李勐 作品数:21 被引量:69 H指数:5 供职机构: 东北农业大学 更多>> 发文基金: 国家科技支撑计划 黑龙江省“十五”科技攻关项目 黑龙江省科技攻关计划 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 轻工技术与工程 医药卫生 更多>>
牛免疫球蛋白G轻链、重链分离纯化及其抗血清的制备 免疫球蛋白(Immunoglobulin,Ig)即是抗体,1964年国际卫生组织把具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋白统一命名为免疫球蛋白。在机体内Ig主要以分泌型和膜型两种形式存在,前者主要存在于血液、组织液及外... 李勐关键词:轻链 重链 抗血清 动物免疫学 分离纯化 文献传递 一种牛干扰素-α多肽基因 一种牛干扰素-α多肽基因,它涉及一种牛干扰素-α基因。它解决了目前牛干扰素-α基因在原核表达体系内存在低表达和构建表达载体后转录的mRNA翻译活性低的问题。本发明牛干扰素-α多肽基因序列如SEQ ID NO:1所示。本发... 王君伟 孙仰峰 李勐 李文辉文献传递 一株Asia1型口蹄疫病毒的全基因组序列测定及比较分析 被引量:2 2008年 参考GenBank上已发表的口蹄疫病毒(FMDV)全长基因组序列,设计了覆盖基因组全长的数对引物,通过RT-PCR方法对1株Asia 1型(简称As01)FMDV进行分段克隆及序列测定,将测序结果利用软件进行拼接。结果表明,该毒株的FMDV基因组[不含poly(C)]全长8 180 nt,其中编码区为6 987 nt,5'和3'非编码区(UTR)分别为1 078 nt和95 nt,3'UTR之后为20 nt的poly(A)尾巴。将As01株与其他FMDV参考毒株利用分子生物学软件进行多序列比对分析表明,As01株与Asia 1/Jiangsu/China/2005、Asia 1/Isrl/3/63、ZB/CHA/58等Asia 1型FMDV遗传进化关系较为密切,而与O型和A型FMDV遗传关系较远。 李爽 李勐 高明春 于力 周国辉 王君伟关键词:口蹄疫病毒 基因组 鉴别诊断口蹄疫的表位抗原的基因序列 鉴别诊断口蹄疫的表位抗原的基因序列,它涉及了鉴别诊断口蹄疫的抗原的基因序列。本发明解决了现有的口蹄疫鉴别抗原会出现非特异性反应,造成检出假阳性的问题。本发明的鉴别诊断口蹄疫的表位抗原的基因序列长度分别为72bp、177b... 王君伟 高明春 马波 李勐 张润祥文献传递 猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段克隆序列分析及原核表达 被引量:4 2005年 猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV) S蛋白可诱导中和抗体 ,是主要保护性抗原 ,N端抗原位点 B和 C在猪呼吸道冠状病毒(PRCV)中缺失[1 ,2 ,5] 。体外扩增 TGEV S基因 B、C抗原位点 35 7bp片段 (TS)。核苷酸序列与氨基酸同源性分析表明该片段较为保守。将 TS克隆到原核表达载体 p GEX- 6 P- 1中 ,转化大肠杆菌中。经 IPTG诱导后 ,SDS- PAGE分析目的蛋白与谷胱苷肽硫转移酶 (GST,大小约为 2 6 ku)融合后大小约为 4 0 ku,目的蛋白分子量约为 13.2 ku,优化表达条件后表达量达 37.9% 胡森 姜骞 师东方 李勐 于天飞 王君伟关键词:C抗原 点片 克隆 S蛋白 猪传染性胃肠炎病毒 TGEV 牛IFN-α基因高效表达及纯化的研究 被引量:7 2008年 基于对RNA二级结构的预测和密码子偏性计算,通过计算机辅助软件进行牛IFN-α基因优化,经人工合成优化后的基因与pWL表达载体连接后诱导表达,并对表达条件进行优化。