方瑾
- 作品数：89 被引量：196H指数：7
- 供职机构：中国医科大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省教育厅科技攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学理学更多>>
- 抗人大肠癌单链抗体基因的克隆与表达被引量：3
- 2002年
- 背景与目的:单链抗体相对于完整抗体具有免疫源性低、对肿瘤组织穿透力强的特点,日益成为肿瘤诊断和治疗的良好导向载体。本研究的目的是将抗人大肠癌单克隆抗体ND-1的重链可变区VH和轻链可变区VL基因借助一短肽序列(Gly4Ser)3进行重组,构建单链抗体基因ND-1scFv,并使其在大肠杆菌中表达。方法:采用RT-PCR技术从能够分泌ND-1单抗的鼠杂交瘤细胞中扩增VH和VL基因,通过重叠延伸拼接PCR在VH和VL基因间引入连接短肽,体外构建ND-1scFv基因,经过常规转化和筛选,将其克隆至PET-28a(+)表达载体,由IPTG诱导在大肠杆菌BL21中表达为ND-1scFv与His-Tag的融合蛋白。表达产物用Ni-NTAresin亲和层析方法纯化,并采用ELISA方法检测其免疫活性。结果:序列分析表明,ND-1scFv基因全长732bp,VH354bp位于上游;VL330bp位于下游。SDS-PAGE显示,重组蛋白相对分子量30kDa,与预期结果一致。scFv表达产物以不溶性包涵体形式存在,经亲和层析纯化后蛋白纯度达94%。ELISA结果显示scFv保留了与亲本抗体ND-1相似的免疫活性,结论:成功地构建了抗人大肠癌单链抗体ND-1scFv,并在大肠杆菌中获得了较高水平的功能性表达。
- 方瑾宋今丹
- 关键词：克隆单链抗体大肠肿瘤基因表达
- 一种靶向肿瘤相关成纤维细胞的核酸适配体及其应用
- 本发明属于生物医学技术领域，具体公开了一种靶向肿瘤相关成纤维细胞的核酸适配体及其应用。所述核酸适配体序列为5’‑AGCGTGGAGGATAATTAGGCATCCGTTCCGCCTAGGAAATTATTCAATCTACGC...
- 方瑾李婉明巴微
- 微流控芯片系统中测温及控温装置的研制被引量：6
- 2008年
- 报道了一种结构简单、成本低、操作方便、应用于微流控芯片系统中温度测量及温度控制的装置。该系统以CCD摄像机、荧光显微镜及图像采集卡构成的非接触荧光指示剂测温装置,实现了微流体空间温度分布测量以及随时间变化的温度测量。提出了以透明氧化铟锡薄膜玻璃作为加热元件,采用PID控制算法的温度控制平台,稳态时温度控制精度可达到±0.1℃。采用该测温和控温装置研究了玻璃微流控芯片微通道内溶液温度在空间上和随时间的变化情况,结果表明该方法简单、有效,可达到μm级的空间分辨率和ms级的时间分辨率。
- 戴敬樊晓峰方瑾徐章润
- 关键词：温度测量温度控制
- “七年制早期科研训练”实践体会及建立“学习型组织”的初步设想
- 实施“七年制早期科研训练”是中国医科大学培养创新型高级医学人才的重要举措,细胞生物学教研室几年来的教学实践说明了让学生早期接触科研确实是培养学生科研技能和开启创新意识的有效途径。本文从训练的总体安排、师资配备、教学监督与...
