李秀丽
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠附睾分泌的防御素Defb48的原核表达及纯化被引量：1
- 2010年
- 目的:获取小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因并原核表达、纯化,为研究其功能奠定基础。方法:提取小鼠附睾组织的总RNA,用RT-PCR技术扩增出不含信号肽的Defb48编码序列,将2段Defb48编码序列串联克隆至原核表达载体pET28(a)中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达重组蛋白;用镍柱进行重组蛋白的纯化,然后进行SDS-PAGE和Western印迹分析鉴定。结果:获得实验所需小鼠附睾分泌的防御素Defb48的基因序列,测序结果与已发表的基因序列一致;在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达了His-Defb48融合蛋白,经Western印迹分析,在相对分子质量18 000处有特异的蛋白条带,镍柱纯化后获得纯度较好的融合蛋白。结论:克隆了小鼠附睾分泌的防御素Defb48基因,并在大肠杆菌Rosetta(DE3)中表达纯化出融合蛋白,为制备其多克隆抗体,进而进一步研究Defb48的功能奠定了基础。
- 陈立瑾田利源李秀丽陈树林汪莉王玉民
- 关键词：Β-防御素原核表达
- 小鼠精囊自身抗原的原核表达和纯化
- 2009年
- 目的:在原核细胞中表达小鼠精囊自身抗原(SVA),并对表达产物进行鉴定和纯化。方法:提取小鼠附睾组织总RNA,RT-PCR获得SVA的cDNA,设计并合成特异引物序列,进一步扩增出不含信号肽的SVA编码序列,连入原核表达载体pET28a中,经酶切和测序鉴定正确的重组质粒转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达,Western印迹分析表达产物His-SVA,采用Ni-NTA纯化融合蛋白His-SVA。结果:原核表达获得融合6个组氨酸的SVA,用抗His单克隆抗体进行Western印迹鉴定,检测到相对分子质量约18×103的目的蛋白,与理论值一致;经Ni-NTA纯化获得较高纯度的His-SVA融合蛋白。结论:获得了在大肠杆菌中表达的小鼠附睾蛋白SVA,为后续研究其对小鼠生殖的影响奠定了基础。
- 田利源李秀丽汪莉王玉民
- 关键词：精子获能原核表达纯化
- 小鼠附睾分泌蛋白Fam12b的原核表达与纯化
- 2011年
- 本研究旨在克隆小鼠附睾基因fam12b,构建pET28(a)-fam12b-fam12b原核表达重组质粒,从大肠杆菌Rosetta(DE3)中获得融合蛋白。应用RT-PCR方法从小鼠附睾中扩增出fam12编码序列,串联克隆至原核表达载体pET28(a),转化大肠杆菌Rosetta(DE3)细胞,诱导表达,Ni-NTA纯化融合蛋白。结果显示,获得小鼠附睾基因fam12b,纯化后的融合蛋白经过SDS-PAGE和Western印记分析鉴定,在相对分子质量31kD处有特异的条带,并获得高纯度融合蛋白。本研究成功克隆了小鼠附睾基因fam12b,并从Rosetta(DE3)中获得高纯度融合蛋白,为进一步研究Fam12b的功能创造了条件。
- 陈立瑾田利源李秀丽汪莉王玉民陈树林
- 关键词：分泌蛋白原核表达
- 小鼠β-防御素30的原核表达和纯化
- 2010年
- 目的:在原核细胞中表达小鼠β-防御素30(DEFB30),并对表达产物进行鉴定和纯化。方法:用RT-PCR方法扩增小鼠Defb30的cDNA序列,将2个拷贝的cDNA序列串联连入原核表达载体pET28(a),构建重组表达载体pET28(a)-Defb30,并将重组表达载体转化至大肠杆菌Rosetta(DE3),IPTG诱导表达,以Western印迹分析表达产物His-DEFB30,用Ni-NTA亲和柱纯化融合蛋白。结果:构建了Defb30基因的原核表达载体,经IPTG诱导,相对分子质量约15×103的融合蛋白获得表达,Western印迹分析证实此蛋白即为目的蛋白,经Ni-NTA柱亲和纯化,获得了高纯度的融合蛋白His-DEFB30。结论:获得了在大肠杆菌中表达的DEFB30,为研究该蛋白的免疫避孕效果、抗菌活性奠定了基础。
- 田利源胡亚欧李秀丽汪莉王玉民
- 关键词：抗菌肽原核表达免疫避孕
- 一组鼠特异性抗生育作用的多肽
- 本发明公开了6种免疫抗生育多肽片段均具有很好的免疫原性，能够刺激机体产生特异性抗体，诱导抗生育作用。从抗原多肽免疫小鼠与对照组(KLH对照组)免疫小鼠的生育对比发现，6条多肽抗原混合组免疫可使雄性和雌性小鼠的产仔率明显下...
- 王玉民汪莉田利源侯小强李秀丽
- 文献传递
- 一组鼠特异性抗生育作用的多肽
- 本发明公开了6种免疫抗生育多肽片段均具有很好的免疫原性，能够刺激机体产生特异性抗体，诱导抗生育作用。从抗原多肽免疫小鼠与对照组(KLH对照组)免疫小鼠的生育对比发现，6条多肽抗原混合组免疫可使雄性和雌性小鼠的产仔率明显下...
- 王玉民汪莉田利源侯小强李秀丽
- 文献传递
- 小鼠附睾分泌蛋白Spink12的原核表达与纯化被引量：1
- 2010年
- 目的原核表达带有His标签的小鼠附睾蛋白Spink12,对表达产物进行鉴定和纯化,以研究Spink12的免疫避孕效果。方法提取小鼠附睾组织总RNA,RT-PCR扩增不含信号肽的Spink12蛋白编码序列,以NdeⅠ和EcoRⅠ酶切后,将其连入原核表达载体pET28(a);经酶切和测序鉴定正确的重组质粒pET28(a)-Spink12,转化大肠埃希菌BL21感受态细胞。融合蛋白经IPTG诱导表达,产物经SDS-PAGE电泳和Western blotting免疫印迹鉴定。用Ni-NTA在非变性条件下利用不同的咪唑梯度浓度纯化融合蛋白6×His-Spink12。结果酶切和测序结果显示成功构建出原核表达载体pET28(a)-Spink12。重组质粒转化大肠埃希菌BL21并经IPTG诱导,SDS-PAGE电泳显示表达出约9kD的融合蛋白6×His-Spink12,与理论分子量相符。融合蛋白的表达量占菌体蛋白总量的23.5%。用抗His单克隆抗体进行Western blotting免疫印迹鉴定,检测到同样大小的条带。经纯化获得较高纯度的融合蛋白6×His-Spink12,纯度达91.1%。结论成功表达并纯化了融合蛋白6×His-Spink12,为进一步研究Spink12的免疫避孕效果奠定了基础。
- 田利源李秀丽汪莉王玉民
- 关键词：蛋白酶抑制剂原核表达免疫避孕
