徐健
- 作品数：4 被引量：16H指数：3
- 供职机构：首都医科大学附属北京同仁医院北京同仁眼科中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金北京市科技新星计划更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 超抗原活化的耐受性淋巴细胞防治高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究被引量：1
- 2009年
- 目的检测超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)体外活化的小鼠淋巴细胞的免疫耐受功能,探讨该细胞对小鼠高危角膜移植免疫排斥反应的防治作用。设计实验研究。研究对象14只BALB/C小鼠作为供体,28只C57BL/J小鼠作为受体。方法无菌取C_(57)BL/J小鼠脾脏淋巴细胞,制备成5×106/ml的混悬液,分别与SEB和刀豆蛋白A(ConA)体外共培养,MTT法测定细胞增殖。用流式细胞仪测定SEB和ConA体外活化的淋巴细胞在第0、6天时的CD4^+CD25^+调节性T细胞和CD3^+NK1.1^+NKT细胞百分比。以BALB/c小鼠为供体,C_(57)BL/J小鼠为受体,建立小鼠高危角膜移植动物模型,术后分为实验组、对照组,并分别结膜下注射0.05 ml培养6天的SEB活化的淋巴细胞悬液(浓度1×10~6个细胞/ml)及相同体积的生理盐水,术后观察记录植片的存活状况,并进行组织病理学检查和免疫组织化学检测。主要指标角膜植片平均存活时间,组织病理学及免疫组织化学染色检查淋巴细胞浸润情况。结果SEB、ConA与淋巴细胞共培养前OD_(570nm)值均为0.15±0.01(n=6),共培养后第3天为0.25±0.07和0.59±0.06,第6天为0.43±0.07和0.35±0.05。SEB组培养后的淋巴细胞中CD3^+NK1.1^+NKT细胞由0天时的(1.21±0.19)%升高到(5.67±0.25)%,CD4^+CD25^+调节性T细胞由(0.37±0.06)%升高到(0.98±0.12)%。活化淋巴细胞结膜下注射后小鼠角膜植片平均存活(28.60±3.75)天,而生理盐水组为(22.13±4.91)天,两者比较差异有统计学意义(P=0.006)。HE染色显示对照组植片中度水肿,角膜基质纤维板层结构排列紊乱,有炎性细胞浸润,植片中可见新生血管。而实验组植片仅轻度增厚,基质板层纤维排列规则,未见炎性细胞浸润及新生血管长入。免疫组织化学染色显示治疗组小鼠角膜植片中CD4^+和CD8^+淋巴细胞数量较对照组明显减少。结论SEB和ConA均能活化小鼠淋巴细胞并使其增殖。SEB组培养后的淋巴细胞中CD3^+NK1.1^+NKT�
- 徐健接英陈钰潘志强
- 关键词：超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B角膜移植免疫排斥反应
- 中药菊花决明散防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的研究被引量：6
- 2010年
- 目的探讨中药菊花决明散对大鼠高危角膜移植排斥反应的抑制作用。方法角膜缝线法诱导受体角膜新生血管,行穿透性角膜移植,建立大鼠高危角膜移植排斥反应模型。术后治疗组采用每天菊花决明散方0.1g/2mL灌胃,对照组采用生理盐水2mL灌胃,观察植片存活状况;应用组织病理学、免疫荧光组织化学,流式细胞仪等方法对受体局部和全身免疫状态进行检测。结果治疗组大鼠角膜植片存活时间为(14.50±3.55)天,明显长于生理盐水组的(8.25±0.71)天(P<0.01);治疗组术后虹膜铺片Fas、FasL的表达低于对照组;术后14天外周血中CD4+CD2+5FOXP3+阳性细胞治疗组[(14.81±2.58)%]高于对照组[(5.11±3.92)%],差异有统计学意义(P<0.01);治疗组房水中IL-2浓度低于对照组而IL-10浓度高于对照组。结论菊花决明散方对高危角膜移植排斥反应模型大鼠术后免疫排斥反应具有一定抑制作用。