- 张惠丹方瑾
- 关键词：学习型组织
- 文献传递
- 肿瘤相关抗原在人大肠癌中的表达被引量：6
- 2007年
- 目的应用ND-1单抗和抗CEA单抗对大肠癌细胞的标记情况对比,探讨LEA在大肠癌中的表达及意义。方法采用流式细胞仪和免疫细胞化学染色检测大肠癌细胞系LEA和CEA的表达。并采用间接ELISA法测定LEA和CEA单抗对大肠癌细胞系的特异性。应用免疫组化检测其在大肠癌组织中的表达。结果流式细胞仪检测显示,LEA抗原在CCL-187、CX-1、CLone A和CCL-229细胞表达的阳性峰平均荧光强度呈递减趋势,并且强于CEA的表达量(P<0.01)。LEA在高分化大肠癌细胞系CCL-187和CX-1高度表达,并且低侵袭大肠癌细胞系CCL-187和CX-1LEA表达量高于高侵袭大肠癌细胞系CLoneA和CCL-229(P<0.01)。ELISA检测表明,与抗CEA单抗相比,ND-1单抗对大肠癌细胞具有很强的特异性结合力(P<0.01)。LEA的表达阳性率随大肠腺癌组织分化程度降低而下降(P<0.01),而且对高分化腺癌表现出更高的选择性。抗CEA单抗对高、中、低分化癌选择性相似(P>0.05)。结论LEA是更加特异的高分化大肠癌相关抗原。LEA可能与癌细胞的分化程度、侵袭力、恶性程度有关,LEA可作为早期诊断和判断大肠癌恶性程度的有用指标。
- 冯慧伊德林曾艳刘芙蓉方瑾宋今丹
- 关键词：肿瘤相关抗原大肠癌细胞
- Chip-based TGCE定量检测大肠癌K-ras基因点突变
- 2010年
- 目的建立一种定量检测大肠癌中K-ras基因突变比例的方法,并分析其与临床病理参数之间的关系。方法利用微流控温度梯度毛细管电泳(Chip-based temperature gradient electrophoresis,Chip-basedTGCE)对4例代表性大肠癌组织切片中的K-ras基因突变进行检测,通过AutoCAD软件计算出K-ras基因突变比例,结果经克隆测序校正后获得线性回归方程。应用该方法定量检测84例石蜡包埋大肠癌组织中的K-ras基因突变比例,并探讨其与临床病理参数的关系。结果 Chip-based TGCE检测K-ras基因突变比例与克隆测序检测K-ras突变比例的线性回归方程为y=0.993x-1.387,K-ras基因突变比例与肿瘤部位和浸润深度有显著相关性(P<0.05),检测获得的最低K-ras突变比例达到2.51%。结论该研究显示Chip-based TGCE是一种快速、灵敏、便捷、经济的基因突变比例定量分析方法。
- 张惠丹单连峰王晓楠任辉方瑾
- 关键词：微流控芯片K-RAS基因
- 肿瘤相关抗原LEA在人大肠癌细胞的表达研究
- 大肠癌是影响人类健康的严重疾患,且有日益增多和年轻化趋势。早期诊断是改善其预后的关键。我国的大肠癌发病率已由恶性肿瘤的第4位,仅次于肺癌、胃癌上升到第3位。大肠癌的恶性转化过程为正常粘膜上皮（大肠腺瘤性息肉）→粘膜过度增...
- 冯慧刘芙蓉张福会方瑾宋今丹
- 关键词：人大肠癌细胞肿瘤相关抗原大肠癌细胞系LEA
- 文献传递
- 细胞生物学学习辅导（第五章、第六章）
- 1994年
- 细胞生物学学习辅导（第五章、第六章）中国医科大学细胞生物教研室方瑾第五章细胞增殖重点内容细胞周期各时期的结构特点及发生事件。细胞分裂的实质是加倍的遗传物质平均地分配到两个子细胞中。有丝分裂与减数分裂的区别。难点内容减数分裂的特点。复习题【问题１】解释...
- 方瑾
- 关键词：细胞生物学学习辅导细胞分裂细胞增殖
- 正交试验考查MTT方法在测定大肠癌细胞药物敏感性实验中的影响因素被引量：6
- 1997年
- 正交试验考查ＭＴＴ方法在测定大肠癌细胞药物敏感性实验中的影响因素方瑾宋今丹关键词大肠肿瘤正交试验ＭＴＴ法药敏实验中图号Ｒ７３０．５ＭＴＴ法是一种简便易行，并已被广泛应用的能客观定量反映细胞存活情况的实验方法。但文献报道的具体做法各不相同，且实验结果受...
- 方瑾宋今丹
- 关键词：正交试验MTT法药敏实验
- 学生参与式细胞生物学实验微课的制作与应用被引量：5
- 2021年
- 微课作为新型教学资源在实验教学中发挥积极的促进作用,但在实验微课的制作中,学生的参与度很低。教师秉承以学生为中心的教学理念,基于学生需求,充分发挥学生的主观能动性,共同完成了由学生全程参与的三个实验演示型微课的制作,并以这些微课作为线上资源进行了实验课混合式教学的应用与评价。学生参与式实验微课的制作促进了学生的学习主动性和积极性,锻炼了团队合作能力,强化了师生沟通。实施的混合式教学收到了满意的教学效果,学生的知识留存率、操作规范性和实验成功率均有显著提升,学生的反馈意见也为优化微课质量、提升教学效果、促进学生全面发展提供了宝贵意见。
- 于敏田慧芝丁财有沈鸿飞徐明方瑾
- 关键词：细胞生物学实验教学参与式教学混合式教学
