凤周丽唐卓
- 关键词：体外筛选DNA酶催化活性
- 孔雀石绿和结晶紫在荧光检测中的比较被引量：5
- 2013年
- 为优选出三苯甲烷染料中的一种染料与G-四聚体结合开发为荧光定量报告体系,对孔雀石绿(Malachitegreen,MG)和结晶紫(Crystal violet,CV)与G-四聚体结合后的灵敏度和重现性进行了比较研究.首先,比较了4种不同DNA(hum21,short-hum21,double-strands,single-strand)分别与孔雀石绿和结晶紫结合后的荧光光谱,结果显示,两种染料均可区分以上4种DNA,但孔雀石绿的灵敏度更高.然后,将孔雀石绿和结晶紫应用到实时荧光检测中,进一步比较验证两种染料灵敏度,并考察两种染料的重现性,结果显示,孔雀石绿的重现性和灵敏度均优于结晶紫.由此,建立了孔雀石绿与G-四聚体结合的荧光定量报告体系.
- 赵永云杜凤董娟陈浩东周丽陈蓉唐卓
- 关键词：孔雀石绿结晶紫
- 一种PCR检测核酸的方法
- 本发明属于分子生物学技术领域，涉及核酸分析检测，具体涉及一种普适的利用核酸聚合酶5’-3’外切酶活性释放DNAzyme的PCR检测方法。在PCR体系中加入用DNAzyme标记或部分DNAzyme标记的寡核苷酸探针，用正反...
- 唐卓杜凤
- 文献传递
- 一种非改性探针及其在实时荧光PCR方法中的应用
- 本发明涉及一种非改性探针和用其进行实时荧光PCR检测的方法。本发明首次利用有机小分子硫磺素T来进行序列特异性的PCR检测，实现不开盖的实时荧光监测。本发明提供的非改性探针不需要任何额外的荧光标记，容易合成，合成成本比Ta...
- 唐卓杜凤何密鼓董娟黄鑫丁盛
- 文献传递
- 基于LAMP技术的动物源性成分快速检测方法
- 本发明属于动物源性成分真伪鉴定方法，具体地说是利用环介导等温扩增(LAMP)技术检测马源性成分DNA、牛源性成分DNA和羊源性成分DNA的方法。该方法根据马、牛、山羊的线粒体DNA设计了特异性的LAMP引物，并提供了配套...
- 唐卓王嘉钰董娟陈刚毅杜凤
- 文献传递
- 一种PCR终点可视化检测核酸的方法
- 本发明涉及一种基于硫磺素T和G‑四链体的不开盖就能实现现场可视化快速检测的PCR终点核酸检测方法。该方法可以准确检测核酸，特异性和灵敏度高、适用性广、检出限低，且不易污染。PCR完成后用实时蓝光观测仪进行肉眼观察，就能直...
- 唐卓杜凤何密鼓董娟黄鑫丁盛
- 文献传递
- 环状RNA快检方法的建立及在鼻咽癌检测中的应用
- 2023年
- 环状RNA(circRNA)作为一种潜在的肿瘤标志物,其检测对肿瘤的早期筛查和诊断具有重要意义.为了研究和开发circRNA快检方法,建立circRNA的逆转录实时荧光定量超快速聚合酶链式反应(RT-qVPCR)检测方法,并应用到鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)的相关检测中.基于超快速聚合酶链式反应(VPCR)技术,设计针对hsa-circ-0000284(circHIPK3)的引物和探针,通过优化退火温度、引物和探针浓度等条件,建立一种circRNA的快检方法;以内参基因GAPDH为对照,建立hsa-circ-0000284的相对定量方法;进一步收集鼻咽癌患者和鼻咽部良性病变患者的组织样本,对鼻咽癌和良性增生组织中的hsa-circ-0000284进行相对定量检测.所建立的circRNA RT-qVPCR快检方法只需25 min就能完成检测,重复性好,结果稳定可靠;hsa-circ-0000284在鼻咽癌中的相对表达量为9.67,在良性组织中的表达量为3.75,差异有统计学意义(F=16.3805,P<0.001).本研究表明所建立的circRNA RT-qVPCR快检方法较传统PCR核酸扩增的时间明显缩短;hsa-circ-0000284在鼻咽癌组织中的表达水平明显上升,有望成为鼻咽癌肿瘤标志物.
- 何陈彧董娟丁盛杜凤徐开伦
- 关键词：鼻咽癌肿瘤标志物PCR
- 基于核酸适配体的蛋白靶向降解工具用于EGFR的降解
- 2024年
- 目前基于核酸的蛋白质水解-靶向嵌合体(PROTAC)为降解一些不可成药的靶标提供了强有力的工具.我们报告过基于核酸适配体的PROTAC作为一种拓宽靶标的降解工具,目标蛋白RNA适配体作为靶向降解弹头,异双功能分子Dth可以将E3泛素连接酶招募到基因编码的适体RNA支架上,促进靶蛋白的泛素化并将其降解.通过将膜蛋白表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)的适配体在RNA支架上表达,小分子Dth适当浓度作用下,实现了对EGFR的选择性降解,将此工具的靶标扩展到膜蛋白.另外,通过在RNA支架上共同表达EGFR和p50的适配体,小分子Dth适当浓度作用下,实现了同时对p50和EGFR的降解.本研究基于核酸适配体的PROTAC降解工具提供了一个通用平台,可用于后续生化研究和潜在的疾病治疗.(图4表1参25)
- 许燕袁奕杜凤董娟崔欣王启卫唐卓
- 关键词：核酸适配体表皮生长因子受体
- 一种利用活性炭提取中药材DNA的方法
- 2019年
- 当前市场上中药材出现来源混乱、真假难辨的现象,因此近几年DNA分子诊断迅速成为了鉴定中药材的重要工具。要进行DNA检测,DNA的提取是其中非常重要的一个步骤。但是当前的DNA提取方法多有毒性大、操作繁琐、价格高、耗时长等缺点,所以开发一种低毒、简易、价低、省时的DNA提取方法尤为重要。我们选用150 mmol/L Na Cl作为裂解液,加入活性炭(Activated carbon,AC)后,藏红花、甘草、三七花等的DNA模板量都有很大程度的增加,尤其是藏红花的模板量增加了超过30倍,并且整个DNA提取过程不超过10 min。由此可见,这种简易提取中药材DNA的方法是极具潜力的。
- 卢雪陈蓉杜凤唐卓
- 关键词：中药材DNA提取活性炭
