方宏清
- 作品数：93 被引量：260H指数：8
- 供职机构：安徽大学更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 胸腺肽α1-Spl DnaX内含肽融合蛋白的切割动力学研究
- 2011年
- 目的:研究胸腺肽α1(Tα1)与Spl DnaX内含肽融合蛋白AS的体外切割动力学。方法:构建Tα1和SplDnaX内含肽的融合表达载体pET-AS,转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导获得可溶性表达的融合蛋白AS,用镍亲和层析纯化该蛋白;综合评价温度、β-巯基乙醇(β-ME)浓度和诱导切割时间对Spl DnaX内含肽介导融合蛋白AS自切割释放Tα1的影响。结果:在大肠杆菌中诱导表达了融合蛋白AS,经镍柱纯化获得该蛋白;随着温度升高和β-ME浓度增加,诱导切割时间延长,Spl DnaX内含肽介导的切割率逐渐增大;最终采用300 mmol/Lβ-ME切割24 h,融合蛋白的硫解切割率大于90%。结论:通过对Spl DnaX内含肽的诱导切割条件进行摸索,确定了最适宜的切割条件,为利用该方法制备Tα1和其他小分子多肽提供了技术基础。
- 曹赛戴红梅李树龙谢迟方宏清
- 关键词：胸腺肽Α1融合蛋白
- 高效合成青蒿素前体Amorphadiene的无质粒工程大肠杆菌构建
- 方宏清
- 多肽类药物制剂研究现状被引量：33
- 1998年
- 多肽类药物制剂研究面临的主要问题是多肽的稳定性不好、体内半衰期短和生物膜透过性差。本文综述了多肽类药物不稳定的原因；提高多肽稳定性的方法；多肽类药物制剂货架时间的确定；多肽类药物的分析手段；多肽类药物的控释研究；多肽的非注射途径给药研究。最后还提出了多肽类药物制剂研究的展望。
- 方宏清
- 关键词：多肽药物制剂稳定性
- 转铁蛋白/转铁蛋白受体介导的药物运输被引量：7
- 2004年
- 转铁蛋白 转铁蛋白受体介导的铁吸收过程是哺乳动物吸收铁的主要途径。近几十年的研究 ,对此过程有了充分了解。作为靶向配体 ,转铁蛋白可以介导多种金属的运输。最新研究表明转铁蛋白可以与抗癌药物、蛋白质、基因等形成复合物 ,靶向肿瘤、血脑屏障、快速分裂等大量表达转铁蛋白受体的组织。转铁蛋白偶联的药物具有靶向性强、毒副小的优点。综述了转铁蛋白
- 张豪沈明山方宏清王明刚陈惠鹏
- 关键词：转铁蛋白转铁蛋白受体内吞作用
- 一种制备N－末端乙酰化的胸腺素α1的方法及其专用工程菌
- 本发明公开了一种制备N－末端乙酰化的胸腺素α1的方法及其专用工程菌。该工程菌，是将胸腺素α1的编码基因与N－末端乙酰转移酶的编码基因导入宿主菌中得到的；所述N－末端乙酰转移酶为如下a)或b)的蛋白质：a)由序列表中序列7...