SDS-PAGE分析表明,其产物分子量约为17ku,最优表达条件下蛋白表达量占菌体总蛋白的33%,表达产物以包涵体形式存在。经过包涵体溶解、初步复性后利用CM Sepharose Fast Flow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用梯度法进行牛α-干扰素包涵体蛋白质的纯化复性。结果表明,梯度离子交换层析法能有效地复性牛α-干扰素包涵体,复性后的重组牛α-干扰素的纯度达95%,通过离子交换层析柱纯化和复性后,重组牛α-干扰素在MDBK/VSV细胞系上的抗病毒活性为5.56×106u/mg。 孙仰峰 李文辉 李勐 高明春 王薇 魏双施 王君伟关键词:抗病毒活性 纯化 免疫单扩散法检测牛初乳IgG含量方法改良及牛初乳样品的检测 被引量:1 2008年 采用改良后的琼脂免疫单扩散法检测本地荷斯坦奶牛产后7d的初乳样品中IgG含量。结果表明,母牛产犊后7d内,乳汁中IgG含量变化很大,变动范围为118.59~0.86mg/mL。每次挤乳IgG含量下降都很快,特别是前三次挤乳,每次IgG浓度下降率近50%;到第8次,已经降到10mg/mL以下。所以生产乳制品应以前7次挤出的初乳为原料最佳,若笼统地以3d、5d或7d内初乳为原料,产品中IgG含量不仅低,而且每批次差异很大。 李忠秋 刘春龙 李勐 王君伟关键词:牛初乳 IGG Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白B细胞线性表位的鉴定 被引量:4 2009年 为了对Asia1型口蹄疫病毒VP2蛋白进行抗原表位作图,设计了7个相互重叠15个氨基酸、覆盖整个VP2蛋白的重叠短肽,经克隆并在大肠杆菌中实现了融合表达。用Asia1型口蹄疫感染血清对7个融合蛋白进行免疫印迹分析,结果初步鉴定出VP2蛋白B细胞线性抗原表位位于氨基末端的第1-44氨基酸区域,并且证实O型、A型、C型口蹄疫标准血清和感染SAT2型口蹄疫康复期的牛血清也能识别融合蛋白F1(1-44 aa)。在此基础上,针对F1(1-44 aa)短肽,设计了6个相互重叠5个氨基酸的短肽片段,进一步鉴定出了VP2蛋白B细胞线性表位位于氨基末端的第6-15氨基酸区域。 徐宗香 高明春 李勐 李爽 刘思莹 葛兰云 张润祥 马波 王君伟关键词:口蹄疫病毒 VP2蛋白 鹅细小病毒VP1与VP3基因非重叠序列原核表达蛋白及其制备方法 本发明提供的是一种鹅细小病毒VP1与VP3基因非重叠序列原核表达蛋白及其制备方法。本产品制备过程包括:(1)、设计扩增鹅细小病毒VP1与VP 3基因核苷酸非重叠序列的特异性引物;(2)、通过PCR扩增获得VP1与VP3基... 王君伟 布日额 马波 李勐 吴金花 刘洪雨文献传递 鹅细小病毒VP1与VP3非重叠序列的克隆与原核表达 被引量:18 2003年 根据鹅细小病毒 GPV H1株基因组核苷酸序列设计了一对引物 ,对其结构蛋白 VP1与 VP3非重叠核苷酸序列进行 PCR扩增 ,并克隆到表达性载体 p GEX- 6 p- 1,经酶切鉴定筛选出阳性克隆 ,并转化到大肠杆菌 BL 2 1(ED3) plys S进行原核表达 ,并用 SDS- PAGE鉴定 ,结果表明融合蛋白在表达性细菌 BL2 1中重获得了高效表达。 布日额 王君伟 吴金花 李勐 马广鹏 Ulrich Neumann关键词:细小病毒 VP1 VP3 原核表达 结构蛋白