- 王颖马东丽接英潘志强徐健武宇影
- 关键词：高危角膜移植免疫排斥
- 超抗原SEB活化耐受性NKT细胞亚群的研究被引量：7
- 2008年
- 目的:探讨超抗原SEB活化的效应细胞参与免疫耐受的NKT细胞亚群及分化特征。方法:采用C57BL/J小鼠脾细胞经SEB诱导,收集体外扩增10d的淋巴细胞为效应细胞,与刀豆蛋白(ConA)、脂多糖(LPS)和白介素-2(IL-2)共同培养3d,测定效应细胞对刺激剂的应答反应能力。在正常小鼠淋巴细胞与上述刺激剂反应的同时添加效应细胞,3d后测定效应细胞抑制正常淋巴细胞对刺激原的应答反应能力。用MTT染色方法记录细胞增殖的A值。以ConA活化的淋巴细胞做参照,用流式细胞术(FCM)解析了耐受性效应细胞中NKT细胞亚群并显示分化来源与功能的相关性。结果:与正常淋巴细胞对抗原应答反应能力相比,SEB活化的效应细胞对ConA、LPS和IL-2的应答反应能力明显降低,细胞生长的A值从正常组的0.80±0.04、0.60±0.03和0.55±0.07下降到0.60±0.05、0.30±0.05及0.27±0.04(P<0.01,n=3)。效应细胞抑制正常淋巴细胞对上述抗原的应答反应,尤其抑制ConA活化的T淋巴细胞的应答反应;A值分别由正常值降低到0.26±0.002、0.48±0.04及0.34±0.02(P<0.01,n=3)。效应细胞中CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+/NK1.1+NKT细胞亚群显著增加(P<0.05和P<0.01,n=4)。ConA活化的淋巴细胞是T淋巴细胞并包括CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。结论:超抗原SEB活化的耐受功能与CD4+NK1.1+、CD8+NK1.1+、TcRVβ8+NK1.1+NKT细胞亚群有关,它们由T细胞分化而来。CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞没有参与耐受性调节。
- 陈钰钟江徐健陈中才郭业磊金婷张继慧
- 关键词：超抗原SEB免疫耐受
- 超抗原SEB活化的NKT细胞亚群及耐受功能的研究被引量：4
- 2009年
- 目的研究多肽类抗原-超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)活化的NKT细胞亚群及耐受特征。方法小鼠脾细胞分别与SEB和ConA体外培养,MTT方法测定细胞增殖;特异性耐受特征的研究使用体外活化第3天的细胞,吸出上清后添加二次抗原ConA、LPS、IL-2,继续培养3 d,MTT方法测定细胞对二次抗原的应答反应能力。用流式细胞测定法解析SEB和ConA体外活化的淋巴细胞在第0、5、10和15天时的T和NKT淋巴细胞亚群。结果SEB和ConA均诱导了小鼠淋巴细胞在体外增殖;SEB活化的淋巴细胞对ConA、LPS和IL-2的二次应答反应能力消失,细胞增殖的OD570nm值由一次应答反应的0.433±0.07分别下降到0.19±0.01、0.14±0.02和0.15±0.04(P<0.01)。ConA活化的淋巴细胞的二次应答反应依然存在并依赖IL-2。SEB活化的淋巴细胞是CD4+NK1.1+和CD8+NK1.1+NKT细胞,而不是CD4-CD8-NKT细胞。ConA活化的淋巴细胞是CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞并包括了CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。结论除了α-Calcer脂多糖类抗原能够活化NKT细胞,多肽类超抗原SEB也能活化NKT细胞并具有特异性免疫耐受功能。能够介导免疫耐受的NKT细胞亚群可能是SEB活化的CD4+、CD8+NKT细胞而不是CD4-CD8-/CD3+NK1.1+NKT细胞。
- 陈钰钟江徐健陈中才张继慧金婷
- 关键词：超抗原SEB免疫耐受