- 方宏清张旭戴红梅李树龙陈惠鹏
- 文献传递
- 碳源和IPTG诱导对工程菌MM2表达CTB的影响被引量：1
- 1996年
- 研究了不同碳源如葡萄糖、乳酸和乙酸以及IPTG诱导对工程菌MM2表达霍乱毒素B亚单位(CTB)的影响。在YC培养基中分别加入0.048mol/L的葡萄糖、0.102mol/L的乳酸和0.167mol/L的乙酸,它们在完全氧化后可产生相同的能量。结果表明,加入葡萄糖会大幅度降低ctb基因的表达水平,其原因和培养过程中pH值下降有关;加入乳酸可提高ctb基因表达水平1.15倍,且不抑制菌体生长;加入乙酸可提高ctb基因的表达水平0.9倍,但对菌体生长有抑制作用。不同时间及不同浓度的IPTG诱导未能提高ctb基因的表达水平,说明lac启动子对ctb基因的表达没有影响或影响很小。
- 方宏清赵四清于公义
- 关键词：霍乱毒素碳源大肠杆菌
- 大鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达与培养条件优化被引量：2
- 2005年
- 目的:利用毕赤酵母表达系统,表达大鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,同时探讨最优表达条件,为规模化发酵生产羧肽酶B奠定基础。方法:以RTPCR法从SD大鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,转入毕赤酵母Gs115细胞,在甲醇的诱导下表达目的蛋白。结果与结论:首次实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达;通过表达条件的优化,使用BMGY(pH6.0)培养基,添加0.5%(体积比体积)的酪蛋白水解物和3mmol/L的PMSF,于28℃,每隔12h补加0.5%(体积比体积)的甲醇,重组酵母Gs115proCPB表达的重组蛋白可达500mg/L,表达的目的蛋白占总蛋白的94%,活化后的重组CPB相对分子质量为35.1×103,与理论值(35.2×103)极相近。活性测定表明,重组proCPB活化后的CPB的比活力可达110U/mg(CPB参照品为180U/mg)。
- 王德解李彦英陈宏方宏清陈惠鹏
- 关键词：羧肽酶B毕赤酵母发酵培养
- 抗噬菌体工程菌的筛选被引量：7
- 2003年
- 噬菌体污染常引起溶菌,造成人力物力浪费。应用自发突变的原理成功地从溶菌液中筛选到抗噬菌体的工程 菌株;在发酵罐中培养,该菌株生长行为和表达水平没有变化。
- 李彦英方宏清陈惠鹏
- 关键词：噬菌体
- 发酵液中莽草酸分离纯化的工艺研究被引量：2
- 2013年
- 为了有效提取基因工程菌DHPYAAS-T7发酵液中的莽草酸,文章采用了离子交换色谱法对发酵液中莽草酸进行分离纯化。包括发酵液的预处理、离子交换树脂的选择、动态吸附、洗脱、脱色、脱盐以及纯度检测等过程。研究结果表明,所选的4种树脂中,717型强碱性阴离子交换树脂的吸附容量最大,发酵液的浓缩上样浓度为6.46 g/L。当调节发酵液pH值为6.0时,莽草酸成完全解离状态,能被树脂完全吸附。以1.0 mol/L的NH4Cl溶液洗脱,莽草酸回收率为91.7%。以HZ-816大孔吸附树脂进行脱色,莽草酸回收率为98.8%。以732型强酸性阳离子交换树脂进行脱盐,回收率为98.3%。将得到的莽草酸溶液进行结晶,HPLC检测纯度,晶体纯度达到98.6%。该工艺能有效的从发酵液中分离纯化高纯度的莽草酸,为莽草酸生产工业化奠定了基础。
- 王慧袁超陈凯窦洁方宏清周长林
- 关键词：莽草酸发酵液离子交换纯化
- 霍乱毒素B亚单位工程菌MM2的表达与lac启动子的关系被引量：3
- 1997年
- 研究了不同碳源(葡萄糖、乳酸和乙酸)以及IPTG诱导对工程菌MM2表达霍乱毒素B亚单位(CTB)的影响,ctb基因位于lac启动子的下游。在YC培养基中分别加入0.048mol/L的葡萄糖、0.102mol/L的乳酸和0.167mol/L的乙酸,它们在完全氧化后可产生相同的能量。结果表明,加入葡萄糖会大幅度降低ctb基因的表达水平,其原因和培养过程中pH值下降有关;加入乳酸可提高ctb基因表达水平1.15倍,且不抑制菌体生长;加入乙酸可提高ctb基因的表达水平0.9倍,但对菌体生长有抑制作用。不同时间及不同浓度的IPTG诱导未能提高ctb基因的表达水平,说明lac启动子对ctb基因的表达没有影响或影响很小。
- 方宏清赵四清于公义马清钧
- 关键词：疫苗
